国家自然科学基金(30560053)
- 作品数：15 被引量：49H指数：4
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- 云锡矿粉诱导人肺上皮细胞转化过程中FHIT蛋白和Ki-67抗原的表达及意义被引量：3
- 2010年
- 目的 探讨云锡矿粉诱导人肺上皮细胞转化过程中脆性组胺酸三联体（FHIT）蛋白和Ki-67抗原的表达及意义.方法 选用100 μg/ml的云锡矿粉染毒永生化人支气管上皮细胞BEAS-2B（B）及人胚肺成纤维细胞WI-38（W）,每次染毒72 h,隔代染毒直至第9代.自第11代起将上述细胞分组共培养.B100表示100μg/ml矿粉诱导的B细胞,W100表示100 μg/ml矿粉诱导的W细胞.分组如下：B组;B（W）组：与W共培养的B细胞;B（W100）组：与W100共培养的B细胞;B100组：100 μg/ml矿粉诱导的B细胞;B100（W）组：与W共培养的B100细胞;B100（W100）组：与W100共培养的B100细胞.应用免疫细胞化学法检测第16、26及36代各组上皮细胞中FHIT蛋白和Ki-67抗原的表达,以Ki-67蛋白阳性细胞数计算细胞增殖指数（PI）.结果 BEAS-2B上皮细胞中存在FHIT蛋白表达,各代B组、B（W）及B（W100）组细胞FHIT蛋白表达水平无明显差异.第16代,B100组细胞FHIT蛋白表达水平低于B组细胞,B100（W）组及B100（W100）组FHIT蛋白表达水平较B100组进一步降低.第26代,B100、B100（W）及B100（W100）组细胞FHIT蛋白表达水平进一步降低,而至第36代,经矿粉诱导转化的上皮细胞重现FHIT蛋白的表达,且B100组、B100（W）组、B100（W100）组表达强度呈递增趋势.第16、26及36代未经矿粉诱导的各组肺上皮细胞Ki-67阳性细胞数PI均＜3%.第16代,B100组、B100（W）组及B100（W100）组细胞Ki-67阳性细胞PI分别为4.40%、4.97%和7.87%,第26代时分别增加为7.33%、7.87%和12.66%,第36代时分别进一步提高为12.60%、19.73%和24.80%.与B100、B100（W）组比较,第16、26、36代B100（W100）组阳性细胞PI明显增高,差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 FHIT可能是云锡矿粉诱导BEAS-2B上皮细胞转化的一个作用靶点,云锡矿粉诱导可导致BEAS-2B上皮细胞Ki-67阳性细胞数增加,增殖活性增强.
- 边莉何永文付红梅阮永华高倩王春艳金克炜
- 关键词：抗原
- P53、MDM2、P21、P16在云锡矿粉诱导的人支气管上皮恶性转化细胞中的表达被引量：3
- 2007年
- [目的]研究P53通路相关蛋白在云锡矿粉诱导的细胞恶性转化过程中的变化情况。[方法]采用免疫荧光细胞化学染色技术分别检测正常人支气管上皮细胞株(BEAS-2B)、矿粉作用后第25代细胞(BEAS-MD-25)及软琼脂克隆形成细胞(BEAS-MD-C)中P53、MDM2、P21、P16的表达。[结果]P53、MDM2蛋白在BEAS-2B细胞中表达呈阴性,而在BEAS-MD-25及BEAS-MD-C细胞中均呈阳性;P21、P16蛋白在BEAS-2B细胞中表达呈阳性,随细胞转化进程表达不断下降;在BEAS-MD-25细胞中呈弱阳性;在BEAS-MD-C中呈阴性。[结论]转化细胞中P53、MDM2、P21、P16的表达异常,提示其P53通路已发生改变,第25代细胞P53蛋白的阳性表达,提示P53基因异常可能是细胞发生恶性转化的关键步骤之一。
- 周莉金克炜张天宝
- 关键词：P53通路免疫荧光细胞转化
- 个旧矿粉诱导的肺癌细胞中分化抗原9的表达及基因突变分析
- 2007年
- 目的探讨分化抗原9(CD9)在个旧矿粉诱导永生化人支气管上皮细胞(BEAS-2B)恶性转化为肺癌细胞过程中的异常表达和基因突变。方法以BEAS-2B为对照组(20瓶),以个旧矿粉体外诱导BEAS-2B所产生的恶性转化细胞为实验组(20瓶)。采用免疫细胞化学技术检测CD9蛋白在BEAS- 2B和恶性转化细胞中的表达。采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测CD9 mRNA在BEAS-2B和恶性转化细胞中的表达;并对其RT-PCR产物进行DNA序列测定。结果CD9蛋自在BEAS-2B中的表达率(100%,20/20)与其在恶性转化细胞中的表达率(35%,7/20)差异有统计学意义(P<0.01)。CD9 mRNA在BEAS-2B中的表达强度(0.91±0.09)明显高于其在恶性转化细胞中的表达强度(0.34±0.14),差异有统计学意义(P<0.01)。DNA序列测定显示,在BEAS-2B的恶性转化细胞中CD9基因存在2处点突变,在第231位置发生G-→T转换;在第119位置发生T→A转换,而且这2处的替代引起的错译突变均导致了编码氨基酸的改变,第40位氨基酸由谷胺酰胺(Gln,Q)变为组氨酸(His,H);第3位氨基酸由缬氨酸(Val,V)变为天冬氨酸(Asp,D)。结论CD9的表达缺失或下调以及基因突变在个旧矿粉诱导BEAS-2B恶性转化为肺癌细胞的过程中可能发挥重要作用。
- 梁锐金克炜王志强畅继武马富玲王一高倩
- 关键词：矿物质肺肿瘤
- 生存素和增殖细胞核抗原在个旧矿粉诱导的肺癌细胞中的表达
- 2007年
- 背景与目的云南个旧为矿工职业性肺癌的高发区,既往本课题小组以永生化人支气管上皮细胞(i mmortalized human bronchial epithelial cells,BEAS-2B)为靶细胞,以采自井下作业面的个旧矿粉为染毒物,成功建立了个旧矿粉体外诱导的恶性转化细胞模型。本研究旨在探讨生存素(survivin)和增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)在个旧矿粉诱导BEAS-2B恶性转化为肺癌细胞过程中发挥的作用。方法采用免疫荧光细胞化学和免疫组织化学技术检测survivin和PCNA在BEAS-2B及其恶性转化肺癌细胞中的表达。结果①免疫荧光细胞化学:survivin蛋白在BEAS-2B中无表达,在其恶性转化肺癌细胞中表达阳性;PCNA蛋白在BEAS-2B中低表达,在其恶性转化肺癌细胞中高表达。②免疫组织化学:survivin蛋白在BEAS-2B中无表达,显著低于在其恶性转化肺癌细胞中的表达率(85%,17/20)(P<0.001);PCNA蛋白在BEAS-2B中的标记指数(labelling index,LI)显著低于其恶性转化肺癌细胞(P<0.001);survivin表达阳性的恶性转化肺癌细胞中PCNA的LI明显高于survivin表达阴性者(P<0.001)。结论①survivin在恶性转化肺癌细胞中表达上调,提示其可能在个旧矿粉诱导BEAS-2B恶性转化为肺癌细胞的过程中发挥重要作用,为揭示个旧矿工肺癌的致癌机制提供依据,其有可能作为个旧矿工肺癌的检测和治疗的新靶点。②PCNA在恶性转化肺癌细胞中表达上调,提示细胞增殖过程可能在该恶性转化过程中发挥重要作用。③sur-vivin可能通过PCNA的介导促进细胞的增殖,二者可能在该恶性转化过程中发挥协同作用。
- 梁锐金克炜王志强赵作辉王芳高倩阮永华
- 关键词：生存素增殖细胞核抗原肺肿瘤永生化人支气管上皮细胞
- 云锡矿粉诱导永生化人支气管上皮细胞BEAS-2B恶性转化被引量：8
- 2006年
- 背景与目的研究云锡矿粉对人支气管上皮细胞的致癌转化效应,以探讨云锡矿工肺癌病因及其机制。材料与方法采用永生化人支气管上皮细胞BEAS-2B细胞,设200μg/ml及50μg/ml剂量的2个氧化矿染毒组和1个溶剂对照组,细胞染毒72h后,隔代染毒直至第9代。系统观察转化过程中细胞的生物学特性及血清抗性、锚着独立性生长能力等转化表型特征。结果第20代时各组细胞均未表现出血清抗性,第25代200μg/ml组细胞出现血清抗性和倍增时间增长、染色体畸变率增高;第30代时200μg/ml组细胞在软琼脂上可形成小的细胞集落,至第40代时,200μg/ml及50μg/ml剂量组细胞均能在软琼脂上形成克隆。结论云锡矿粉能体外诱发人支气管上皮细胞恶性转化。
- 周莉金克炜张天宝
- 关键词：永生化人支气管上皮细胞BEAS-2B矿粉恶性转化
- 宣威肺腺癌细胞系XLA-07的建立及特征被引量：1
- 2012年
- 目的建立云南省宣威地区女性肺腺癌细胞系，为研究该地区女性肺癌发病机制提供体外实验模型。方法以手术切除的肺癌组织为标本，采用原代细胞培养法进行体外培养，建系后通过检测细胞形态、细胞生长曲线、群体倍增时间、细胞分裂指数、细胞周期和软琼脂克隆形成率、染色体核型、细胞角蛋白、CD分子、体外侵袭力和异种移植致瘤性等指标，分析鉴定所建细胞系的主要细胞生物学特征。结果新建立的XLA-07细胞生长稳定，可连续长期传代，形态呈梭形与多边形，异型性明显，电镜下可见微腺腔与排列紊乱的微丝，免疫细胞化学染色显示细胞角蛋白7、细胞角蛋白18、广谱角蛋白和上皮细胞膜抗原均呈阳性，细胞高表达CD59与CD13，细胞生长曲线呈“S”形，群体倍增时间约46．7h，细胞分裂指数为1．5％，软琼脂克隆形成率为8．3％，细胞周期G0／G1期占76．9％，G2／M期占8．0％，S期占15．1％，染色体主干系为亚三倍体核型，众数为66条，中位数64条，符合恶性腺上皮细胞特征。体外侵袭力检测发现细胞可穿过细胞外基质胶，但未能在裸鼠皮下形成稳定的移植瘤。无支原体污染。结论新建立了一个人肺腺癌细胞系，命名为XLA-07，该细胞系符合建系标准，是一个新建立的宣威女性肺腺癌细胞系。
- 马丽菊王红治边莉邵文萍唐睿珠王秦秦金克炜
- 关键词：细胞系细胞培养技术肺肿瘤腺癌
- 个旧矿粉诱导的支气管上皮转化细胞cDNA消减文库的构建
- 2009年
- 目的构建永生化人支气管上皮细胞BEAS-2B与其受个旧矿粉体外诱导的恶性转化细胞之间差异表达的cDNA消减文库。方法以BEAS-2B为对照组，以采自个旧井下作业面的矿粉为染毒物在体外成功诱导的恶性转化细胞为实验组，分别提取总RNA；应用SMARTcDNA合成技术，获得充足的dscDNA；应用抑制性消减杂交（SSH）技术分离BEAS-2B与其恶性转化细胞之间差异表达的基因片段；再通过T／A克隆和蓝白筛选实验，克隆BEAS-2B与其恶性转化细胞之间差异表达的基因片段，构建二者之间差异表达的cDNA消减文库。结果通过SSH和T／A克隆等技术成功构建了具有较高消减效率的BEAS-2B与其恶性转化细胞之间差异表达的cDNA消减文库，文库经扩增后得到107个白色克隆和41个蓝色克隆。结论应用SSH技术成功构建了具有较高消减效率的BEAS-2B与其恶性转化细胞之间差异表达的cDNA消减文库，为进一步研究个旧矿粉致肺癌发生的分子生物学机制奠定了基础。
- 梁锐金克炜王志强高倩阮永华王芳
- 关键词：抑制性消减杂交支气管上皮细胞恶性转化
- 抑制性消减杂交技术及其在肺癌研究中的应用被引量：2
- 2007年
- 梁锐金克炜畅继武
- 关键词：抑制性消减杂交技术差异表达基因病理学类型肺癌基因差异表达相互作用
- Survivin在个旧矿粉诱导的肺癌细胞中的表达及意义被引量：1
- 2007年
- 目的探讨生存素(Survivin)在个旧矿粉诱导永生化人支气管上皮细胞(BEAS-2B)转化为肺癌细胞过程中的作用。方法采用免疫荧光细胞化学染色技术和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测Survivin蛋白及其mRNA在BEAS-2B及其转化为恶性肺癌细胞过程中的表达。结果Survivin蛋白在BEAS-2B中表达阴性,在肺癌细胞中表达阳性;Survivin mRNA在BEAS-2B中的表达显著低于肺癌细胞(P<0.01)。结论Sur-vivin在个旧矿粉诱导BEAS-2B转化为恶性肺癌细胞中发挥重要作用,其机制可能为抑制肺癌细胞凋亡;Sur-vivin有望成为个旧矿工肺癌诊断和治疗的新靶点。
- 梁锐金克炜王志强赵作辉高倩王芳阮永华
- 关键词：生存素肺肿瘤肺癌
- 云锡矿粉诱导成纤维细胞活化蛋白表达及与上皮细胞共培养对其表达的影响
- 2010年
- 目的研究云锡矿粉诱导成纤维细胞活化蛋白(FAP)表达及与上皮细胞共培养对其表达的影响。方法选用100 mg/L的云锡矿粉处理永生化人支气管上皮细胞(BEAS-2B)及人胚肺成纤维细胞(WI-38),每次处理72 h,隔代处理直至第9代。自第11代将上述细胞分组共培养。分组如下:W组、W(B)组、W(B100)组、W100组、W100(B)组、W100(B100)组。应用免疫印迹检测第16代、26代及36代各组成纤维细胞中FAP的表达,以β-actin作为内参,结果通过Quantity One软件进行分析,FAP水平=样本FAP灰度值/同一样本β-actin灰度值。结果免疫印迹检测WI-38中无FAP表达;第16代各组WI-38均未检测到FAP表达;至第26代时,W(B)组及W(B100)组FAP仍呈阴性表达,而W100组、W100(B)组及W100(B100)组则可检测到FAP表达,但3组间表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。第36代时,W100组、W100(B)组及W100(B100)组FAP表达水平较第26代增强,但W100组和W100(B)组FAP表达水平无明显差异,惟W100(B100)组FAP表达水平明显强于前2组(P<0.05);且W(B100)组也出现了FAP表达。结论云锡矿粉能诱导WI-38表达FAP,矿粉诱导的上皮细胞可提高其表达水平。
- 边莉何永文阮永华高倩王春艳金克炜
