国家自然科学基金(30560131)
- 作品数：19 被引量：69H指数：5
- 相关作者：刘开泰钟近洁许永华李良忠张东辉更多>>
- 相关机构：新疆医科大学中国疾病预防控制中心兰州军区乌鲁木齐总医院更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- 乳鼠成骨细胞体外培养被引量：7
- 2007年
- 目的：建立乳鼠成骨细胞体外培养方法，探讨该方法的可行性和应用价值。方法：用出生1～3d乳鼠颅骨,采用多次胶原酶消化法进行细胞体外培养。倒置显微镜观察细胞形态，对其碱性磷酸酶（ALP）活性及矿化能力进行鉴定，并测定细胞生长曲线。结果：原代培养24h后,大量细胞贴壁生长．细胞呈圆形，48h后,贴壁细胞呈长梭形、三角形或不规则多边形．并且贴壁细胞伸出2～3个突起,胞质透亮、饱满，7d后细胞铺满整个平皿底面。经鉴定，培养细胞具有体内成骨细胞的生物学特性。细胞接种后第1与第2个24h为细胞的潜伏适应期，第3与第7个24h生长曲线基本为线性曲线，是细胞的对数生长期。结论：采用胶原酶消化法分离培养成骨细胞的方法切实可行。
- 刘岳强刘开泰杨晓燕钟近洁许永华张东辉周婷婷
- 关键词：成骨细胞胶原酶原代培养
- 氟对saos-2细胞体外增殖的影响被引量：2
- 2010年
- 目的探索无血清条件下不同剂量的氟对成骨细胞增殖活性的影响,及以转化生长因子β1(transforming growth factor beta 1,TGF-β1)和骨形成蛋白2(bone morphogenetic protein 2,BMP-2)表达水平间接反映氟对成骨细胞在骨重建过程中的功能的影响。方法以四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)和AlamarBlue法测定氟作用下细胞的增殖。用反转录聚合式酶链反应观察TGF-β1和BMP-2表达水平。结果与对照组相比,氟化钠浓度≤40mg/L时,对细胞均呈现出增殖作用。其中以10mg/L组的促增殖作用最强。当氟化钠浓度>40mg/L时,对细胞以抑制作用为主。两种方法的结果相似。与管家基因β-actin相比较,随氟化钠浓度增高,TGF-β1表达有逐渐增强的趋势,尤其是在80、160mg/L表达最强。BMP-2表达则呈现出在2.5～20mg/L表达明显较对照强,而40、80、160mg/L剂量组的表达较弱。结论氟化钠具有高剂量抑制细胞增殖的作用。即在过量氟作用下正常的成骨细胞合成和分解骨的因子间失去协同一致,偏离正常的动态平衡。
- 张亚楼刘开泰刘继文钟近洁
- 关键词：氟细胞增殖成骨细胞体外研究
- 氟化物对体外培养的小鼠成骨细胞增殖能力的影响被引量：3
- 2007年
- 目的:观察氟化钠对体外培养的成骨细胞的增殖能力的影响。方法:采用四唑盐(MTT)比色法,观察不同剂量氟化钠在不同时间对体外培养的小鼠成骨细胞增殖活力的影响。结果:剂量为2.5、5.0mg/L的氟化钠作用2d时,可使成骨细胞增殖活力较对照组明显增强;≥20mg/L时随着氟化钠剂量的增加和作用时间的延长,成骨细胞的增殖活力明显减弱。结论:氟化钠对成骨细胞的增殖呈现双向调节,且随时间的延长对细胞增殖能力的抑制逐渐增强。
- 周婷婷杨晓燕刘开泰钟近洁许永华张东辉李建瑛刘岳强
- 关键词：氟化钠成骨细胞增殖能力
- 氟对人成骨细胞TM9SF1和Ras mRNA表达的影响被引量：5
- 2009年
- 目的探讨氟对体外培养人成骨细胞中TM9SF1、RasmRNA表达的影响。方法采用原代细胞培养的方法培养人成骨细胞。取早期引产胎儿的骨组织，胶原酶消化、分离成骨细胞，加入DMEM培养液进行传代培养。将传代后的人成骨细胞按染氟剂量不同分为0（对照）、2．5、5．0、10．0、20．0mg／L组。染氟培养10d后，光镜下观察氟对人成骨细胞形态的影响；实时定量（RT）PCR法检测不同染氟剂量对体外培养人成骨细胞TM9SFI、Ras mRNA的表达影响。结果光镜下对照组和2．5mg／L组人成骨细胞呈长梭形、三角形或不规则多边形，有突起伸出，胞质透亮、饱满，相邻细胞彼此贴靠；20．0mg／L组人成骨细胞呈长梭形或不规则多边形，细胞数目明显减少、体积变大，一些细胞胞质出现了多个小空泡及颗粒样物质。不同染氟剂量对人成骨细胞TM9SF1 mRNA表达的影响，组间比较差异有统计学意义（F=322．82，P〈0．01）；其中2．5mg／L组（9326．0＋115．97）表达最高，随着染氟剂量增加，TM9SFImRNA表达降低，5．0、10．0、20．0mg／L组（6495．0±323．9、4387．5＋545．2、5962．5＋536．7）与对照组（9221．0＋107．5）比较，差异有统计学意义（P均〈0．01）。不同染氟剂量对人成骨细胞RasmRNA表达的影响，组间比较差异有统计学意义（F=703．28，P〈0．01）；其中对照组表达最高，随着染毒剂量的增加，RasmRNA表达减少，2．5、5．0、10．0、20．0mg／L组（6144．5±270．82、5603．5＋88．39、3181．0±159．81、4067．5±37．4）与对照组（6571．0±196．58）比较，差异有统计学意义（P均〈0．01）。结论氟影响人成骨细胞TM9SF1、RasmRNA的表达，表达量的高低与染氟剂量有关。
- 李良忠张宏印钟近洁周婷婷刘岳强刘开泰
- 关键词：氟化钠成骨细胞MRNARASMRNA
- 氟对成骨细胞中微小染色体维系蛋白3表达的影响被引量：3
- 2007年
- 目的探讨氟对体外培养成骨细胞中微小染色体维系蛋白3（minichromosome maintenance deficient3，MCM3）表达的影响。方法采用免疫组织化学技术、原位杂交技术以及SYBR GreenI嵌合荧光实时定量PCR（realtime RT-PCR）方法，检测不同剂量氟（0、5、10、20、40mg／L，处理10d）对体外培养成骨细胞中MCM3表达的影响。结果0、5、10、20、40mg／L各组细胞中均有MCM3蛋白及其mRNA表达，主要在细胞核中表达，与对照组比较，染氟实验组阳性表达强度高于对照组，阳性细胞数多于对照组，差异有统计学意义（P〈0．05），其中10mg／L组阳性表达高于其他实验组（P〈0．05），呈现双向作用。real time RT-PCR检测显示，各组均可检测到MCM3mRNA．相对定量比由对照组到高剂量组约为102：259：145：135：100：染氟实验组中5、10、20mg／L组表达量高于对照组和40mg／L组，以5mg／L组表达量最高，随着染氟剂量增加，基因表达量降低。结论不同剂量氟对成骨细胞中MCM3表达的影响不同，低剂量氟可以促进MCM3的表达，随剂量增加氟的促进作用减弱。
- 钟近洁许永华姚华刘开泰李良忠许琴
- 关键词：氟成骨细胞
- 氟对体外培养的成骨细胞Ras蛋白表达的影响被引量：1
- 2008年
- 目的:研究不同浓度的氟化物对体外培养的成骨细胞Ras蛋白表达的影响。方法:采用酶消化法分离乳鼠成骨细胞,经剂量分别为0、2.5、5.0、10.0和20.0mg/L的氟化钠(NaF)作用后,采用免疫组织化学法和Western blot法检测染氟后小鼠成骨细胞中Ras蛋白表达水平。结果:免疫组织化学法结果显示0、2.5及5.0mg/L实验组成骨细胞中Ras均有较强阳性表达,其余实验组的为弱阳性表达;各染氟组阳性表达细胞数与0mg/L比较差异有统计学意义(P<0.05)。小鼠细胞的Ras蛋白相对定量结果显示:2.5、5.0mg/L染氟组大于0mg/L,其它染氟组均小于0mg/L,染氟组的蛋白相对表达量有随着剂量增加而逐渐降低的趋势。结论:氟作用于成骨细胞后可以影响Ras蛋白的表达,表现为双向作用,即低剂量的氟促进Ras的蛋白表达,高剂量抑制Ras的蛋白表达。
- 刘岳强刘开泰杨晓燕刘继文钟近洁周婷婷
- 关键词：氟成骨细胞RAS蛋白
- 氟化钠诱导成骨细胞内质网应激特征被引量：5
- 2010年
- 目的观察内质网应激在染氟成骨细胞中的特征,探索氟能否直接引起成骨细胞内质网应激。方法 2.5、5、10、20、40、80mg/L氟化钠染毒原代培养成骨细胞,并设立空白对照组和衣霉素阳性对照组。24h后Western blot检测成骨细胞内重链结合蛋白(heavy-chain binding protein,BIP)、X盒结合蛋白-1(X box binging protein1,XBP-1)、生长抑制DNA损伤基因(CCAAT/enhancer-binding protein-homologous protein,CHOP,也称GADD153)、蛋白质二硫键异构酶(protein disulfideismoerase,PDI)表达水平。结果各染毒组PDI蛋白表达量与空白对照与比较差异无统计学意义,XBP-1从10mg/L氟化钠组起表达明显高于空白对照组,并随氟剂量表达量增加。从2.5mg/L氟化钠组起骨细胞中的BIP表达高于对照组(P<0.05);从10mg/L氟化钠组起,各氟染毒组的CHOP与β-actin的比值比对照组高(P<0.05)。结论氟能够引起成骨细胞内质网应激。
- 张亚楼刘开泰
- 关键词：成骨细胞内质网应激蛋白表达
- 氟与骨相关蛋白的关系被引量：5
- 2009年
- 氟是机体必需的微量元素之一,氟与人体生命活动及牙齿、骨骼组织代谢密切相关。骨相关蛋白是指在骨发生、骨折愈合等过程中起着决定性作用的几种蛋白质,包括:Ⅰ型胶原、骨钙蛋白、骨涎蛋白、骨桥蛋白、骨连蛋白和碱性磷酸酶。它们在氟骨症的发生、发展中与氟之间存在密切联系。揭示氟与骨相关蛋白之间的关系,将有助于阐明氟骨症的发生机制,为改进氟骨症的防治提供理论依据。氟对Ⅰ型胶原、骨连蛋白和碱性磷酸酶的表达与氟的剂量及作用时间有关,呈现先增强后抑制的现象。氟可能加速了骨钙蛋白、骨桥蛋白和骨涎蛋白的合成,促进氟骨症的发生。
- 唐莉刘开泰
- 关键词：氟
- 氟对骨骼损伤的分子机制研究进展被引量：9
- 2009年
- 在世界上许多地区，氟中毒是严重的公共卫生问题．在我国已经被列入国家重点防治的地方病。地方性氟中毒以氟元素在骨组织的异常蓄积导致骨转换增强为特征，主要表现为氟斑牙和氟骨病，目前。氟骨症的发病机制还不十分明确。以下对氟中毒的骨骼损伤的分子机制的研究作一简要综述。
- 张亚楼刘开泰
- 关键词：氟化物中毒分子作用机制
- 过量氟暴露对成骨细胞微小染色体维系蛋白3及成骨相关基因表达的影响被引量：3
- 2010年
- 目的 观察氟对体外培养人成骨肉瘤细胞内微小染色体维系蛋白（minichromosone maintenance,MCM）3和成骨相关基因表达的影响,探讨MCM3基因能否作为诊断及监测成骨细胞染氟过量的生物学标志.方法 采用McCoy5A培养液,体外培养人成骨肉瘤细胞（Saos-2）.按染氟（NaF）剂量将骨肉瘤细胞分为O（对照）、0.625、1.250、2.500、5.000、10.000、20.000、40.000 mg/L组,染氟培养24 h后收集细胞,实时荧光定量（real-time.RT-PCR）PCR测定成骨细胞MCM3和骨涎蛋白（bone sialoprotein,BSP）、骨钙素（osteocalcin,OC）、骨桥蛋白（osteopontin,OP）3种成骨相关基因mRNA的表达,化学比色法测定碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）活性,用双标准曲线法计算基因表达的相对比值.结果 成骨肉瘤细胞MCM3 mRNA表达在0.625、1.250、2.500、5.000、20.000、40.000 mg/L组（0.059±0.003、0.027±0.001、0.272±0.004、0.115±0.002、0.137±0.004、0.754±0.002）低于对照组（1.000±0.020,P均〉0.05）,但10.000 mg/L组（21.300±1.200）显著高于对照组（P〈0.01）,也高于其他染氟组（P均〈0.01）,组间比较差异有统计学意义（F=305.842,P〈0.01）.BSPmRNA表达在0.625、1.250、2.500、5.000、10.000 mg/L组（71.80±3.60、133.00±7.20、85.50±0.60、80.90±1.20、304.00±21.00）显著高于对照组（1.00±0.04,P均〈0.01）,尤其10.000 mg/L组明显高于其他染氟组（P均〈0.01）,组问比较差异有统计学意义（F=159.531,P〈0.01）.OC mRNA表达在0.625、1.250、2.500、5.000 mg/L组（110.00±12.00、143.00±2.10、90.60±4.10、23.70±1.20）高于对照组（1.00±0.01,P均〈0.01）,组间比较差异有统计学意义（F=158.734,P〈0.01）.OP mRNA表达,在0.625、1.250、2.500、5.000、10.000、20.000 mg/L组（167.00±11.20、111.00±12.10、72.50±3.50、134.00±14.00、42.30±2.40、45.20±3.30）高于对照组（1.00±0.04,P均〈0.05或〈0.01）,组间比较差异有统计学意义（F=60.226,P〈0.01）.ALP的
- 张亚楼刘开泰刘继文钟近洁
- 关键词：氟中毒骨转化
