湖北省自然科学基金(2009CDB076)
- 作品数：3 被引量：11H指数：2
- 相关作者：陆婕黄欣媛陈正望颜冬菁冷明垒更多>>
- 相关机构：华中科技大学西南民族大学更多>>
- 发文基金：湖北省自然科学基金中央高校基本科研业务费专项资金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 小鼠Daintain/AIF-1基因启动子的克隆及其荧光素酶报告基因载体的构建
- 2011年
- 目的:对Daintain/AIF-1(大炎肽/同种异体移植炎症因子-1)基因启动子进行克隆并构建荧光素酶报告基因载体,为进一步研究Daintain/AIF-1的转录调控作用提供了质粒资源。方法:提取单核巨噬细胞系RAW264.7基因组DNA,以其为模板采用PCR方法克隆出Daintain/AIF-1基因5'端UTR区1.6 kb DNA序列,将该序列同源重组到pGL3-Basic载体上,转化感受态DH5α并酶切鉴定和测序。结果:PCR产物片段与预期结果一致,Daintain/AIF-1基因5'端UTR区1.6 kb DNA序列连接到pGL3-Basic载体上,构建成pGL3-Basic-Daintain/AIF-1(pGL3-Basic-DT)载体,酶切结果与理论预测值一致,经测序证实无碱基突变。结论:Daintain/AIF-1基因报告基因载体的构建为进一步研究Daintain/AIF-1转录调控作用提供了载体资源。
- 颜冬菁盖文丽赵燕英黄欣媛陈正望陆婕
- 性别与自身免疫性疾病被引量：8
- 2011年
- 自身免疫性疾病在人群中感染率5-10%,具有明显的性别差异,女性患者显著高于男性,具体机制仍未研究清楚。研究发现,除了机体自身的遗传易感体质外,雌激素,微嵌合体和性染色体都与自身免疫性疾病发病有关。
- 颜冬菁黄欣媛冷明垒陈正望陆婕
- 关键词：自身免疫性疾病性别差异雌激素微嵌合体性染色体
- 人胱硫醚β合成酶原核表达纯化及鉴定被引量：3
- 2011年
- 目的:构建人胱硫醚β合成酶(human cystathionineβ-synthase,hCBS)基因原核表达载体,在E.coli BL21(DE3)中表达,并进行纯化和酶活性检测。方法:以胰腺细胞cDNA文库为模板,采用聚合酶链式反应(PCR)扩增hCBS基因蛋白编码区的全序列,克隆入原核表达载体pET32a(+),构建重组质粒pET32a(+)-hCBS。经限制性内切酶双酶切及DNA序列分析鉴定目的基因后与人CBS基因(基因bank号:BT007154.1)完全一致,转入E.coli BL21(DE3)中,由IPTG诱导表达融合蛋白。结果:经SDS-PAGE、Western blot分析,证明诱导表达的蛋白为重组人CBS(rhCBS)。再由Ni-NTA树脂亲和层析,并脱盐冷冻干燥后获得重组rhCBS(约19 mg/L培养物),并测得其比活力约为57 kU/g。结论:成功地表达纯化出具有功能活性的重组蛋白rhCBS,为进一步研究该酶的相互作用蛋白以及其在生物学和临床科学的作用奠定了基础。
- 王伟杜美陈欢陆婕
- 关键词：胱硫醚Β合成酶同型半胱氨酸酶活力原核表达
