国家自然科学基金(91131006)
- 作品数：5 被引量：10H指数：2
- 相关作者：许强华王丛丛郭亚南刘云刘秀荣更多>>
- 相关机构：上海海洋大学教育部更多>>
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- 相关领域：生物学农业科学医药卫生更多>>
- Cas9-CRISPR敲除hae3基因对斑马鱼血红蛋白生成的影响被引量：3
- 2015年
- 为获得hae3基因缺失的突变体,并研究hae3基因对血红蛋白生成的影响,以斑马鱼Danio rerio为研究对象,利用Cas9-CRISPR技术,成功建立了缺失血红蛋白hae3基因的鱼类模型,采用显微注射技术将hae3 sgRNA与Cas9 RNA混合后对斑马鱼第一细胞期受精卵动物极进行注射,利用序列测定与比对、T7核酸酶酶切方法成功检测到了hae3基因的敲除,并对缺失hae3基因的斑马鱼和对照组斑马鱼同时进行固蓝(O-dianisidine)染色。结果表明,与对照组相比,试验组斑马鱼血红蛋白含量明显下降,并有畸形表型。研究表明,胚胎时期hae3基因的缺失会严重影响斑马鱼血红蛋白的生成,而且伴随畸形发育表型。
- 蔡畅王丛丛吴智超刘云郭亚南许强华
- 关键词：斑马鱼血红蛋白基因敲除
- 贝氏肩孔南极鱼基因组DNA提取方法改进的初步研究被引量：1
- 2013年
- 由于南极鱼的体内存在抗冻蛋白,不同于一般鱼类,常规基因组DNA的提取较为困难。为建立南极鱼基因组DNA提取的有效方法,利用贝氏肩孔南极鱼(Trematomus bernacchii)为材料,采用改进的酚-氯仿法提取基因组DNA,与传统酚-氯仿法和快速试剂盒抽提法作对比,并通过琼脂糖凝胶电泳、紫外分光光度计测定、以及PCR扩增等手段进行基因组DNA质量的检测。结果表明:利用改进的基因组DNA提取方法,从贝氏肩孔南极鱼获得的基因组DNA,电泳条带整齐明亮,A260/A280值接近1.80,适合后续的PCR扩增实验,可满足基于PCR技术的相关分子生物学实验需要。
- 顾铭悦许强华
- 关键词：基因组DNA
- miR-210-5p对南极独角雪冰鱼心脏发育的作用机制研究被引量：1
- 2016年
- microRNA为短链非编码RNA,通过与靶基因3'UTR序列互补在转录后水平发挥作用。已有研究表明,microRNA在心脏发育过程中起着重要的调控作用。南极冰鱼因体内缺乏功能性血红细胞,其心脏出现了补偿性增生。前期的研究提示,独角雪冰鱼心脏中特异表达的microRNAs可能与冰鱼心脏的补偿性增生相关。本研究针对南极冰鱼心脏中高表达的miR-210-5p,运用斑马鱼显微注射、靶基因预测等手段研究了miR-210-5p对心脏发育的作用机制。结果表明:斑马鱼胚胎注射miR-210-5p后,出现心包膜水肿,心脏发育畸形等现象。qRT-PCR分析显示,过表达miR-210-5p的斑马鱼胚胎中,心脏发育相关的标志性基因bmp4、smad1、gata6以及tbx2b的表达水平下调。Western blotting分析发现,bmp/smad通路中的BMP2、BMP4、SMAD1、GATA6以及TBX2B的蛋白表达水平也显著下调。通过对tbx20基因3'UTR的靶基因生物信息学预测,以及对其进行GFP荧光表达分析,发现tbx20基因可能是miR-210-5p的一个靶基因。由此推测,miR-210-5p可能通过抑制tbx20基因的表达,并调控bmp/smad通路以抑制冰鱼心脏发育。
- 郭亚南王丛丛刘云武晓会孙建飞陈程许强华
- 关键词：心脏发育
- 基于线粒体控制区部分序列的大青鲨种群遗传结构研究被引量：2
- 2014年
- 基于线粒体DNA(mtDNA)控制区部分序列对采集自太平洋、大西洋、印度洋的5个大青鲨Prionace glauca群体165尾成鱼样本进行遗传多样性与遗传结构分析。结果表明:165尾大青鲨的mtDNA控制区片段长为694 bp,共得到110个变异位点,定义了145个单倍型,碱基组成中A为33.46%,T为36.40%,C为18.61%,G为11.53%,G+C含量为30.14%;单倍型多样性指数(Hd)在各个采样点都较高,平均值为0.997 3±0.001 4,核苷酸多样性指数(π)为0.015 10±0.000 91,这表明大青鲨群体的遗传多样性水平很高,遗传资源丰富;分子方差分析表明,99.28%的遗传变异出现在种群内,0.72%的遗传变异来自于种群间;采用邻接法构建的系统发育树表明,5个群体间未形成显著的遗传结构,群体间的高基因交流值(Nm)和低遗传分化指数(Fst)揭示了三大洋的大青鲨群体间基因交流频繁,不存在显著的遗传分化。
- 郑真真许强华戴小杰朱江峰
- 关键词：大青鲨种群遗传结构线粒体DNA控制区
- 南极独角雪冰鱼HSP90β基因cDNA序列克隆及其原核表达被引量：3
- 2015年
- 为研究南极鱼类HSP90β蛋白与低温适应的相关性,本研究克隆获得了南极独角雪冰鱼(Chionodraco hamatus,CH)热休克蛋白HSP90β基因的完整开放阅读框,并以尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus,ON)HSP90β蛋白为对照,进行低温胁迫下的原核表达研究。结果表明:克隆获得的独角雪冰鱼HSP90β基因编码区全长为2 184 bp,推定编码728个氨基酸。多重序列比对显示,独角雪冰鱼HSP90β与其他鱼类HSP90β的氨基酸序列同源性在87%以上;蛋白结构域分析发现,独角雪冰鱼HSP90β具有HSP90家族的保守信号区,其重要功能位点的氨基酸残基非常保守。构建pE T28-CH-HSP90β和pE T28-ON-HSP90β重组表达载体,观察4℃低温胁迫8 h和12 h后,HSP90β蛋白对大肠杆菌生存能力的影响。结果显示:C.hamatus-HSP90β组的大肠杆菌存活率显著高于O.niloticus-HSP90β组和空载体pE T28a对照组,这表明南极冰鱼HSP90β在低温条件下具有更加显著的细胞保护功能。由此推测HSP90β蛋白参与了南极冰鱼低温适应的生理过程。
- 刘秀荣王丛丛许强华
- 关键词：细胞存活率
