河南省高等学校青年骨干教师资助计划项目(2011GGJS-125)
- 作品数：11 被引量：44H指数：5
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- 发文基金：河南省高等学校青年骨干教师资助计划项目河南省教育厅科学技术研究重点项目河南省科技攻关计划更多>>
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- 黑曲霉木聚糖酶曲盘发酵及其粗酶性质研究被引量：1
- 2015年
- 为研究黑曲霉菌株（Aspergillus niger）XZ-3S曲盘发酵木聚糖酶条件及所产粗酶的性质,采用曲盘（大小φ20cm×4cm）进行固态发酵条件研究,并对所产粗酶进行酶学性质测定。结果表明：在培养基干料100g、初始料水比1∶1.7、初始pH自然状态、相对干物料接种量10%、中间定时翻曲补水和28℃连续培养60h条件下,酶活力最高可达24 380IU/g干曲;粗酶最适反应pH5.0,最适温度50℃;温度低于50℃、pH3.0~8.0的条件下酶较稳定;EDTA（活性物质）、Cu2＋、Co2＋对酶有明显的激活作用,Pb2＋、Mg2＋、Fe2＋、Mn2＋、Ca2＋、Fe3＋、Al 3＋对酶有不同程度的抑制作用。
- 周晨妍杜晓娜王丹丹刘振华王燕
- 关键词：木聚糖酶黑曲霉固态发酵酶学性质
- N-端二硫键及芳香族氨基酸对木聚糖酶XynZF-2热稳定性的影响被引量：7
- 2016年
- 为提高GH11家族中温木聚糖酶Xyn ZF-2的热稳定性,将其N-端替换成GH11家族的耐热性木聚糖酶Ev Xyn11的相应序列,并在该段序列引入芳香族氨基酸残基（P9Y、H14F）,构建杂合木聚糖酶基因xyn EV-34,将木聚糖酶基因xyn ZF-2和xyn EV-34分别在E.coli BL21中表达,并分析温度和p H对酶活性的影响。结果表明,杂合木聚糖酶Xyn EV-34的最适温度为48℃,相比原酶Xyn ZF-2提高了8℃。在40℃保温1 h,原酶Xyn ZF-2残余酶活性下降到44.36%,而突变酶Xyn34残余酶活性为77.96%。在45℃,突变酶Xyn EV-34的半衰期t1/245℃为23 min,较重组酶Xyn ZF-2（t1/245℃=7 min）提高了16 min。同时,两种酶的最适p H均为5.0,但p H稳定性由原来的4.4~9.0扩增到了3.0~9.0。由此表明,二硫键以及芳香族氨基酸的引入,对该酶的热稳定性以及p H稳定性都有明显改善。
- 李同彪周晨妍朱新术王燕
- 关键词：木聚糖酶二硫键热稳定性
- 引入疏水性氨基酸对GH11家族木聚糖酶热稳定性的影响被引量：8
- 2016年
- 生物信息学预测黑曲霉(Aspergillus niger)XZ-3S木聚糖酶Xyn ZF-2的催化活性中心位点,并在α-螺旋处引入疏水性氨基酸以提高木聚糖酶Xyn ZF-2的热稳定性。通过定点突变活性位点E103D、E194D,构建突变基因xyn ED。同时,将α-螺旋处氨基酸Val125、Lys178和Gly180分别突变为疏水性氨基酸Ala、Met和Ala,构建突变基因xyn MA。突变基因xyn ED和xyn MA在大肠杆菌BL21中表达发现,突变酶Xyn ED酶活性为原酶Xyn ZF-2的0.17%;突变酶Xyn MA最适温度由原来的40℃提高到了48℃;在40℃条件下保温1 h,突变酶Xyn MA酶活性仍高达74.71%(原酶Xyn ZF-2为44.36%);突变酶Xyn MA的半衰期t45℃1/2从原来的7 min提高到了19 min。因此,Glu103和Glu194为木聚糖酶Xyn ZF-2的催化活性中心位点,且在木聚糖酶Xyn ZF-2α-螺旋处引入疏水性氨基酸能大大提高其热稳定性。
- 李同彪周晨妍朱新术王丹丹
- 关键词：木聚糖酶热稳定性Α-螺旋疏水性定点突变
- 产木聚糖酶毕赤酵母工程菌株构建及表达条件优化研究被引量：3
- 2016年
- 将黑曲霉XZ-3S木聚糖酶Xyn43A成熟肽基因插入表达载体p PIC9K,重组质粒SalⅠ线性化后分别电击转化2种毕赤酵母GS115和KM71,转化液经MD平板、G418浓度梯度平板和摇瓶复筛,获得两株重组菌GS115/Xyn43A(Mut^+)和KM71/Xyn43A(Mut^s)。其中GS115/Xyn43A菌株最优表达条件为:甲醇浓度2.0%,接种时间24 h,诱导时间108 h,诱导温度30℃、诱导培养基初始p H6.3;KM71/Xyn43A菌株最优表达条件为:甲醇浓度1.75%,接种时间26 h,诱导时间132 h,诱导温度30℃、诱导培养基初始p H6.5。在最优表达条件下两重组菌GS115/Xyn43A和KM71/Xyn43A比酶活力分别可达139.36、143.29 U/mg。
- 周晨妍刘振华王丹丹李同彪高启禹
- 关键词：黑曲霉毕赤酵母木聚糖酶
- 木聚糖酶热稳定性分子改造的研究进展被引量：6
- 2014年
- 木聚糖酶广泛应用于食品加工、生物制药、酒的澄清及纸浆漂白等行业。热稳定性对于木聚糖酶在工业领域中的应用起着至关重要的作用。根据催化结构域的氨基酸组成不同,木聚糖酶主要分为F/10和G/11两大家族。本文主要就这两大家族木聚糖酶热稳定性分子改造的技术和方法作一综述,为进一步提高木聚糖酶的热稳定性提供参考。
- 李同彪周晨妍王丹丹
- 关键词：木聚糖酶热稳定性分子改造
- V1C定点突变木聚糖酶XynZF-2对酶热稳定性的影响被引量：9
- 2015年
- 对来源于黑曲霉（Aspergillus niger）XZ-3S的中温木聚糖酶Xyn ZF-2进行热稳定性改造,定点突变v1c,构建重组突变酶Xyn ZF-2V1C。重组原酶Xyn ZF-2与突变酶Xyn ZF-2V1C基因分别在大肠杆菌BL21（DE3）中表达并进行酶学性质分析。结果发现,突变酶Xyn ZF-2V1C最适温度为50℃,相比原酶Xyn ZF-2最适温度提高了10℃;在45℃条件下的半衰期t45℃1/2,突变酶Xyn ZF-2V1C相对于原酶Xyn ZF-2提高了10 min;原酶Xyn ZF-2与突变酶Xyn ZF-2V1C最适p H均为5.0,p H稳定范围均为5.0～9.0,基本没有变化;原酶Xyn ZF-2和突变酶Xyn ZF-2V1C的Km分别9.96 mg/m L和12.4 mg/m L,Vmax分别为74.63 U/mg和90.91 U/mg。
- 李同彪周晨妍朱新术王丹丹陈亚文谢晶晶
- 关键词：木聚糖酶定点突变热稳定性
- 木聚糖酶基因克隆和表达的研究进展被引量：4
- 2013年
- 半纤维素分解微生物在自然界的物质循环过程中起着重要作用,半纤维素是植物多糖的重要成分之一,而木聚糖则是半纤维素的主要成分。木聚糖酶(xylanase)可催化木聚糖的水解,在各种生物体内均发现木聚糖酶。在过去几十年中,已有上百种木聚糖酶基因被克隆至同源或异源宿主内来表达木聚糖酶,以期改变宿主特性并适于商业应用。本文综述了木聚糖酶基因的克隆和表达,并对基因工程技术在木聚糖酶上的应用前景进行了展望。
- 王丹丹周晨妍付冠华
- 关键词：木聚糖酶克隆基因表达
- 木聚糖酶Xyn43A基因在大肠杆菌及毕赤酵母中的表达比较被引量：7
- 2016年
- 根据木聚糖酶Xyn43A基因序列,设计特异性引物,以p MD18-T-Xyn43A重组质粒为模板克隆Xyn43A成熟肽基因,将该基因分别克隆到大肠杆菌表达载体p ET-28a和毕赤酵母表达载体p PIC9K中,分别在大肠杆菌BL21及毕赤酵母GS115中表达。重组酶在大肠杆菌中胞内表达,比酶活力可达61.43 U/mg。重组酶在毕赤酵母中分泌表达,比酶活力可达145.24 U/mg。酶学性质显示,BL21-Xyn43A、GS115-Xyn43A重组酶最适温度、p H相同均为45℃、p H 5.0。GS115-Xyn43A温度稳定性、p H稳定性均优于BL21-Xyn43A。
- 周晨妍刘振华王丹丹李同彪朱新术王燕
- 关键词：黑曲霉木聚糖酶大肠杆菌毕赤酵母
- 毕赤酵母工程菌发酵木聚糖酶条件的响应面优化被引量：4
- 2016年
- 通过单因素实验研究了诱导温度、种龄、p H、甲醇浓度以及诱导时间对毕赤酵母工程菌产木聚糖酶的影响。在此基础上进行响应面优化设计实验,并根据结果拟合小二乘二次项回归方程,探讨了各因素对木聚糖酶比酶活力的影响。确定了最优的发酵培养条件:种龄为31 h,诱导时间104 h,甲醇诱导浓度1%,发酵起始p H4.0,诱导温度为30℃,在此条件下对实验结果进行验证,得到木聚糖酶比酶活力为43526.3 U/mg。
- 王丹丹周晨妍朱新术李同彪
- 关键词：毕赤酵母木聚糖酶发酵条件响应面
- 引入中性氨基酸对木聚糖酶XynZF-2热稳定性的影响被引量：3
- 2015年
- 通过对黑曲霉（Aspergillus niger） XZ-3S木聚糖酶XynZF-2进行生物信息学分析,在N-端区域引入半胱氨酸,定点突变E27C,构建突变基因xyn-E27C,并在大肠杆菌BL21 （DE3）中表达.酶学性质分析发现,突变酶Xyn-E27C的最适温度为45℃,与原酶XynZF-2相比提高了5℃.在40℃条件下,突变酶Xyn-E27C的半衰期t1/2^40℃为100 min,相比原酶XynZF-2 （t1/2^45℃=55 min）提高了45 min.在45℃条件下,突变酶Xyn-E27C的半衰期t1/2^45℃为24 min,相比原酶XynZF-2（t1/2^45℃=7 min）提高了17 min;突变酶Xyn-E27C的最适pH值由5.0提高至5.5,而pH稳定范围均为5.0-9.0.因此,定点突变E27C对木聚糖酶XynZF-2的热稳定性以及最适pH值均有重要影响.
- 陈亚文周晨妍谢晶晶索婧琪魏阳阳李同彪
- 关键词：木聚糖酶热稳定性定点突变
