国家自然科学基金(30560107) 作品数:13 被引量:9 H指数:2 相关作者: 谌南辉 宋德平 彭建平 刘嘉 王萍 更多>> 相关机构: 江西农业大学 复旦大学 辽宁医学院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 江西省自然科学基金 更多>> 相关领域: 农业科学 生物学 更多>>
鸡法氏囊B细胞酵母双杂交cDNA文库的构建 被引量:2 2009年 以酵母穿梭表达质粒pGADT72Ree为载体,采用CLONTECH SMART(switching mechanism at 5’end of RNA transeript)技术,在酵母细胞中构建鸡法氏囊B细胞的酵母双杂交cDNA文库。通过从分离的鸡法氏囊B细胞中提取总RNA,利用经修饰的CDS引物合成cDNA第一链,在链的末端可自动延伸CCC,在反应体系中加入SMART Ⅲ^TM Oligo作为cDNA第二链合成的引物,进行长距离(LD)2PCR合成双链eDNA,后者经CLONTECHCHROMASPIN+TE24000柱纯化后,与线性质粒pGADT72Ree共转化感受态酵母菌AH109,二者在酵母细胞中利用酵母细胞内具有较高的同源重组酶活性,进行同源重组成环行的有复制活性的文库质粒,在缺亮氨酸(LEU)培养板上筛选出所有克隆,即为鸡法氏囊B细胞的酵母双杂交cDNA文库。结果:共获得2.2×10^6转化子,文库扩增后,插入cDNA长度在0.5—3kb。研究结论表明可在酵母细胞中利用CLONTECH SMART技术成功构建鸡法氏囊B细胞的酵母双杂交eDNA文库。 彭建平 刘嘉 谌南辉关键词:酵母细胞 CDNA文库 SMART技术 鸡法氏囊三肽囊素阳性细胞cDNA酵母展示文库的筛选 2009年 在禽类和哺乳类中存在的三肽囊素(Bursin),对禽类和哺乳类淋巴细胞具有重要的免疫调节功能及生理学活性。牛骨髓和肝脏中含有三肽囊素(Bursin)序列的前囊素(pro Bursin)的分离使我们假设:在鸟类和哺乳类中存在的三肽囊素可能是由前囊素酶解而来的。为了验证这种假设我们通过提取鸡法氏囊三肽囊素阳性细胞的mRNA、构建cDNA酵母展示文库、对酵母展示文库用流式细胞仪进行三轮抗三肽囊素单克隆抗体以及FITC标记山羊抗小鼠IgM单克隆抗体的分选,最后对第3次分选得到的酵母克隆随机挑20个进行测序。这20个克隆中并没有编码三肽囊素的核酸序列,因此我们推测:在鸡法氏囊内三肽囊素不是由其前体囊素的裂解而来,而可能是由一种类似微生物体内低分子量的多肽通过非核糖体途径有多肽合成聚合酶的聚合作用合成的,这需要进一步的试验验证。 陶明华 廖凯 张国强 谌南辉 胡松年关键词:流式细胞仪 生命信息安全控制太极经纬图解构 2023年 基于前期危险因子与生命机体机制信息相关互动图,探索危险因子与生命机体机制信息间所属功能位置关系和内在联系,将该互动图从二维形式提升到三维形式,构建出生命信息安全控制太极经纬图。该图由5个太极纬平面和1个垂直贯穿太极纬平面的生命信息安全控制轴组成,控制轴与太极纬平面间构成虚与实、经与纬关系,形成“致虚极,守静笃”的动态平衡局面。5个太极纬平面分别代表模式识别受体识别病原体相关分子模式和损伤相关分子模式、NK细胞活化受体识别机制、特异性识别系统机制、正负反馈性调控机制以及黏膜、皮肤与共生微生物相互联系机制。由太极纬平面间内在功能联系分析:第1、2太极纬平面机制处在整个系统最前沿位置,应对危险原发生第一响应,把危险原信息传递给第3太极纬平面;第3太极纬平面接受危险原信息,发生第二响应,处在“后援位置”;第4太极纬平面针对信息应答过度或不足作适时调整,作正、负反馈性功效,在整体系统中处于极其重要效应作用地位;第5太极纬平面机制是整个系统的基盘,特别是黏膜系统,该安全控制系统重点布局集中在此,体现在功能力量对比中巨量共生微生物客观存在决定其重要作用地位。由太极经纬图显示,NK细胞活化受体-配体关系中的配体归入该系统范畴中。首次提出“危险原”概念,涵盖抗原、病原体相关分子模式、损伤相关分子模式和NK细胞活化受体-配体(变应信息)的配体。还推出NK细胞功能效应机制原理假说:以物种整体遗传信息为背景,构筑决定攻击与否防控性配套受体-配体关系,推测细胞基因组中存在表达代表自身身份信息配体的基因家族和表达报告变应信息配体的基因家族。上述构建的太极经纬图显示出生命信息安全控制机制的整体构象。 谌南辉 宋德平关键词:生命信息 安全控制 解构 鸡源Bursin-ScFv噬菌体展示文库的构建及初步筛选 被引量:1 2008年 本研究利用抗三肽囊素(Bursin)单克隆抗体免疫SPF来航鸡,获得产生抗独特型抗体的脾细胞,从中提取总RNA,经反转录合成cDNA第一链。以cDNA第一链为模板,根据来航鸡IgG抗体重链(VH)、轻链(VL)可变区基因FR设计引物,进行PCR扩增。在体外扩增出该抗体的可变区VH和VL基因(大小分别约为370和320 bp)。通过重叠延伸反应(SOE),以(Gly4Ser)3为连接肽,将VH和VL基因连接成为VH-Linker-VLScFv,将ScFv DNA与噬菌粒载体pHEN1的连接产物转化于大肠杆菌TG1,经辅助噬菌体M13K07感染后,获得重组的鸡源抗三肽囊素独特型抗体全套单链噬菌体抗体库。并测得该库容量约为5×105,噬菌体中ScFv基因的插入率为80%,用辅助噬菌体援救后,得到滴度为1011PFU/mL的初级噬菌体抗体库。用抗Bursin单克隆抗体(2F9-4/HU2)进行4轮"吸附-洗脱-扩增"的淘筛,出现特异性富集。经ELISA、动物试验表明所筛选的5个阳性克隆可与抗Bursin单克隆抗体(2F9-4/HU2)特异性结合,并能促进抗体的生产。 邬向东 曲悦 谌南辉 王萍 何后军关键词:三肽囊素 抗独特型抗体 可变区 重链 噬菌体抗体库 合成三肽囊素阳性噬菌体模拟七肽的免疫活性初步研究 2011年 为探讨三肽囊素(Bursin)模拟七肽的免疫活性及其与Brusin的相关性,本研究根据Bursin阳性噬菌体展示七肽库中筛选得到的氨基酸序列(MTTNLQQ)人工合成该七肽。以ELISA和竞争ELISA检验合成七肽与Bursin在体外的免疫学反应的相关性;比较不同剂量的合成七肽(设定Bursin作为对照)对鸡新城疫病毒(NDV)弱毒疫苗(La Sota株)在鸡体诱导的特异性免疫应答的影响。结果显示合成七肽与抗Bursin单克隆抗体(2F9-4/HU2)能够特异性结合并且该结合作用可被Bursin阻断;动物试验的结果表明,低剂量(0.09mg)的合成七肽对疫苗诱导的体液免疫应答的增强作用与Bursin相当,而且高剂量(0.3mg)的合成七肽对细胞免疫应答具有一定的增强作用。因此,认为七肽序列MTTNLQQ具有与Bursin类似的免疫活性。 欧阳辉 谌南辉关键词:三肽囊素 模拟肽 免疫效应 生命信息安全控制原理的再探讨 被引量:2 2016年 建立生命信息安全控制原理的理论性平台,由该平台的视野分析免疫学所涉及的诸多理论问题,譬如免疫记忆、免疫功能等方面,并针对性进行归纳以及绘制出相关图形,试图将免疫学理论中所呈现的纷繁复杂性的方面以及过于分散的条块更加条理化、清晰化及整体化。由逻辑学的层面讨论免疫学学名的形成,分析结果:免疫学学名应归结为主观是非逻辑意识产物,并主张认识论应回归自然生成逻辑的观点。免疫记忆在本质上是对遗传信息的记忆,离开了遗传信息的识别与分析就不存在免疫记忆。众多学者的系列研究资料表明,CD4+T细胞在CD8+T细胞反应的起始就辅助其发挥作用,并维持其记忆细胞功能,而CD4+T细胞的记忆是由TCR-MHCⅡ信号所决定。X线晶体衍射及三维结构图所显示MHCII类肽结合凹槽内的多肽更能显示出呈递多肽遗传信息的功能,而MHCI类分子肽结合凹槽内的多肽难以与呈递多肽遗传信息的功能联系起来。只有辅助性T细胞是决定与辅助记忆的细胞,其不仅决定B细胞胸腺依赖性抗原的记忆,而且决定CD8+T细胞的记忆性。对生命信息识别从记忆属性层面进行分类,即分为遗传信息密码识别(记忆属性)和非遗传信息密码识别(非记忆属性)2大类。通过危险因素、生命信息感应器、信息识别及应答调控这样4个相连贯环节的分析,绘制出生命信息安全控制原理图。从功能效应层面进行讨论,将生命信息安全控制的功效分类为正面功能效应和负面功能效应2大类,其中将组织修复归结为正面功能效应,创伤引起的无菌性炎症归结为负面功能效应。绘制出生命信息安全控制功效图,并讨论了生命信息安全控制功效图的建立在理论方面的重要意义。 宋德平 谌南辉关键词:学名 免疫记忆 原理图 三肽囊素(Bursin)模拟肽阳性噬菌体对新城疫疫苗免疫效果的影响 被引量:1 2007年 研究了两个噬菌体展示三肽囊素模拟肽阳性噬菌体的活性。将100羽1日龄罗曼鸡随机分成5组(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组),每组20羽,在2日龄时,Ⅰ组注射4号阳性噬菌体(滴度为211),Ⅱ组注射6号阳性噬菌体(滴度为211),Ⅲ组注射6号阳性噬菌体(滴度为29),Ⅳ组注射一定剂量的Bursin,Ⅴ组为TBS对照组,在8日龄时接种新城疫(ND)Ⅳ系苗,以后每隔1周采用微量血凝抑制试验和MTT法测定各组的免疫效应。结果表明:阳性克隆(4号和6号)与Bursin在动物试验上具有相似的免疫增强作用,能提高体液免疫水平,对细胞免疫也有提高,且这种促进作用的大小与所用噬菌体滴度有关。 侯宏艳 刘嘉 谌南辉 彭建平 金玉兰关键词:三肽囊素 血凝抑制 MTT试验 病原学机制原理初析 被引量:1 2015年 基于河图洛书承载信息的启迪构建了病原因子致病性原理图,据此就病原因子的类型以及生物因子、病原因子与宿主机体的内在联系进行了分析,以5个具有代表性的例证进行了病原学机制原理的讨论,分析表明,只有生物因子与机体共同存在的内化的相互作用条件下才能显示或证明生物因子对机体的效应,生物因子与病原因子的相互转化取决于与机体的同时存在所形成的相互作用关系和状态,提示在人类的实践中调整和优化机体的状态是比以抗生素直接杀灭病原菌更值得关注的选择。 谌南辉关键词:原理图 生物因子 A Preliminary Study on Principle of Etiology Mechanism 2016年 Based on the inspiration from Hetu and Luoshu,a principle diagram of pathogenicity of pathogenic factors was established.Accordingly,the inner correlations between pathogenic factor type and biological factors,and between pathogenic factors and host were analyzed.Mechanism of pathogenesis was discussed with five representative cases.The result indicated that effect of biological factors on host could be proved only with the performance of internalization conditions of biological factor and host.The reciprocal transformation between biological factors and pathogenic factors was decided by interaction and state of co-existed factors and host.The results suggested that it is a better and attractive choice to regulate and optimize the host’s state in practice than direct elimination of pathogens with antibiotics. Chen Nanhui生命信息安全控制体系整体结构性构建与分析 2019年 在前期生命信息安全控制原理探讨的基础上,基于整体论的思考,旨在构思能表述生命信息安全控制体系实质内涵的几何图形。所作图呈圆台形,自上而下依次为2大部分(内在部分和外延部分),5个层次(特异性识别系统、泛特异性识别系统、皮肤黏膜、共生微生物及外环境开放接触面)。在圆台形生命信息安全控制体系中,圆台形的中心轴为生命信息安全控制轴;特异性识别系统、泛特异性识别系统、皮肤、黏膜和共生微生物组成内在部分;外延部分即外环境开放接触面;内在部分各部间以及与外延部分之间存在物质、能量、信息交流沟通传递的空间界面。特异性识别系统建立在泛特异性识别系统基础上,置于最顶端,寓意着生物进化高级发展的一种客观结局,泛特异性识别系统与特异性识别系统作为一个整体和共生微生物层次联系,其中安插皮肤、黏膜组织层次,符合宏生物与微生物之间存在的完全不可分割的相关关系客观事实。共生微生物层次举足轻重,所占份额最大,主导整个体系的稳定性,成为整个体系的基座。就上述5个层次及其相互关系的解析归纳,证明构建的圆台形几何图能真实客观反映出生命信息安全控制体系各层次之间完全不可分割、相互依存影响的关系。 谌南辉 宋德平关键词:整体论