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重组腺病毒Ad-hTERTp-HSV-TK／GCV系统对小鼠肝癌腹腔种植腹腔积液生成的影响: 2010年; 目的研究重组腺病毒Ad—hTERTp—HSV，TK／GCV系统对小鼠肝癌腹腔种植腹腔积液生成的影响及其作用机制。方法SX，近交系小鼠腹腔内接种肝癌H22细胞株后，随机分为四组，48h后分别给予相应的治疗。观察各组小鼠腹腔积液及生存时间的变化；流式细胞术测定肿瘤细胞凋亡百分率；透射电镜观察腹腔内肿瘤细胞的形态学变化。结果与Ad-hTERTp—HSV-TK组、GCV组和空白对照组三组相比，Ad—hTERTp—HSV—TK／GCV组可以显著抑制小鼠腹腔积液的生成（P〈0．01），延长生存期（P〈0．01），肿瘤细胞凋亡率为（27．12±2．12）％明显高于其他各组（P〈0．01），并且在治疗期间未发现明显不良反应。结论Ad—hTERTp—HSV—TK／GCV系统可通过诱导肝癌细胞凋亡而抑制小鼠腹腔积液生成，并延长生存期，是一种安全可行的治疗方法。; 杨强邓志华刘燕贾静郭素雅刘京龙; 关键词：胸苷激酶腹腔积液

单纯疱疹病毒胸苷激酶在自杀基因治疗中的研究被引量：1: 2009年; 单纯疱疹病毒-胸苷激酶（HSV-TK）目前已进行了恶性脑瘤、卵巢癌、前列腺癌等肿瘤的临床试验。结果表明，该基因疗法能够提高患者生活质量，延缓肿瘤生长、复发和转移，且无明显不良反应。; 杨强邓志华; 关键词：基因疗法胸苷激酶

hTERT启动子驱动的肿瘤抑素靶向肝癌细胞表达及其抗血管形成的作用被引量：1: 2011年; 目的:观察人端粒酶逆转录酶基因(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)启动子驱动的肿瘤抑素(tamsta-tin)基因在肝癌细胞HepG2内特异性表达及其体外抗血管形成的作用。方法:构建phTERT-tumstatin、pCMV-tumstatin(阳性对照)、phTERT-EGFP(阴性对照)质粒,脂质体介导转染HepG2肝癌细胞、L-02正常肝细胞,荧光显微镜检测EGFP的表达。Western blotting检测tumstatin在HepG2细胞内的表达,MTS法检测稳定转染后HepG2细胞的增殖以及含或不含tumstatin蛋白的条件培养基对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vascular endothelial cell,HUVEC)增殖的影响。通过计数管样分支数检测tumstatin蛋白对HUVEC管道结构形成的影响。结果:成功构建phTERT-tumstatin、pCMV-tumstatin和phTERT-EGFP质粒,质粒转染后tumstatin基因在肝癌细胞HepG2中特异地表达,在正常肝细胞L-02中无表达。phTERT-tumstatin和phTERT-EG-FP转染均不影响HepG2细胞的增殖。含tumstatin蛋白的条件培养基CM-T抑制HUVEC的增殖[抑制率为(56.49±0.33)%];CM-T与不含tumstatin蛋白的条件培养基CM-N、CM-NT相比显著抑制了HUVEC血管结构的形成[(3.33±1.53)%vs(24.44±3.11)%、(23.94±2.92)%,P<0.01)]。结论:phTERT基因启动子可驱动tumstatin靶向表达于肝癌细胞,并抑制HUVEC血管管道结构形成。; 李倩倩邓志华郎伟宁贺丹丹; 关键词：肿瘤抑素 HTERT启动子抗血管生成

hTERT基因启动子调控HSV-tk/GCV系统对HepG2细胞杀伤作用的实验研究被引量：2: 2008年; 目的:研究人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因核心启动子调控的人单纯疱疹病毒胸苷激酶/更昔洛韦(HSV-tk/GCV)系统对肝癌细胞体外杀伤作用。方法:以pGL3-hT-ERT/tk为基础,构建pGL3-hTERT/luc、pGL3-basic/tk、pGL3-control/tk等真核表达载体,分别将其用脂质体法转染HepG2肝癌细胞和正常肝细胞L02,荧光显微镜观察转染效果,给予前药GCV,用原位末端标记(TUNEL)法、流式细胞仪检测hTERT调控的HSV-tk/GCV系统对两种细胞的杀伤作用,Western blot检测细胞周期素Cyclin D1、CDK2、p21蛋白表达。结果:hTERT启动子调控的HSV-tk/GCV系统对肝癌细胞有明显的杀伤作用,使41.85%的细胞凋亡;而对正常细胞作用不明显,Western也显示Cyclin D1、CDK2蛋白表达下降而p21升高。结论:hTERT启动子调控的tk基因治疗是一种具有肿瘤特异性的治疗方法,有望解决肿瘤基因治疗中的特异性杀伤及降低毒副反应等问题。; 王晶晶杨长青邓志华王桂琴; 关键词：基因

乙肝病毒X蛋白对不同肝细胞系凋亡的诱导作用被引量：3: 2012年; 目的:研究乙型肝炎病毒X蛋白(hepatitis B virus X protein,HBX)通过核转录因子NF-κB信号通路对不同肝细胞系凋亡的诱导作用。方法:建立稳定转染PEGFP-N1-HBX质粒的人正常肝细胞系L02(L02/HBX)和人肝癌细胞系HepG2(HepG2/HBX),用特异性NF-κB阻断剂吡咯二硫代氨基甲酸酯(pyrrolidine dithiocarbamate,PDTC)阻断NF-κB信号通路,流式细胞术检测PEGFP-N1-HBX转染前后及加入PDTC前后L02和HepG2细胞的细胞周期与凋亡,Western blotting检测NF-κB的表达。结果:成功构建了稳定转染PEGFP-N1-HBX的L02/HBX和HepG2/HBX细胞。与对照组L02细胞相比,L02/HBX细胞凋亡率明显增加[(31.31±0.51)%vs(14.05±0.09)%,P<0.05];其G0/G1期细胞比例显著增加,S期和G2/M期细胞比例减少。与对照组HepG2细胞相比,HepG2/HBX细胞凋亡率显著降低[(1.21±0.04)%vs(10.26±0.10)%,P<0.05];其G0/G1期细胞比例显著减少,S期和G2/M期细胞比例增加。PDTC作用后,L02/HBX/PDTC组凋亡率[(40.33±0.07)%]及G0/G1期细胞比例较L02/HBX组显著增加,G2/M期细胞比例明显减少,而HepG2/HBX/PDTC组凋亡率[(5.45±0.07)%]及G0/G1期细胞比例较HepG2/HBX组显著增加,S期和G2/M期细胞比例明显减少,但其凋亡率仍低于对照HepG2细胞。West-ern blotting结果显示,L02/HBX细胞NF-κB表达显著下调,而HepG2/HBX细胞NF-κB表达显著增加,L02/HBX/PDTC和HepG2/HBX/PDTC细胞NF-κB几乎不表达。结论:HBX可下调正常肝细胞L02 NF-κB蛋白的表达,阻滞细胞周期,促进细胞凋亡;而HBX可增加肝癌细胞系HepG2中NF-κB蛋白的表达,加速细胞周期,抑制肝癌细胞凋亡。; 杨倩邓志华贺丹丹; 关键词：乙型肝炎病毒X蛋白凋亡

人端粒酶逆转录酶-双自杀基因对肝癌的靶向杀伤作用被引量：1: 2009年; 目前联合基因治疗最常用的是有单纯疱疹病毒胸苷激酶（HSV—TK）和大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶（CD）。同时，肿瘤的基因治疗要求导入的自杀基因表达严格限制于靶细胞（肿瘤细胞），而对正常细胞的生长无影响，因此寻找肿瘤细胞的靶点成为亟待解决的现实问题。端粒酶是维持端粒长度的一种逆转录酶，对细胞增殖、衰老及永生化和癌变超重要作用。; 刘京龙邓志华杨长青刘燕贾静郭素雅杨强撖绍锦李倩倩郎伟宁; 关键词：人端粒酶逆转录酶双自杀基因靶向杀伤作用单纯疱疹病毒胸苷激酶联合基因治疗肝癌

端粒酶反义寡核苷酸诱导肝癌细胞凋亡的实验: 2009年; 目的研究端粒酶反义寡核苷酸对肝癌细胞株的凋亡诱导作用及其机制。方法以人肝癌细胞株SMMC-7721、正常肝细胞株L-02为研究对象,采用TRAP-ELISA法对肿瘤细胞端粒酶活性进行定性定量分析;细胞形态学、TUNEL染色、DNA琼脂糖凝胶电泳观察端粒酶反义寡核苷酸对肝癌细胞的凋亡诱导作用,用流式细胞仪对细胞周期进行时相分析,Western杂交对细胞周期蛋白进行研究。结果一定浓度的端粒酶反义寡核苷酸可抑制肝癌细胞端粒酶活性,肝癌细胞端粒酶活性被抑制后传代23～26次出现细胞凋亡。细胞凋亡与细胞周期蛋白有关。结论端粒酶反义寡核苷酸可抑制肝癌细胞端粒酶活性并诱导其凋亡。; 邓志华杨长青刘燕刘金龙杨强赵婕韩子岩曹燕; 关键词：端粒酶肝癌反义寡核苷酸细胞凋亡

端粒酶活性的调节及其在肿瘤基因治疗中的研究进展: 2011年; hTERT基因启动子是具有肿瘤特异性的启动子，受多种因子的调控。染色质结构经DNA甲基化或核小体组蛋白修饰被认为是hTERT启动子重要的调控。新近研究发现细胞因子糖原合酶激酶-3、巨噬细胞集落刺激因子受体1、骨诱导因子-7、转录因子c-myc抑制剂、转化生长因子β、环戊烯酮前列腺素以不同方式调控hTERT的活性。端粒酶特异性的复制腺病毒Telomelysin已应用于临床，基于hTERT的各种基因治疗也在不断的研究中。; 李倩倩邓志华; 关键词：肿瘤端粒酶靶向治疗

pGL3-hTERT-tk／GCV对胃癌细胞的促凋亡作用被引量：4: 2008年; 目的:探讨重组质粒pGL3-hTERT-tk/GCV对胃癌细胞的促凋亡作用。方法:以基因工程方法构建重组质粒pGL3-hTERT-tk和相应的荧光报告质粒pGL3-hTERT-tk-Luc^+;脂质体Lipofectamine^(TM)2000瞬时转染胃癌细胞系SGC-7901并用GCV干预,荧光显微镜观察细胞形态变化和转染效率,TUNEL标记和流式细胞术观察转染后胃癌细胞的凋亡;以上实验均以正常肝细胞L-02为对照。结果:经鉴定,重组质粒pGL3-hTERT-tk中tk片段的长度为1100 bp。荧光素酶标记的阳性、阴性对照及治疗报告质粒pGL3-hTERT-tk-Luc^+均能有效转染高表达端粒酶活性的胃癌细胞SGC-7901,转染效率为(8.2±1.14)%。重组质粒转染胃癌细胞后与GCV共育4 d,细胞的凋亡率为(60.0±1.56)%;被pGL3-hTERT-tk转染的肿瘤细胞细胞周期发生了变化,处于细胞周期早期的细胞大量凋亡,早期凋亡率为(47.1±1.35)%。结论:pGIB-hTERT-tk/GCV对胃癌细胞有强烈的杀伤作用,但不影响正常细胞的生长,有潜在临床应用前景。; 邓志华杨长青王桂琴王晶晶; 关键词：HTERT启动子自杀基因单纯疱疹病毒胸苷激酶

Ad-hTERTp-单纯疱疹病毒胸苷激酶／丙氧鸟苷系统联合奥沙利铂对人类肝癌细胞的影响被引量：3: 2011年; 目的研究腺病毒介导的Ad—hTERTp一单纯疱疹病毒胸苷激酶／丙氧鸟苷（Ad-hTERTp—HSV—TK／GCV）自杀基因系统联合奥沙利铂对人类肝癌细胞HepG2的体外杀伤作用。方法将带有hTERT启动子驱动HSV—TK基因的重组复制缺陷型腺病毒Ad-hTERTp-HSV-TK作为载体。感染复数（MOI）为100转染HepG2细胞，观察不同浓度的Ad-hTERTp—HSV-TK／GCV、奥沙利铂及二者联合对HepG2细胞生长的影响。用锥虫蓝活细胞拒染法、四甲基偶氮唑盐比色（MTF）法检测各干预组肝癌细胞生长的抑制率。结果3组HepG2细胞的生长均不同程度被抑制，且随药物浓度的增加抑制作用显著增强。Ad—hTERTp—HSV。TK／GCV联合奥沙利铂组抑制率最高（86．63％），与Ad—hTERTp—HSV．TK／GCV组抑制率（72．12％）及奥沙利铂组抑制率（59．41％）相比差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论Ad—hTRTq：Tp—HSV—TK／GCV联合奥沙利铂可显著增强对HepG2细胞的杀伤作用，增加靶向性的同时可以降低药物浓度，对临床用药有指导意义。; 刘京龙邓志华郭素雅张瑾; 关键词：肝肿瘤基因疗法药物疗法

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