国家质检总局科技计划项目(2004IK028)
- 作品数：3 被引量：10H指数：2
- 相关作者：王寿昆龚艳清陈信忠任聪徐淑菲更多>>
- 相关机构：厦门出入境检验检疫局福建农林大学更多>>
- 发文基金：国家质检总局科技计划项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学轻工技术与工程更多>>
- 实时荧光定量PCR法检测对虾皮下和造血器官坏死病毒被引量：2
- 2009年
- 应用实时荧光定量PCR最常用的TaqMan探针技术设计了探针和引物,并且用质粒技术构建了含有传染性皮下及造血器官坏死病毒(IHHNV)基因片段的阳性质控品,建立了检测IHHNVV的实时荧光定量PCR方法。对影响PCR的主要因素进行了优化,Mg2+浓度、引物和探针浓度、退火温度等均对扩增效率有明显影响。当Mg2+浓度为3.0-4.5mmol,退火温度为59～60℃时可获得最佳扩增效果。灵敏性试验表明该反应可检测体系中10拷贝的病毒核酸;该体系检测IHHNV具有很高特异性;对临床样品检测结果表明,该方法能快速、准确地检测样品中的IHHNV。
- 任聪陈信忠龚艳清徐菽菲王寿昆
- 关键词：TAQMAN探针实时荧光定量PCR
- 双重PCR同时检测对虾白斑综合征病毒(WSSV)和传染性皮下及造血器官坏死病毒(IHHNV)被引量：4
- 2008年
- 根据Genbank中对虾白斑病由白斑综合征病毒（WSSV）和传染性皮下及造血器官坏死病毒（IHHNV）的基因序列，设计了两对能分别检测WSSV和IHHNV保守片段基因的特异性引物，而且这两对引物在同一反应体系中可以同时对WSSV和IHHNV的DNA模板进行多重PCR扩增，得到大小分别为110bp（WSSV）和356bp（IHHNV）的扩增条带。对影响PCR反应的主要因素Mg“浓度和退火温度进行了优化，证明当Mg^2＋浓度为2．0～4．0mmd，退火温度为57～59℃时可获得最佳的扩增和检测效果。特异性试验结果表明，这两对引物检测WSSV和IHHNV具有很好的特异性，对其它对虾常见病原的PCR扩增结果均为阴性。敏感性测定结果表明，该反应体系最低能检测100pg的WSSV和IHHNV的DNA模板。临床检测表明，所建立的双重PCR方法可以适用于WSSV和IHHNV的同时检测和鉴别。
- 任聪龚艳清陈信忠徐淑菲王寿昆
- 关键词：双重PCR
- 实时荧光定量PCR法检测对虾白斑综合征病毒
- 对虾白斑病由白斑综合征病毒(WSSV)感染引起,所有养殖对虾对该病高度易感,蟹类、小龙虾、淡水虾以及各种龙虾也易感,但发病率和死亡率有很大差别。多种虾类常表现为持续感染或终身隐性感染。盐度剧烈变化等环境胁迫可能诱发该病爆...
- 陈信忠任聪龚艳清王寿昆
- 关键词：白斑综合征病毒TAQMAN探针实时荧光定量PCR
- 文献传递
- 实时荧光定量PCR法检测对虾白斑综合征病毒被引量：4
- 2009年
- 对虾白斑病由白斑综合征病毒（WSSV）感染引起,所有养殖对虾对该病高度易感,蟹类、小龙虾、淡水虾以及各种龙虾也易感,但发病率和死亡率有很大差别。多种虾类常表现为持续感染或终身隐性感染。隐性感染虾体内的病毒含量极低,需建立一种快速、灵敏、准确的检测方法。本文应用TaqMan探针技术设计了探针和引物,建立了检测WSSV的实时荧光定量PCR方法。对影响PCR反应的主要因素Mg^2＋浓度和退火温度等进行了优化,证明当Mg2＋浓度为3.5～4.0 mmol,退火温度为59～60℃时可获得最佳的扩增和检测效果。
- 陈信忠任聪龚艳清王寿昆
- 关键词：白斑综合征病毒TAQMAN探针实时荧光定量PCR
