国家自然科学基金(31071585) 作品数:16 被引量:175 H指数:8 相关作者: 张文学 刘超兰 王海英 吴正云 邓宇 更多>> 相关机构: 四川大学 农业部沼气科学研究所 四川水井坊股份有限公司 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 安徽省高校省级自然科学研究项目 更多>> 相关领域: 轻工技术与工程 生物学 理学 更多>>
水井坊窖底泥微生物群落结构的DGGE分析 被引量:22 2012年 为了补充和验证研究浓香型白酒不同窖泥的微生物群落特征分析,该研究采用DGGE技术对水井坊酒厂窖龄分别为50及150年相同窖池不同部位窖底泥(三点取样法)进行细菌、古菌和真菌微生物群落特征分析。研究结果显示:50年和150年窖龄窖泥的微生物群落的演替特征和分布特征具有一定相似性,进一步验证了50年可能是窖池微生态发生较大变化的一个分界线这一推测的准确性;不同部位的窖底泥的微生物群落结构具有一定的差异性,因此在今后对窖底泥的实验研究中,采用多点取样法进行分析。 王海英 张文学 施思 范鏊 邓宇关键词:窖泥 细菌 古菌 真菌 DGGE 不同年份窖泥中主要产甲烷菌的荧光定量PCR研究 被引量:13 2013年 产甲烷菌是窖泥发酵生产浓香型白酒的重要功能菌。本研究为了探究不同年份窖泥中主要产甲烷菌的变化规律,通过荧光定量PCR方法定量检测窖龄分别为5年、30年、50年窖泥中的主要产甲烷菌,得到甲烷鬃毛菌属(Methanosaeta)、甲烷八叠球菌属(Methanosarcina)、甲烷杆菌属(Methanobacter)的原始Copies数。结果表明,随着窖泥年份的增加,3种产甲烷菌属的Copies数均呈不同幅度的增加趋势。运用荧光定量PCR分析了不同年份窖泥中主要产甲烷菌的Copies数,对窖泥质量的判定提供了准确的生物学信息,为弄清浓香型白酒的微生物发酵机理奠定了理论依据。 罗青春 刘超兰 吴正云 张文学关键词:窖泥 产甲烷菌 荧光定量PCR 白酒发酵窖泥中一株产氢细菌的分离及其代谢特性分析 被引量:3 2013年 利用Hungate严格厌氧技术从窖齡为20年的老熟窖泥中分离到1株菌株S11-18-8。通过16S rRNA序列比对,其与NCBI中的Clostridium mesophilum strain SW408(NR_044386)的同源性最高,高达99%。研究了该菌株在乳酸钠培养基、葡萄糖培养基、黄水培养基和葡萄糖-糟醅浸提液培养基等不同发酵条件下的发酵特性。结果表明,该菌株在各发酵条件下均能够产生H2、乙酸和丁酸。在黄水培养基中细菌S11-18-8不仅能够发酵代谢产生丁酸和乙酸等有机酸,还能起到很好的"降乳"作用。在葡萄糖糟醅培养基中主要也是代谢产生乙酸和丁酸,同时起到"增己"的作用。因此,推测该菌株在白酒发酵过程有着重要作用。 黄丹 刘超兰 张文学 邓宇 邓宇 赖登燡关键词:产氢细菌 荧光定量PCR在研究白酒发酵糟醅优势菌中的应用 被引量:4 2014年 耐酸乳杆菌和伊萨酵母属分别是白酒发酵过程中糟醅细菌群落和真菌群落的优势菌,在发酵过程中起着非常重要的作用,与白酒质量息息相关。采用荧光定量的方法研究了不同发酵时期、不同窖池部位糟醅中耐酸乳杆菌和东方伊萨酵母的数量。结果表明,同一发酵时期同一窖池位置的耐酸乳杆菌数量都高于东方伊萨酵母;在同一发酵时期靠近窖壁糟醅中耐酸乳杆菌和东方伊萨酵母的数量均比窖池中部的多,在窖池同一位置发酵中期耐酸乳杆菌和东方伊萨酵母的数量也均比发酵后期数量多。为进一步深入研究及控制发酵过程提供了数据支持。 黄丹 刘超兰 张文学关键词:白酒 荧光定量 优势菌 不同窖龄窖泥中放线菌的荧光定量PCR研究 被引量:5 2015年 放线菌在浓香型白酒生产的发酵窖泥中普遍存在。为了探究不同窖龄窖泥中放线菌的变化规律,选取了两个知名酒厂窖龄分别为5年、20年、50年和1年、20年、50年的窖泥样品,并通过荧光定量PCR方法定量检测窖泥中放线菌的原始Copies数。结果表明,同一酒厂相同窖龄的不同窖池窖泥中,放线菌数量较为接近。随着窖泥窖龄的增加,放线菌的Copies数随之增加。研究结果为进一步揭示窖泥微生物变化规律以及判断窖泥的老熟程度提供了相关依据。 裴乐乐 罗青春 刘超兰 吴正云 张文学关键词:窖泥 放线菌 荧光定量PCR 不同窖龄窖泥细菌的系统发育多样性分析 被引量:29 2013年 提取20、50、150a窖龄窖泥样品总DNA,构建窖泥细菌16S rDNA文库,经过16S rDNA扩增片段的限制性酶切分析(ARDRA)、DNA序列测定和系统发育关系分析,对不同窖龄窖泥细菌群落组成与多样性进行研究。结果表明:398个细菌阳性克隆子分成37个可操作分类单元(OTUs),系统发育分析归为6个门,优势顺序为:厚壁菌门(Firmicute)65.1%、拟杆菌门(Bacteroidetes)21.4%、绿弯菌门(Chloroflexi)4.8%、放线菌门(Actinobacteria)3.8%、未分类细菌(Unclassified Bacteria)3.9%和变形菌门(Proteobacteria)1.0%,窖泥中的大多数克隆子(73.9%)与未培养细菌亲缘关系近。20a窖泥优势菌是Syntrophomonas、Petrimonas、Proteiniphilum,50a和150a龄窖泥优势菌为Natronoanaerobium和Unclassified Clostrida。随着窖龄的增加,窖泥细菌多样性指数呈增加的趋势,从20~50a之间变化幅度较大,50a和150a窖泥的菌群结构最为相似。本研究初步揭示了不同窖龄窖泥细菌系统发育多样性与窖泥老熟老化的关系。 王明跃 张文学 王海英 刘超兰关键词:窖泥 RDNA序列 克隆文库 系统发育 多样性 16S rDNA克隆文库法与高通量测序法在浓香型大曲微生物群落结构分析中的对比研究 被引量:31 2015年 针对浓香型白酒大曲样本,以16S r RNA基因为目的片段,分别采用16S r DNA克隆文库法和高通量测序法分析大曲中细菌微生物群落的组成,并通过丰度和多样性分析,比较了两种方法在研究大曲样品细菌多样性方面的适用性。结果表明,在门、纲、目、科和属的分类水平上,克隆文库方法检测大曲样本微生物得到4个门,4个纲,5个目,4个科,6个属;高通量测序得到13个门,22个纲,33个目,61个科,133个属。在门的水平上,克隆文库与高通量测序检测出优势类群的总数量与总丰度分别为3个(99.32%)和4个(98.61%),共有优势类群及其丰度分别为Firmicutes(88.88%和79.32%)、Proteobacteria(7.8%和15.04%)、Actinobacteria(2.72%和1.77%)。重复样本分析,得出的结果相似。克隆文库法与高通量测序法在反映样本微生物群落规模上差异较大,而在反应大曲样本中主要微生物的物种组成及数量比例上结果相近,特别是样本中优势微生物类群的结果基本相同。两种方法各具优势。 陈玲 袁玉菊 曾丽云 廖作敏 陈伊童 吴正云 张文学关键词:大曲 微生物群落 菌落原位杂交法筛选特定菌种的方法初探 被引量:1 2013年 菌落原位杂交法是重组DNA技术中最常用的方法之一,但该方法存在着杂交背景复杂及杂交结果不稳定性等缺点,所以进一步优化杂交体系显得尤为迫切。本研究通过优化杂交体系,最终确定利用溶菌酶处理杂交膜和采用非严紧型洗脱方式洗膜,不仅使得杂交体系的杂交结信号清晰,而且杂交背景较干净。研究结果表明,在探针特异性好的基础上,采用优化的菌落原位杂交体系筛选特定菌种是可行的。 刘超兰 王海英 李文芳 张文学 赖登燡 范鏖关键词:寡核苷酸探针 地高辛 浓香型白酒不同窖泥的微生物群落特征分析 被引量:53 2011年 窖泥是发酵过程微生物栖息的生态环境之一,不同窖泥中的微生物种群随窖泥生产利用年份和环境不同而呈现不同的多样性。本研究利用细菌16S rDNA的V7~V8区和产甲烷古菌16S rDNA V3区的PCR-DGGE技术,分析了不同窖泥的微生物群落特征;同时进行了部分细菌16S rDNA的V7~V8区的序列测定。结果表明,不同窖龄及不同颜色的窖泥表征出特异性的细菌与产甲烷古菌群落发育状况;UPGAMA聚类分析显示50年和150年黑色窖泥的菌群结构最为相似;序列分析表明DGGE图谱中部分条带的基因序列与基因库相似菌的相似性在82%~99%之间,其中梭菌属和未被鉴定的细菌是这些窖泥样品的优势菌。 施思 王海英 张文学 邓宇 赖登燡 范鏖关键词:微生物 窖泥 细菌 DGGE 不同窖龄窖泥古菌的系统发育多样性分析 被引量:22 2012年 为探索不同窖龄窖泥古菌类群与演替规律,分别提取20、50和150年窖龄窖泥样品总DNA,应用PCR—ARDRA和16SrDNA克隆测序技术对不同窖龄窖泥古菌群落结构进行研究.结果表明:191个克隆子分成22个可操作分类单元(OTUs),系统发育分析归为6个类群,分别属于甲烷八叠球菌属(Methanosarcina)、甲烷杆菌属(Methanobacterium)、甲烷袋状菌属(Methanoculleus)、甲烷粒菌属(Methanocorpuseulum)、甲烷鬃菌属(Methanosaeta)和甲烷螺菌属(Methanospirillum).不同窖龄窖泥的优势古菌类群有明显差异,20年窖泥优势古茵类群以乙酸利用型Methanosarcina、Methanosaeta为主,50年、150年龄窖泥优势古菌类群以氢气营养型Methanocorpusculum、Methanobacterium为主;随着窖龄的增加,窖泥古菌Shannon.Wiener多样性指数(日)和Berger-Parker优势度指数(D)呈增加的趋势,Pielou均匀度指数(,)呈降低趋势;不同窖龄窖池古菌的相似性系数为0.429~0.677,50年和150年窖泥的菌群结构最为相似.本研究揭示了不同窖龄窖泥古菌系统发育多样性的差异与窖泥老熟的关系. 王明跃 张文学 王海英 刘超兰关键词:窖泥 RDNA序列 克隆文库 系统发育