首都医学发展科研基金(2007-2050)
- 作品数：4 被引量：22H指数：3
- 相关作者：陈德喜李宁刘凯徐树莹徐斌更多>>
- 相关机构：首都医科大学附属北京佑安医院山东省肿瘤医院包头医学院更多>>
- 发文基金：首都医学发展科研基金国家自然科学基金北京市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- GPC3启动子报告基因载体构建与转录活性分析
- 2010年
- 目的构建磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(GPC3)启动子荧光素酶报告基因载体,并验证其转录活性。方法以人类基因组DNA为模板,PCR扩增GPC3启动子基因片段,克隆到pGL3-Basic荧光素酶报告基因载体上,通过转染HepG2细胞检测荧光素酶活性来验证GPC3启动子的转录活性。结果 GPC3基本启动子和全长启动子分别成功构建到pGL3-Basic荧光素酶报告基因载体中,GPC3基本启动子具有很强的转录活性,而全长启动子的转录活性比基本启动子高4倍以上。结论成功构建了GPC3启动子荧光素酶报告基因载体,为研究GPC3转录调控提供了重要手段。
- 金荣华陈曦王美霞张洪海孙玉陈德喜
- 关键词：GPC3启动子报告基因荧光素酶
- 早期自噬在非酒精性脂肪肝中的保护作用被引量：14
- 2011年
- 目的探讨非酒精性脂肪肝细胞模型中早期自噬的发生及作用。方法用含浓度为400μmol/L油酸的DMEM高糖培养基培养肝癌HepG2细胞,制作体外非酒精性脂肪肝细胞模型。向肝癌HepG2细胞转染GFP-LC3质粒,通过观察LC3Ⅱ绿色荧光斑点确定自噬的发生。采用PI3k抑制剂LY294002抑制自噬。CalceinAM和碘化丙啶(PI)对培养的细胞进行染色来确定活细胞和晚期凋亡细胞。荧光定量PCR确定促凋亡基因BAX的表达。结果油酸刺激的肝癌HepG2细胞在第8小时可以出现强烈的自噬反应,但未刺激细胞没有出现LC3Ⅱ绿色斑点。CalceinAM/PI染色未观察到第8小时出现晚期凋亡细胞。但通过LY294002抑制自噬后第8小时自噬水平明显下调,并且有7.8%的细胞出现晚期凋亡。荧光定量结果显示LY294002抑制自噬的第8小时BAX出现高表达。结论油酸刺激肝癌HepG2细胞的早期,自噬的发生可能对细胞有一定的保护作用,其机制可能与减少促凋亡基因的表达有关。
- 刘凯徐树莹徐斌陈德喜李宁
- 关键词：非酒精性脂肪肝自噬凋亡
- 晚期自噬在非酒精性脂肪肝中的促凋亡作用被引量：11
- 2011年
- 目的在非酒精性脂肪肝体外模型中研究油酸长期刺激对自噬的影响及其作用。方法用含浓度为400μmol/L油酸的DMEM高糖培养基培养肝癌HepG2细胞,制作体外非酒精性脂肪肝细胞模型。向肝癌HepG2细胞转染GFP-LC3质粒,通过观察LC3Ⅱ绿色荧光斑点确定自噬的发生。采用PI3k抑制剂LY294002抑制自噬。用抗M30抗体对培养的细胞爬片做免疫组化来确定凋亡细胞。荧光定量PCR确定凋亡相关基因BCL2和BAX的表达。结果油酸刺激肝癌HepG2细胞12h时自噬水平很低,36h后自噬水平再次显著升高。抗M30抗体免疫组化结果显示12h时肝癌HepG2细胞开始凋亡,至36h时有52%细胞出现凋亡。LY294002处理可使12h和36h的自噬消失,并且也明显减弱了凋亡的发生。凋亡相关基因BCL2和BAX的基因转录水平在油酸处理的12h和36h无显著性差异,LY294002处理也未引起两者转录的显著改变。结论油酸长期刺激肝癌HepG2细胞可以引起自噬介导的凋亡,但该凋亡发生的机制可能和BCL2/BAX基因转录水平的调节无关。
- 刘凯徐树莹徐斌陈德喜李宁
- 关键词：非酒精性脂肪肝自噬凋亡
- 乳腺浸润性导管癌线粒体DNA D-loop区碱基突变的检测分析被引量：5
- 2009年
- 目的:研究乳腺癌患者的癌组织和癌旁正常组织线粒体DNA(mtDNA)D-loop区碱基突变差异,以探讨mtDNA D-loop区碱基突变与乳腺癌发生发展的相关性。方法:采用聚合酶链反应和DNA测序相结合的方法,对20例乳腺浸润性导管癌患者癌组织和癌旁组织线粒体D-loop区进行扩增并测序分析。结果:11例乳腺癌患者癌组织mtDNA D-loop区存在突变,类型以点突变为主,同时发现在线粒体DNA的某些位点发生突变的频率明显较高。结论:mtDNA D-loop区碱基在癌组织中的突变率较癌旁正常组织显著增高,提示mtD-NA D-loop区碱基突变可能在乳腺癌发生发展中发挥重要作用。
- 韩丽红于志勇左文述吴亚松陈德喜
- 关键词：乳腺肿瘤突变
