广东省自然科学基金(34970)
- 作品数：7 被引量：50H指数：3
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- 三氯乙烯中毒表现及其作用机制研究进展被引量：20
- 2006年
- 黄海燕庄志雄刘建军
- 关键词：三氯乙烯中毒
- L-02肝细胞蛋白质双向电泳条件的建立被引量：1
- 2006年
- 黄海燕刘建军庄志雄李习艺卫秦芝杨晓华杨建平
- 关键词：L-02肝细胞蛋白质组双向电泳
- 三氯乙烯诱发L-02肝细胞毒的双向电泳分析及质谱鉴定被引量：13
- 2005年
- 目的分析三氯乙烯对L02肝细胞蛋白质表达的影响。方法利用噻唑蓝比色法和锥虫蓝拒染法,确定三氯乙烯的剂量反应关系,建立L02肝细胞染毒模型,提取细胞总蛋白,双向电泳分离蛋白质组成分,找出三氯乙烯处理后表达有差别的蛋白斑点,用基质辅助激光解吸电离飞行时间串联质谱进行鉴定。结果当三氯乙烯浓度达到30μmol/L时,L02肝细胞增殖抑制率明显升高。选用40μmol/L三氯乙烯染毒的L02肝细胞及其对照细胞进行双向电泳,获得分辨率高、重复性好的电泳图谱。结果表明,三氯乙烯染毒的L02肝细胞蛋白点表达量升高2倍以上的有37个,蛋白点减少至1/2以下的有15个。利用质谱技术对差异蛋白点进行鉴定,肽质量指纹图谱初步鉴定了4个蛋白,肽质量指纹图谱和串联质谱进一步确定了11个蛋白。结论三氯乙烯能引起L02肝细胞蛋白表达改变。
- 黄海燕刘建军庄志雄李习艺徐新云卫秦芝杨晓华
- 关键词：三氯乙烯L-02双向电泳分析质谱鉴定
- 三氯乙烯中毒表现及其作用机制研究进展
- 三氯乙烯(trichloroethylene,TCE)是一种易挥发的卤代烃类有机溶剂,可用做金属去脂剂、干洗剂、溶剂、萃取剂等,在五金、电子、玩具、印刷等行业应用广泛。职业性TCE中毒国内外已有大量报道,临床较多表现为慢...
- 黄海燕庄志雄刘建军
- 关键词：三氯乙烯中毒
- 文献传递
- 低浓度三氯乙烯诱发L-02肝细胞蛋白质组异常表达
- 2005年
- 【目的】研究低剂量三氯乙烯对人L-02肝细胞蛋白质表达谱的影响,以助于阐明三氯乙烯引起细胞早期应答反应的分子机制。【方法】L-02肝细胞暴露于低剂量(3μmol/L)三氯乙烯24h后,提取细胞总蛋白,双向电泳分离蛋白质,软件分析凝胶图像,基质辅助激光解吸电离飞行时间串联质谱(MALDI-TOF-TOF-MS)对相关异常变化斑点进行鉴定。【结果】和对照组比较,低剂量三氯乙烯处理后L-02肝细胞蛋白质表达发生改变,初步鉴定出7个差异蛋白。低剂量三氯乙烯刺激后,上调的蛋白有核糖体样蛋白(similartoribosomalprotein)和SETprotein,下调的蛋白有异柠檬酸脱氢酶(isocitratedehydrogenase,NADP)和腺苷二磷酸-核糖基化因子鸟苷酸因子6(ADP-ribosylationfactorguaninenucleotidefactor6),微管-肌动蛋白交叉连接因子1(microtubule-actincrosslinkingfactor1)特异表达,肽基脯氨酰顺-反异构酶PPI(peptidylprolylcis/transisomerase)缺失。【结论】低剂量的三氯乙烯处理后,L-02肝细胞中的蛋白表达谱发生明显变化,这为三氯乙烯毒作用机制的进一步研究提供了线索。
- 黄海燕庄志雄刘建军李习艺卫秦芝杨晓华
- 关键词：三氯乙烯双向凝胶电泳蛋白质组
- 三氯乙烯诱导人L-02肝细胞适应性反应的差异蛋白质组学分析
- 2006年
- 目的研究三氯乙烯(TCE)诱导L-02肝细胞的适应性反应及蛋白质表达改变。方法利用噻唑蓝(MTT)比色法,以0.5%二甲基亚砜(DMSO)作为溶剂对照组,确定对细胞增殖无明显作用的1μmo.lL-1TCE作为TCE诱导L-02肝细胞适应性反应的预刺激浓度,预刺激时间12 h,预刺激后再刺激浓度(适应组)为30μmo.lL-1TCE,刺激时间24 h。然后选取0,1,30和1+30μmo.lL-1TCE(1μmo.lL-1TCE预刺激12 h后,再次接受30μmo.lL-1TCE刺激24 h)4组平行进行双向凝胶电泳分离细胞总蛋白,银染显色,图像分析后,挑选差异蛋白进行基质辅助激光解吸电离飞行时间串联质谱鉴定。结果1μmo.lL-1TCE预刺激L-02肝细胞后,能降低30μmo.lL-1TCE攻击产生的细胞毒性。与单独用30μmo.lL-1TCE攻击相比,细胞增殖能力增加明显,细胞死亡减少。分析比较4组二维电泳图谱,发现15个蛋白质斑点表达发生改变,对其中5个差异较明显的蛋白点进行质谱分析鉴定,分别为Ku 86自体抗原相关蛋白1、透明质酸蛋白(hyaluronan)介导细胞运动受体、谷胱甘肽转移酶ω1、白细胞弹性蛋白酶抑制剂和空泡ATP合酶亚单位B。结论TCE可诱导L-02肝细胞产生适应性反应,引起L-02肝细胞蛋白表达改变,差异蛋白大多参与机体保护。
- 刘建军黄海燕赵锦庄志雄袁建辉阳帆何建凡李习艺
- 关键词：三氯乙烯肝细胞蛋白质组
- 蛋白质组研究技术平台的建立——双向电泳条件的建立及优化被引量：18
- 2004年
- 目的 建立和优化蛋白质组研究的双向电泳及相关技术。方法 以固相pH梯度等电聚焦为第一向和垂直SDS PAGE为第二向 ,对样品制备、上样量、IPG胶条、等电聚焦和聚丙烯酰胺凝胶电泳程序及参数、染色方法等相关技术进行了比较研究和条件优化。结果及结论 成功地得到了人胚肺成纤维细胞和蚕卵蛋白质组双向电泳图谱 ,建立了蛋白质组研究的双向电泳技术平台。
- 刘建军房师松李习艺陈晓燕李喜梅赵锦庄志雄
- 关键词：蛋白质组双向凝胶电泳
- 利用蛋白质组学技术研究三氯乙烯刺激肝细胞后蛋白质差异表达
- 2005年
- 目的应用双向电泳及串联质谱技术,研究不同剂量三氯乙烯(TCE)诱导 L-02肝细胞蛋白质表达谱的差异。方法 L-02肝细胞分别用不同剂量 TCE 和溶剂对照(DMSO)处理后,提取细胞总蛋白,双向凝胶电泳分离蛋白质组成分,银染显色,经 ImagerMaster 2D Platinum 5.0软件分组分析比较四组图谱,并对差异蛋白斑点进行基质辅助激光解吸/电离飞行时间串联质谱(MALDI-TOF-TOF-MS)分析鉴定。结果得出差异较明显的蛋白质斑点15个,不同剂量 TCE 刺激后表达分别上调、下调或消失,提示 TCE 可引起肝细胞蛋白表达发生改变。通过质谱鉴定和 IPI human 数据库检索,鉴定了其中9个 TCE 诱导 L-02肝细胞相关的蛋白质。结论这些结果为深入研究 TCE 毒作用相关的蛋白质及 TCE 毒作用的分子标志物提供依据,并为阐明 TCE 毒作用的分子机制提供线索。
- 刘建军
- 关键词：三氯乙烯L-02肝细胞蛋白质组双向电泳
