国家自然科学基金(81060170) 作品数:5 被引量:8 H指数:2 相关作者: 徐方 李元杰 李利坚 隋御 王婷 更多>> 相关机构: 宁夏医科大学 第二军医大学 同济大学 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 教育部“春晖计划” 宁夏医科大学校级科研项目 更多>> 相关领域: 医药卫生 更多>>
REV3基因联合抗癌药物对SW-480细胞的影响 被引量:1 2012年 目的探讨REV3基因低表达联合抗癌药物对人结肠癌细胞(SW-480)增殖和凋亡的影响。方法利用RNAi技术降低REV3基因在SW-480细胞中的表达,以实时荧光定量PCR和免疫细胞化学检测REV3表达量的降低情况,选择低表达效率具有统计学意义的细胞作为实验组细胞,再用抗癌药物作用48h后运用MTT实验和流式细胞仪,对实验组和对照组细胞进行细胞增殖和凋亡变化情况的检测。结果与空白对照组相比,REV3基因低表达或抗癌药物(顺铂或槐定碱)单独作用均能促进SW-480细胞凋亡并抑制其增殖(P<0.01);实验组内,与药物空白组相比,REV3基因低表达的同时再联合一种抗癌药物(顺铂或槐定碱),对SW-480细胞凋亡和增殖的作用较单一因素更加显著;若将三者联合则比以上任一两种联合作用效果更为显著,以上结果均具有统计学意义(P<0.05)。结论 REV3基因低表达、顺铂、槐定碱或这三因素两两联合均可促进结肠癌SW-480细胞的凋亡并抑制其增殖,若三者同时联合作用效果更加显著,提示"基因+药物"联合抑癌具有协同增效的作用。 黄金娟 隋御 李元杰 金彩霞 张竞文 贾伟 李利坚 周翔 徐方关键词:RNAI技术 SW-480 流式细胞仪 REV3与p53对结肠癌细胞生长和凋亡的调控作用(英文) 2015年 REV3编码DNA聚合酶ζ催化亚基,参与DNA跨损伤修复.在HCT116(p53+/+)中,抑制REV3诱导DNA持续性损伤以及细胞阻滞于G1期,而在HCT116(p53-/-)中,上述现象并未出现,证明p53在抑制REV3产生的应答反应中扮演重要角色;另外,REV3与p53均可被DNA损伤激活参与DNA损伤应答,提示抑制REV3对p53表达及细胞生长的影响是通过DNA损伤介导的,那么抑制p53同样会影响REV3表达及细胞生长.我们以人高分化结肠癌细胞系-THC-8307为研究对象,通过si RNA抑制癌细胞中REV3和p53,由此探讨两基因间的相互影响,发现抑制REV3时,癌细胞早期凋亡和晚期凋亡均明显增加,p53 m RNA表达量增高,G1期细胞数量显著增加;抑制p53对癌细胞凋亡无明显影响,S期细胞数量增加,REV3 m RNA表达增高;同时抑制REV3-p53时,癌细胞凋亡无明显变化,G2期细胞数量增加.以上结果表明REV3和p53在调控结肠癌细胞凋亡和生长阻滞过程中具有一定的相互影响. 尹明伟 隋御 辛淑文 李利坚 金彩霞 李元杰 徐方关键词:P53基因 细胞生长 结肠癌 DNA聚合酶 DNA合成 互调 胃癌BGC-823细胞增殖与NOTCH1和HES1表达的关系 被引量:2 2015年 目的探讨HES1蛋白在胃癌细胞增殖中的作用。方法在5%CO2、37℃、饱和湿度条件下培养胃癌BGC-823细胞和肝干细胞系(LEPC),MTT法检测细胞增殖活性,免疫细胞化学检测HES1和NOTCH1表达。结果培养48h时,BGC-823和LEPC细胞生长良好,MTT比色法检测显示,BGC-823细胞组增殖能力明显强于LEPC组,BGC-823组培养24、48和72h的OD值(分别为0.67±0.17、1.02±0.14和1.22±0.24)均明显高于LEPC组(分别为0.36±0.16、0.35±0.07和0.38±0.14)(P均<0.05)。免疫细胞化学染色可见,少数BGC-823细胞核HES1阳性,比较多的BGC-823细胞核周胞质呈HES1阳性,少数细胞阳性着色见于细胞质和细胞核;HES1阳性以弥漫性表达为主,细胞质表达明显多于细胞核,巨细胞表达更加明显。LEPC组部分细胞HES1免疫组化染色阳性,阳性着色主要见于细胞核。在培养48和72h,BGC-823组HES1蛋白免疫细胞化学染色平均光密度值(OD)均明显高于LEPC组(P<0.05)。BGC-823大多数细胞NOTCH1阴性,少数阳性。LEPC组可见部分细胞NOTCH1免疫组化染色阳性。在培养24、48和72h,BGC-823组NOTCH1平均OD值与LEPC组的差异无统计学意义(P>0.05)。结论 HES1高表达与BGC-823细胞增殖能力较强有关。 张竞文 徐方 胡以平 秦憬 张建中关键词:BGC-823细胞 干扰REV3L基因表达逆转结肠癌的耐药性 被引量:3 2013年 目的探讨跨损伤DNA合成途径(TLS)关键基因REV3L的靶向下调对人耐药结肠癌细胞系耐药性的逆转作用。方法用RNA干扰技术(RNAi)沉默REV3L基因在人耐奥沙利铂结肠癌细胞系(THC8307/L-OHP)中的表达,以实时荧光定量PCR和免疫细胞化学检测REV3L基因mRNA及蛋白均低表达的细胞作为实验组。运用四甲基噻唑蓝(MTT)、流式细胞术和细胞形态学的方法检测肿瘤细胞耐药系数变化、耐药性相对逆转率及细胞凋亡的情况。结果转染mU6pro-siREV3质粒的实验组细胞REV3L基因的表达被成功抑制。基因低表达的细胞耐药系数明显低于空白对照组和阴性对照组,相对耐药逆转率显著高于阴性对照组(P<0.05)。细胞凋亡指标显示实验组细胞凋亡率显著高于两对照组(P<0.05)。结论下调REV3L基因的表达,可逆转人结肠癌细胞的耐药性并促进细胞凋亡,REV3L可以作为肿瘤基因治疗的潜在靶点。 李利坚 隋御 周翔 王婷 张蕾 李元杰 徐方关键词:RNAI 耐药性逆转 hMMS2基因对结肠癌细胞耐药逆转的影响 被引量:2 2014年 为探讨hMMS2(Human methyl methanesulfonate sensitive mutant 2)基因对人结肠癌细胞耐药逆转的影响,文章以人高分化耐奥沙利铂结肠癌细胞(THC8307/L-OHP)为实验材料,采用脂质体-质粒转染技术构建了带有干扰目的基因hMMS2的miRNA片段并携带绿色荧光蛋白标记重组质粒(pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR-MMS2)的细胞系,通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和免疫荧光技术(Immunostaining technique)检测该细胞系的干扰效率。选择hMMS2低表达具有统计学意义的上述细胞系作为实验组细胞,同时将未曾作过处理的THC8307/L-OHP细胞作为空白对照组,转染绿色荧光蛋白空质粒(pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR)的THC8307/L-OHP细胞作为阴性对照组,以噻唑蓝比色分析实验(MTT colorimetric analysis assay)、克隆形成实验(Colony formation assay)对3组细胞的存活率和克隆形成率进行检测,结果显示:实验组细胞的奥沙利铂半数抑制浓度(Half inhibition concentration,IC50)、耐药指数(Resistance index,RI)及克隆形成率(Colony-forming efficiency,CFE)均比对照组细胞明显降低(P<0.05),而相对逆转率(Relative reverse efficiency,RRE)增高(P<0.05),提示实验组细胞增殖能力减弱;以罗丹明123实验(Rhodamine 123 assay)结合倒置荧光显微镜、流式细胞仪检测技术等观测细胞的凋亡变化,结果显示,实验组细胞的凋亡率较对照组细胞显著增高(P<0.05);两对照(空白、阴性)组间并无细胞增殖或凋亡的显著性差异。研究结果提示:下调hMMS2基因表达可逆转人高分化耐奥沙利铂结肠癌细胞对L-OHP的耐药性并促进结肠癌细胞的凋亡。 张蕾 隋御 王婷 李利坚 李元杰 金彩霞 徐方关键词:铂类耐药