国家自然科学基金(31071540)
- 作品数：10 被引量：64H指数：6
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- 金黄色葡萄球菌噬菌体的生物学特性及其在牛奶中的抑菌应用被引量：18
- 2013年
- 分离纯化一株裂解性金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)噬菌体,鉴定其理化和生物学性质,并研究噬菌体在牛奶中的抑菌作用。本研究以金黄色葡萄球菌(ATCC6538)为宿主菌,采用点滴法和双层平板法,分离获得特异性针对金黄色葡萄球菌的具有较高裂解活性的噬菌体,命名为qdsa001。经过透射电镜观察表明,该噬菌体属于长尾噬菌体科(Siphoviridae),最佳感染复数为0.1。一步生长曲线结果显示噬菌体感染宿主菌的潜伏期约为10min,爆发期约90min,平均裂解量约为32.2。它对60℃以下的温度耐受力较强,最适pH值为5～9左右。同时,牛奶中抑菌应用实验表明,噬菌体qdsa001对牛奶中金黄色葡萄球菌的生长具有良好的抑制作用。
- 蔡天舒王静雪林洪孔令红李萌
- 关键词：金黄色葡萄球菌噬菌体生物学特性
- 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶反应条件优化及在大肠杆菌生物发光检测法中的应用
- 2014年
- 利用还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)具有荧光性的原理,对葡萄糖-6-磷酸脱氢酶催化的反应条件进行了优化,目的是提高细菌生物发光法检测大肠杆菌的灵敏度。葡萄糖-6-磷酸脱氢酶可以专一性地将烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADP+)转化为NADPH,在激发波长为340 nm、发射波长为460 nm的条件下可以测定反应生成的NADPH荧光强度。本研究确定了实验的最适反应pH为7.5,葡萄糖-6-磷酸的反应浓度为5 mmol/L,葡萄糖-6-磷酸脱氢酶的反应浓度为0.4 U/mL。同时将细菌生物发光法与酶促反应相结合,建立了大肠杆菌与NAD(P)H发光强度之间的关系,为酶促细菌生物发光法应用于大肠杆菌的检测提供基础资料。[中国渔业质量与标准,2014,4(3):12-17]
- 刘慧慧王静雪林洪
- 关键词：NADPH荧光法葡萄糖-6-磷酸脱氢酶大肠杆菌
- 鳆发光杆菌荧光素酶的提取、分离与纯化被引量：2
- 2013年
- 建立了从鳆发光杆菌中提取纯化荧光素酶的方法。鳆发光杆菌25℃培养12h,经过超声破碎、硫酸铵沉淀等步骤后得到粗酶液,再通过DEAE Sepharose CL-6B、DEAE Sephadex A-50进一步纯化,得到电泳纯的荧光素酶,通过SDS-PAGE测得其有两个亚基,分子量分别为36、41ku。经过硫酸铵沉淀以及两步层析后,荧光素酶的纯化倍数达到100倍以上,证明该实验过程具有较好的纯化效果,为荧光素酶性质的研究和商业化应用提供了技术支持。
- 俎聪李明鲁晓东王静雪
- 关键词：荧光素酶纯化
- 一株副溶血弧菌qdfsVp001的分离与鉴定被引量：3
- 2012年
- 用弧菌选择从牙鲆饲育水中分离出1株细菌qdfsVp001,对该菌在培养基上的菌落形态、生理生化特性及其16SrDNA基因序列进行研究,结果表明该菌在TCBS平板上呈现大的蓝绿色菌落,在弧菌显色培养基上呈现紫色菌落,其生理生化特性具有副溶血弧菌的典型特征。16SrD-NA基因序列及系统发育树分析表明,该菌与弧菌的亲缘关系最近,其中尤与副溶血弧菌最为相似。结合qdfsVp001的形态、生理生化及16SrDNA基因序列分析结果,确定该菌株是1株副溶血弧菌。
- 丁云娟彭勇林洪王静雪
- 关键词：副溶血弧菌生理生化特性RDNA系统发育树
- 两株副溶血弧菌噬菌体的分离鉴定及裂解性能被引量：9
- 2012年
- 为探究副溶血弧菌的生物防治方法,自水产品市场污水排放处及青岛岸边海水中分离出两株副溶血弧菌噬菌体VPp2、VPp3。借助噬菌斑形态、电镜、酶切等技术对其进行了分类鉴定,测定了其裂解谱、最佳感染复数、一步生长曲线并研究其裂解性能。分类鉴定结果表明,VPp2、VPp3分别属于2株不同的噬菌体。其核酸均是线型双链DNA,均具有正二十面体的头部及较长的尾部,且均属肌尾科噬菌体。VPp2头部直径约64nm,尾长约114nm。VPp3头部直径约89nm,尾长约106nm。裂解性能研究结果表明,VPp2、VPp3在双层平板上均能形成清晰透亮的噬菌斑。其裂解谱相同。最佳感染复数均较小,潜伏期均较短,VPp2的裂解量只有11.1,而VPp3的裂解量可达45.3,是符合条件的潜伏期短裂解量大的噬菌体,可进一步应用于噬菌体治疗及检测等。
- 彭勇王静雪丁云娟林洪
- 关键词：副溶血弧菌噬菌体酶切
- 一株副溶血弧菌噬菌体的分离鉴定及生理特性被引量：10
- 2011年
- 为了探寻有效的控制副溶血弧菌的方法,从水产品市场的污水中分离出来一株烈性噬菌体qdvp001。采用双层平板法分离纯化噬菌体qdvp001,电镜观察其形态特征,并利用双层平板法测定其生理特性,包括热稳定性试验、最适pH、最佳感染复数及一步生长曲线,然后提取基因组进行酶切和序列分析。结果显示该烈性噬菌体qdvp001头部直径大约为79 nm,尾长大约118 nm,属于肌尾噬菌体科。它对60°C以下的温度耐受力较强,最适pH为7.0-8.0左右,最佳感染复数是0.000 1,感染宿主菌的潜伏期约20 min,裂解期约70 min,并获得部分DNA片段的序列。将获得的DNA序列在NCBI上进行比对,结果显示,qdvp001与其他噬菌体的同源性较低。该噬菌体很可能是一种新发现的噬菌体。
- 丁云娟彭勇林洪王静雪孔令红
- 关键词：副溶血弧菌噬菌体生理特性DNA序列
- Hg2+对鳆发光杆菌荧光素酶基因表达及发光强度的影响
- 目的,探讨Hg2+改变鳆发光杆菌YL(Photobacterium leiognathi)发光强度的机理。方法,以16SrRNA基因为参照基因,采用半定量RT-PCR的方法检测在Hg2+环境下生长的P.leiognath...
- 李明王静雪林洪
- 关键词：荧光素酶基因表达生物发光半定量RT-PCR
- 一株沙门氏菌烈性噬菌体的分离纯化与生理特性研究被引量：10
- 2013年
- 自水产品市场的污水中采用双层平板法分离纯化出一株烈性沙门氏菌噬菌体SP3。利用电镜观察其形态特征，SDS-PAGE电泳和琼脂糖凝胶电泳分析其结构蛋白和核酸成分，并测定其生理特性。包括一步生长曲线、热和pH稳定性、抑菌活性和最适保存条件。结果显示该烈性噬菌体SP3为双链DNA，属于长尾噬菌体科，结构蛋白为43．0～66．2ku。该株噬菌体潜伏期5rain，裂解期为75min，最适培养温度和pH分别为30-40℃和7～9，在液体环境中能够高效抑制沙门氏菌的生长。不同的保存方法显示，SP3在-20℃低温保存条件下活性保持较好。
- 李萌韩峰林洪王静雪
- 关键词：沙门氏菌生理特性
- 腐败希瓦氏菌噬菌体的分离纯化和生物学性质
- 2012年
- 以腐败希瓦氏菌Sp225为宿主菌,采用噬菌斑法和双层平板法分离纯化腐败希瓦氏菌噬菌体Spp001,并对其生物学性质进行研究。经分离纯化得到的Spp001裂解性好,噬菌斑清晰、大小一致。经鉴定,Spp001为长尾噬菌体科,核酸为DNA。对其性质研究表明,Spp001具有较好的热稳定性,且耐碱不耐酸,其最佳感染复数为10,一步生长曲线显示该噬菌体感染宿主菌潜伏期约为10min,爆发期约为20min,裂解量为98。研究首次分离纯化了腐败希瓦氏菌的噬菌体Spp001并研究其生理特性,对进一步研究抑制冷藏水产品的腐败具有重要意义。
- 孔令红王静雪林洪丁云娟蔡天舒
- 关键词：噬菌体分离纯化生物学性质
- Hg2+对鳆发光杆菌荧光素酶基因表达及发光强度的影响
- 目的,探讨Hg改变鳆发光杆菌YL(Photobacterium leiognathi)发光强度的机理。方法,以16Sr RNA基因为参照基因,采用半定量RT-PCR的方法检测在Hg环境下生长的P.leiognathi Y...
- 李明王静雪林洪
- 关键词：荧光素酶基因表达生物发光半定量RT-PCR
