河南省科技攻关计划(082101510002)
- 作品数：3 被引量：12H指数：2
- 相关作者：万博乔松林张改平鲍登克杨苏珍更多>>
- 相关机构：河南省农业科学院河南农业大学郑州大学更多>>
- 发文基金：河南省科技攻关计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 猪IFN-β和IRF-3基因实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立被引量：2
- 2012年
- 为建立猪IFN-β及IRF-3基因实时荧光定量PCR检测方法,依据GenBank中IFN-β和IRF-3基因的保守序列,设计并合成各自特异性引物,并以β-actin为内参基因,采用SYBR Green-Ⅰ为染料,建立实时荧光定量检测方法。提取猪肺泡巨噬细胞总RNA,经反转录得cDNA,用特异性引物经PCR扩增得到IFN-β和IRF-3基因,将其克隆至pMD-19T载体,经测序鉴定后得重组质粒,依次10倍稀释做为标准品,建立标准曲线及溶解曲线。结果表明,β-actin基因、IFN-β基因和IRF-3基因标准曲线线性关系较好,R2≥0.997;溶解曲线为特异性单峰,无非特异性扩增,检测下限可达100个拷贝/μL。建立的猪IFN-β和IRF-3基因实时荧光定量RT-PCR检测方法,特异性强、重复性好,为从分子水平上研究猪的免疫应答奠定了基础。
- 王蕊张改平乔松林刘永晖蒋志政万博鲍登克王爱萍
- 关键词：实时荧光定量PCR
- 猪α干扰素的表达及在PAM细胞系中抗PRRSV活性检测被引量：9
- 2010年
- 为研究猪α干扰素蛋白功能和了解猪α干扰素蛋白的抗病毒活性,扩增并测序了猪α干扰素基因(IFN-α),并克隆至原核表达载体pET-28a中,构建原核表达载体pET-IFN-α,将pET-IFN-α转化至BL21进行表达。Western-Blot结果表明,表达的蛋白具有很好的生物学活性。用细胞病变抑制法在PAM细胞系上进行抗病毒活性测定,结果表明,猪α干扰素有较为显著的抗PRRSV活性,其抗病毒活性效价约为1.13×106U/mg。
- 万博鲍登克乔松林徐德杨苏珍王彦斌张改平
- 关键词：猪Α干扰素抗病毒活性猪繁殖与呼吸综合征病毒
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒不同毒株感染对猪外周血免疫细胞含量的影响被引量：1
- 2009年
- 采用猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)变异株HN07-01和经典美洲株BJ-4人工感染2月龄仔猪,通过观察发病情况、检测外周血免疫细胞和PRRSV特异血清抗体水平,研究了不同毒株PRRSV的致病特性。结果表明:PRRSV变异株感染后能够引起高热症状;变异株HN07-01株感染后引起的外周血各类免疫细胞下降速度和下降程度显著高于BJ-4株。提示PRRSV变异株引起机体的免疫抑制明显强于BJ-4株;PRRSV特异血清抗体结果表明:变异株和BJ-4株均能快速诱导机体产生抗体。
- 万博乔松林张改平叶晓敏肖志军
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征白细胞体温
