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产气荚膜梭菌β_2-β_1毒素融合基因在大肠杆菌中高效表达条件的优化被引量：1: 2008年; 本研究在已获得产气荚膜梭菌β2-β1毒素融合基因表达载体,并在BL21(DE3)中成功表达的基础上,研究了以乳糖为诱导剂在不同条件下对β2-β1重组蛋白诱导表达的影响,并对其表达条件进行了优化。结果表明,重组菌株BL21(DE3)(pXETB2B1)在37℃、菌体诱导密度OD600为1.0、乳糖诱导浓度为0.1 g/L时诱导5 h,目的蛋白的表达效果最好,乳糖则以分批添加的方式为佳。; 曾瑾王玉炯邓光存高蔚丰; 关键词：产气荚膜梭菌融合蛋白表达条件优化

产气荚膜梭菌β_2-β_1毒素融合基因重组菌株免疫原性研究被引量：3: 2008年; 曾瑾王玉炯谢琴韩学波郭邦成; 关键词：产气荚膜梭菌重组菌株融合基因外毒素保护性抗原基因工程菌株

元基因组文库分析技术研究进展被引量：6: 2007年; 随着新的分析技术的不断出现和成熟,促进了微生物分子生态学及相关学科的诞生和迅速发展。其中,元基因组文库分析技术即是近年来微生物分子生态学研究领域兴起的一种新的分析技术。就元基因组分析技术诞生的背景及该技术的原理进行了讨论,着重阐述了元基因组文库分析技术在寻找新基因、开发新的生物活性物质、研究群落中微生物多样性、人类元基因组测序等方面的应用。另外,归纳总结了目前国际上常用的诸如PCR为基础的筛选、荧光原位杂交(fluorescent in situhy bridization,FISH)、底物诱导的基因表达筛选(substrate induced gene expression screening,SIGEX)、基因芯片等元基因组文库筛选方法,并就不同方法的优缺点进行了分析和讨论,指出了目前元基因组文库分析技术存在的主要问题并对今后该技术的发展进行了展望。; 李武赵勇王玉炯; 关键词：微生物分子生态学

大肠杆菌耐热性肠毒素ST Ⅰ突变体与黏附素K99融合基因的构建及其表达: 2009年; 采用PCR技术从产肠毒素大肠杆菌C83922质粒中扩增出耐热性肠毒素(STⅠ)和黏附素K99基因片段,进一步结合基因重组技术成功构建了含有融合基因ST Ⅰ-Linker-K99的重组质粒pMSLK;通过PCR和寡核苷酸定点突变技术将STⅠ毒素中心的6个Cys分别突变成Ser和Gly,经亚克隆后将含有突变位点的融合基因插入到pET-20b表达载体中,获得了重组质粒pES(S)LK和pES(G)LK;将以上2种质粒分别导入到BL21(DE3)菌株中,成功构建BL21(DE3)(pES(S)LK)和BL21(DE3)(pES(G)LK)2种重组菌株,对其表达产物进行SDS-PAGE和免疫印迹分析。结果表明:这两种重组菌株都能高效表达ST Ⅰ突变体与K99的重组蛋白,而且表达的融合蛋白能够被产肠毒素性大肠杆菌强毒株C83922抗血清特异性识别。; 李敏郭乐王亮王玉炯赵辉; 关键词：产肠毒素大肠杆菌黏附素融合基因

大肠杆菌耐热性肠毒素STI三重串联突变体与黏附素K99融合基因的表达研究被引量：2: 2010年; 产肠毒素大肠杆菌(ETEC)是一种导致仔畜和婴儿腹泻的主要病原之一,它的毒力因子主要有两类:黏附素(CFAs)和耐热性肠毒素(ST)或不耐热性肠毒素(LT)。通过PCR技术及双酶切连接技术,成功构建了含有3个STI突变体和1个黏附素K99基因的重组表达质粒pE3S(S)LK和pE3S(G)LK。重组菌株BL21(DE3)(pE3S(S)LK)和BL21(DE3)(pE3S(G)LK)的表达产物经SDS-PAGE和免疫印迹分析,表明以上两种重组菌株均能高效表达3STI(S)-K99和3STI(G)-K99融合蛋白,且融合蛋白能够被产肠毒素性大肠杆菌强毒株C83922抗血清特异性识别。其次,利用乳鼠灌胃实验检测重组蛋白的生物学毒性,结果均为阴性(G/C值≤0.083),这表明该菌株已无STI生物学毒性。这些为研发预防大肠杆菌性腹泻的新型高效多价基因工程疫苗提供了基本素材和理论指导。; 郭乐李敏王玉炯; 关键词：产肠毒素大肠杆菌黏附素

运用均匀设计法优化pST1-K99在原核系统中的表达: 2009年; 运用均匀设计法,对影响pST1-K99在大肠杆菌中表达的因素进行了优化,摸索出了对周质蛋白进行诱导表达的最佳条件,即pH=6.0,装液量30 mL,IPTG终浓度0.484 mmol/L,IPTG诱导时间6 h,诱导温度34℃.在此条件下,所表达的目的蛋白的平均密度从0.14提高到0.20,比优化前提高了43%.; 赵辉李敏王玉炯; 关键词：均匀设计

ASP-ChIFN-α融合基因的构建及表达: 2008年; 利用PCR技术从宁夏地方三黄肉鸡肝组织中扩增出α干扰素基因,构建成原核重组表达质粒pET-28a/ChIFN-α.从埃希氏菌属大肠杆菌(Escherichia coli)中扩增出L-天(门)冬酰胺酶Ⅱ(L-Asparaginase,ASP)信号肽基因,并与原核重组质粒pET-28a/ChIFN-α连接,构建成分泌型表达重组质粒pET-28a/ASP-ChIFN-α.将重组质粒经IPTG诱导5 h,用SDS-PAGE分析表达蛋白含量,并用鸡α-干扰素ELISA(Western-blot)试剂盒检测表达的重组蛋白的特异性.结果表明,包涵体型重组质粒pET-28a/ChIFN-α和分泌型重组质粒pET-28a/ASP-ChIFN-α在23 kD处均表达出目的蛋白,蛋白含量分别为27%和38%,pET-28a/ASP-ChIFN-α的蛋白表达含量比pET-28a/ChIFN-α的蛋白表达含量要高出11%,表达的重组蛋白具有特异性.实验实现了鸡α-干扰素成熟蛋白基因的高效表达,筛选出了可应用于临床的鸡α-干扰素高效表达菌株BL21(DE3)(pET-28a/ASP-ChIFN-α).; 李丽周学章李敏王玉炯

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国家自然科学基金(30560110)