国家科技重大专项(2009ZX08010-020-2)
- 作品数：3 被引量：8H指数：2
- 相关作者：连正兴潘求真王静宜柳婧赵文博更多>>
- 相关机构：中国农业大学黑龙江八一农垦大学更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 外源Toll样受体2转基因绵羊的构建与鉴定被引量：3
- 2013年
- Toll样受体2(Toll-like receptor 2,TLR2)是识别革兰氏阳性细菌如引起羊乳腺炎、炭疽病、破伤风等病原体的一种重要受体,而TLR2过表达转基因羊为研究TLR2在防卫细菌侵染中的作用提供了一个理想的模型。因此,研究首先通过显微注射TLR-2过表达载体3S-Loxp-TLR2的方法对绵羊进行外源基因TLR2整合,然后采用PCR和Southern blot方法对其进行鉴定、拷贝数验证和表达量分析。结果表明,注射148个受精卵,共产下15只小羊,其中8只小羊检测为阳性,转基因率为53.3%;Southern杂交结果发现转TLR2小羊的基因组中外源TLR2基因均为单拷贝;且转基因羊TLR2 mRNA表达高于对照。说明成功构建了转TLR2基因羊。
- 张弘韬潘求真冯国兴邓守龙连正兴
- 关键词：绵羊TLR-2转基因
- 沉默羊传染性脓疱皮炎病毒DNA聚合酶基因的RNAi载体的构建
- 2012年
- 为了构建用于沉默羊传染性脓疱皮炎病毒(Orf virus,ORFV)DNA聚合酶基因的2种载体,试验选择病毒复制所必需的DNA聚合酶基因作为干扰靶基因,并设计靶基因的扩增引物,经PCR扩增后测序;随后,与Check2载体分别经PmeⅠ和NotⅠ双酶切,酶切后连接产生Check2-靶基因(Check2-D)重组质粒;然后,利用公用网站按照RNAi序列设计的原则,设计RNAi靶点序列并合成靶序列的Oligo DNA,退火形成双链DNA,与经XhoⅠ和HpaⅠ酶切后的pll3.7载体连接产生pll3.7-shRNA质粒;最后,利用磷酸钙法进行pll3.7-shRNA质粒和Check2-D质粒共转染293T细胞,利用双荧光检测系统试剂盒检测其RNA干扰效果。结果表明:成功构建了pll3.7-shRNA质粒和Check2-靶基因重组质粒,干扰效果最好,可达到91.0%。
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- 关键词：DNA聚合酶基因RNA干扰
- 通过CRISPR/Cas9技术打靶兔Myostatin基因被引量：6
- 2015年
- 细菌和古生菌利用自身的获得性免疫系统(CRISPR)抵御外来侵略,使外源DNA降解。为了基因突变兔子成纤维细胞的Myostatin基因,研究构建了CRISPR和g RNA质粒,当Cas9与g RNA摩尔数之比分别为1∶2、1∶1时进行转染到兔子成纤维细胞中,结果显示有打靶效率差异,经过鉴定均有碱基突变。结果表明:利用(CRISPR/Cas9)系统可成功突变目的基因。
- 柳婧潘求真赵文博王静宜宗严连正兴
- 关键词：转基因PAM
