广州市科技局资助项目([2005]6)
- 作品数：11 被引量：25H指数：4
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- 舟山眼镜蛇毒CTX1层析分离的流速优化
- 2011年
- 目的比较3种流速的CM-Sepharose FF阳离子交换层析柱分离舟山眼镜蛇(Naja naja atra)蛇毒(snake venom,SV)的柱效,为SV的分离纯化提供实验依据。方法 (1)采用3种流速CM-Sepharose FF阳离子交换层析柱分离舟山眼镜蛇蛇毒;(2)反向高效液相法分析各组分的纯度及内标法与CTX1标准品比较指纹图谱。结果经过阳离子交换层析,可从蛇毒中获得7个组分(组分1～7)。当流速为1.4 ml/min和1.8ml/min时,得到的7个组分中,组分SV1和SV2,组分SV3和SV4,组分SV5、SV6和SV7组分之间分离效果较差;当流速为1.6 ml/min时,各组分的分离效果理想。HPLC分析显示,组分SV5、组分SV6都是单一成分,纯度分别为95.8%、93.6%;CTX1内标法显示,组分SV6与CTX1指纹图谱吻合。结论 CM-Sepharose FF用于蛇毒分离可获得较高纯度的单一有效成分,流速为1.6 ml/min分离效果佳。
- 周升铭董伟华孔天翰
- 关键词：蛇毒纯化
- 双价抗蛇毒鸡卵黄抗体制备与生物活性研究
- 2009年
- 目的通过双价抗蛇毒鸡卵黄抗体（bivalent anti—snake venom immunoglobulin yolk，双价IgY）的制备及其相关特性研究，为多价抗蛇毒IgY的制备和应用奠定基础。方法两种单一抗原（舟山眼镜蛇、圆斑蝰泰国亚种）按顺序依次交替注入单只鸡体内，水稀释法制备双价IgY；测定双价IgY效价（间接ELISA法）、交叉免疫特性（双向免疫扩散试验）及对溶膜活性（溶膜试验）、半数致死量（LD50）的中和作用。结果初次免疫后第28～42天，以水稀释法提取的双价IgY对眼镜蛇毒及蝰蛇毒的效价分别为1：12800和1：6400。双价IgY与眼镜蛇亚科、蝰亚科6种蛇毒有明显的交叉免疫反应，而与蝮亚科4种蛇毒的交叉免疫反应不明显。双价IgY能显著降低眼镜蛇、蝰蛇毒对鸡卵黄膜的溶膜作用，也能显著延长眼镜蛇和蝰蛇伤小鼠的存活时间（P〈0．05），同等剂量的双价IgY提高眼镜蛇伤存活率优于蝰蛇伤。结论双价IgY能够显著中和眼镜蛇、蝰蛇毒的溶膜和致死活性，能有效保护机体免受眼镜蛇毒和蝰蛇毒的攻击。
- 祁俊华孔天翰
- 关键词：眼镜蛇毒蝰蛇毒交叉免疫
- 抗眼镜蛇毒血清对中华眼镜蛇伤大鼠保护的时效性研究被引量：4
- 2007年
- 目的观察中华眼镜蛇伤后不同时期应用抗蛇毒血清对机体保护作用的差异,为探索临床抗蛇毒血清使用的最佳有效时段提供依据。方法将SD大鼠随机分成6组(蛇毒组、40、60、80、100、120 min血清保护组),每组30只。动物经戊巴比妥腹麻,于单侧背部皮下及双侧小腿腓肠肌注射眼镜蛇毒以制备中华眼镜蛇毒挑战剂量(4×LD50)大鼠模型,分5个不同时段分别注射抗蛇毒血清,于注毒后连续观察3 h,统计各组平均存活时间、成活率及保护率。结果蛇毒组大鼠注入挑战剂量的眼镜蛇毒后,平均存活时间为(148.8±11.4)min,成活率仅为20%;其他血清保护组分别于注毒后40、60、80、100、120 min经腹腔注射精制抗眼镜蛇毒血清(125 u血清/mg蛇毒),40 min血清组保护率达80%;60 min血清组存活率及保护率分别达到70%、50%,平均存活时间为(172.8±7.2)min,与蛇毒组相比有明显差异(P<0.01);而801、00 min血清组保护率依次下降,分别为40%、30%,但仍较蛇毒组显著提高(P<0.01);120 min血清组存活时间及保护率与蛇毒组比较差异无显著性。结论利用中华眼镜蛇毒挑战剂量大鼠模型,通过不同时段施予同剂量抗血清,可显示出明显的机体保护时效性,该研究为探讨临床正确使用抗蛇毒血清提供了新的实验依据。
- 陈学文冯凤琼钟兆堂黄家杰庄园杨嘉琳祁俊华孔天翰
- 关键词：中华眼镜蛇抗蛇毒血清
- 中华眼镜蛇毒组分CⅡ-3-1对多药耐药K562/A02细胞株作用研究被引量：5
- 2006年
- 目的从眼镜蛇毒组分CⅡ中寻找抗肿瘤有效组分并研究其对多药耐药K562/A02细胞的杀伤作用。方法用SephadexG-75、SephadexG-25层析法从蛇毒中分离、纯化抗肿瘤有效组分,经SDS-PAGE电泳、HPLC分析、鉴定,用MTT法观察细胞毒性作用。结果CⅡ-3-1(近似电泳纯)的LD50为(0.622±0.007)mg/kg。CⅡ-3-1对耐药K562/A02及敏感K562细胞均有抑制作用。结论中华眼镜蛇毒中组分CⅡ-3-1对K562及K562/A02细胞都有显著杀伤作用。
- 成友军孔天翰董伟华
- 关键词：眼镜蛇眼镜蛇毒多药耐药人白血病细胞
- 鸡血清与卵黄中抗中华眼镜蛇毒IgY动态变化研究被引量：2
- 2006年
- 目的探索特异性IgY的产生和变化规律。方法用眼镜蛇毒原毒免疫产蛋母鸡,ELISA定期检测卵黄中的抗体效价变化,小鼠体外中和实验检测其生物活性。第1次免疫40周后,眼镜蛇毒攻击已免疫母鸡,检测攻击前后鸡血清中抗体效价变化情况,未经眼镜蛇毒免疫的母鸡作阴性对照。结果经免疫后第7天蛋黄中即可检测到抗体,经多次加强免疫,40周时蛋黄中还能保持高效价的抗体,通过分离纯化,此抗体可保护实验小鼠免受4 LD50眼镜蛇毒的攻击;同时,鸡血清中也保留着较高效价的抗体,可中和4 LD50以上的眼镜蛇毒。结论用眼镜蛇毒免疫鸡,经多次加强免疫,卵黄和鸡血清中可持久保持高效价的特异性抗体,初步检测此抗体可中和4 LD50的蛇毒。
- 刘四红孔天翰
- 关键词：眼镜蛇毒鸡卵黄抗体免疫
- 抗眼镜蛇毒鸡卵黄抗体的制备、纯化和保护性实验研究被引量：8
- 2006年
- 目的:探索抗眼镜蛇毒鸡卵黄抗体(IgY)的制备方法及其生物学活性,为替代马源性抗蛇毒血清奠定基础。方法:眼镜蛇毒原毒免疫母鸡,采用水稀释-硫酸铵盐析-阴离子交换层析三级提取法纯化IgY;SDS-PAGE测定各级提取物的抗体纯度;间接ELISA法和双向免疫扩散法观察效价变化;动物体外中和实验检测其生物活性。结果:卵黄经水稀释法及经60%硫酸铵盐析蛋白回收率为40.36%;进一步经阴离子交换层析,总蛋白回收率14.86%,效价提高24倍;IgY分子量约为220 kD,由两个亚基组成;体外中和试验表明,2.28 mg/kg特异性IgY能完全中和2 LD50的眼镜蛇毒,保护小鼠免受眼镜蛇毒的攻击。结论:以眼镜蛇毒原毒为免疫源,经水提、盐析、层析三级提取,可从鸡卵黄中获得高纯度、高活性的特异性IgY。
- 刘四红孔天翰
- 关键词：蛇毒鸡卵黄抗体眼镜蛇
- 抗蝰蛇毒IgY灌胃对蝰蛇伤小鼠保护作用的研究被引量：1
- 2008年
- 目的探讨抗蝰蛇蛇毒鸡卵黄抗体(immunoglobulin yolk,IgY)经腹腔注射或灌胃对蝰蛇伤小鼠保护作用,为其口服制剂的应用奠定理论基础。方法用蝰蛇原毒单一抗原免疫母鸡,收集第12天以后的鸡蛋,用水稀释法提取抗蝰蛇毒IgY;间接法ELISA检测IgY的效价和灌胃小鼠体内IgY的吸收时间;以胃排空率实验确定蛇伤前灌胃IgY的最佳时间,以腹腔注射和不同浓度IgY灌胃实验分别检验IgY对蝰蛇伤小鼠的保护作用。结果初次免疫后第12天开始收集抗体,水稀释法提取的IgY效价为1∶6400;不同浓度IgY灌胃后,2.5～3.5h胃排空率均达61.8%以上,血浆中抗体效价亦相应达高峰;腹腔注射和IgY灌胃实验对蛇伤小鼠的保护作用明显,小鼠的存活时间与阴性IgY组小鼠相比差异显著(P<0.05);同等效应下,灌胃IgY的有效剂量大约为腹腔注射的10～15倍。结论抗蝰蛇蛇毒IgY经腹腔注射和灌胃实验均能有效保护蝰蛇伤小鼠。
- 祁俊华孔天翰
- 关键词：蛇毒鸡卵黄抗体
- 圆斑蝰泰国亚种蛇伤大鼠模型多项指标动态观察被引量：3
- 2008年
- 目的建立圆斑蝰泰国亚种蛇伤大鼠模型，通过对其中毒后电生理、出血时间（Bleeding Time，BT）、皮下出血区（subcutaneous hemorrhagic region，SHR）及血液生化等多项指标的动态观察，为蛇毒毒理及抗蛇毒制剂的研究提供实验数据。方法SD大鼠分为圆斑蝰泰国亚种蛇毒（Daboia russellii siamensis Venom，DRSV）组和生理盐水（NS）组，戊巴比妥腹麻，注入DRSV或NS后，连续3h监测心率（heartrate，HR）、呼吸频率（respiratoryrate，RF）及腹肌反射阈（abdominal muscle reflex threshold，AMRT），定期测定BT；电生理记录结束后，经心脏取血进行血液生化检测，暴露背部注射点，测量皮下出血区。结果腹腔注入1．5倍LD50的DRSV，大鼠平均生存时间为（3．7士0．53）h。与NS组比较，DRSV组大鼠于注毒后45min，HR、AMRT均显著下降（P〈0．05～0．01），RF呈先微升后缓降的变化过程，BT明显缩短（P〈0．01）；180min后，尿素氮、肌酐、尿酸、总胆红素、磷酸肌酸激酶、磷酸肌酸激酶同工酶、乳酸脱氢酶等检测值均显著升高（P〈0．05～0．01），DRSV组的SHR约为3．0cm×3．0cm。结论蝰蛇伤大鼠模型有关电生理、BT的动态指标及血液生化等多项检验数据与蛇伤临床症状基本相符，在蝰蛇伤临床诊治及蝰蛇毒的实验研究方面有一定的参考价值。
- 陈艳芳许泽明区焕桃邓靖文黄群娣孔天翰
- 关键词：蛇毒电生理出血时间生化检测
- 蝎毒抗癌组分SVⅡ分离法的优化研究
- 2009年
- 目的比较三种柱径的分子筛G-50凝胶层析柱分离东亚钳蝎蝎毒的柱效;并对分离所得组分作MTT(酶反应比色法)抗肿瘤活性作用研究,为从中研制和开发出高效、低毒的新型抗癌特效药筛选出目标组分。方法(1)采用三种规格的分子筛层析柱分离蝎毒;(2)HPLC色谱分析比较各组分的指纹图谱;(3)MTT法观察不同浓度(1、10、100 mg/L)的蝎毒及其组分对四种肿瘤细胞(HL-60、A549、K562/ADR、K562/S等)的毒性作用。结果经过分子筛柱层析,可从蝎毒(Scorpion venom,SV)获取三个组分SVⅠ、SVⅡ、SVⅢ;经HPLC色谱分析,各组分明显含有四种以上单体成分;MTT法研究表明,SVⅡ对四种肿瘤细胞的细胞毒性较原毒强,剂量-效应关系较好,而SVⅠ、SVⅢ对四种肿瘤细胞抑制作用不明显。结论(1)利用大柱径的层析柱分离蝎毒的柱效较高;(2)组分SVⅡ是蝎毒抗癌的目标组分,且其对耐药细胞株(K562/ADR)的抑制作用比阳性对照组强,有待进一步的分离纯化,筛选出色谱纯的抗癌活性成分(多肽单体)。
- 黄劭孔天翰祁俊华
- 关键词：蝎毒柱层析抗癌
- 中华眼镜蛇伤大鼠模型多项电生理指标的动态观察被引量：6
- 2007年
- 目的建立中华眼镜蛇毒挑战剂量的大鼠模型,通过对多项电生理指标的动态观察,为蛇毒毒理及抗蛇毒制剂的研究提供实验数据。方法将SD大鼠分为蛇毒组、血清保护组和对照组,戊巴比妥腹麻,连续记录心率、血压、呼吸频率及心电图等电生理指标的动态变化,观察眼镜蛇毒的毒性反应及抗蛇毒血清对动物的保护作用。结果腹腔注入挑战剂量（4×LD50：4×0.636 mg/kg）的中华眼镜蛇毒后,大鼠平均生存时间为（3±0.33）h。蛇毒组给药30-60 min后,心率及呼吸频率均有轻度加快,Ⅱ导联ST段抬升幅度超过同期正常对照0.1 mV以上（P〈0.05）;130-150 min后,心率、呼吸频率及动脉血压均直线下降;达180 min时,心率、呼吸频率及动脉血压均已降到同期正常对照的30%以下,差异非常显著（P〈0.01）。血清保护组给药后各指标相对平稳,与对照组比较无明显差异。结论以4倍LD50为挑战剂量造模的中华眼镜蛇伤大鼠模型,心率、血压、呼吸频率及心电图等电生理指标的动态变化与临床症状基本相符。眼镜蛇毒抗血清可有效地中和、保护眼镜蛇毒对机体的伤害。
- 曾令铝陈熹杨威陈佳鸿陈学文池俊业刘四红孔天翰
- 关键词：中华眼镜蛇抗蛇毒血清电生理
