江苏省高等学校大学生实践创新训练计划项目(ky102j201205)
- 作品数：2 被引量：0H指数：0
- 相关作者：孙瑞红潘世扬徐建彭珊珊许雨乔更多>>
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- 发文基金：江苏省实验诊断学重点实验室基金江苏省高等学校大学生实践创新训练计划项目江苏省自然科学基金更多>>
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- 病毒白细胞介素6对甲基转移酶1表达的影响
- 2013年
- 目的:观察病毒白细胞介素6(viral interleukin-6,vIL-6)对甲基转移酶1(DNA methyltransferase 1,DNMT1)表达的影响。方法:vIL-6真核表达质粒转染293T细胞,荧光定量RT-PCR和Western blot法检测DNMT1表达的变化,比色法检测DNMT1的活性。结果:荧光定量RT-PCR和Western blot均表明vIL-6可显著促进DNMT1的表达,且vIL-6能上调DNMT1的活性。结论:vIL-6能诱导DNMT1的表达,可能是卡波济肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)致DNA甲基化异常,促进肿瘤发生发展的分子机制之一。
- 徐建许雨乔潘世扬彭姗姗黄蕾孙瑞红
- 关键词：卡波济肉瘤相关疱疹病毒
- 甲基化CpG结合域重组蛋白的表达与鉴定
- 2012年
- 目的:在大肠杆菌中表达甲基化CpG结合域(methyl-CpG-binding domain,MBD)重组蛋白。方法:对人甲基化CpG结合蛋白2(methyl-CpG-binding protein 2,Mecp2)的MBD区行密码子优化,将人工合成的DNA克隆至原核表达载体pGS21a,在大肠杆菌E.coli Rosetta(DE3)中诱导表达,通过SDS-PAGE和Western blot鉴定蛋白表达;镍亲和层析柱纯化重组蛋白。表面等离子共振分析重组MBD蛋白与甲基化DNA的结合能力。结果:酶切和核酸测序证实,成功构建了含密码子优化的MBD基因的原核表达载体。SDS-PAGE和Western blot结果显示,MBD重组蛋白在大肠杆菌中得到表达。亲和层析法纯化后获得了相对分子量为38 000的MBD重组蛋白。SPR分析显示MBD重组蛋白能特异结合甲基化DNA。结论:成功构建含密码子优化的MBD基因的原核表达载体,MBD重组蛋白能在大肠杆菌中表达。
- 徐建潘世扬许雨乔孙瑞红黄蕾彭珊珊
- 关键词：原核表达
