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2型重组腺相关病毒介导的β-地中海贫血基因治疗实验被引量：6: 2011年; 目的探讨2型重组腺相关病毒(rAAV2)能否有效转染重型β-地中海贫血患者造血细胞,通过体外途径基因治疗地中海贫血。方法 6只BALB/c裸小鼠分为转染组(n=4)和未转染组(n=2),经X射线照射后,分别移植入经rAAV2β-珠蛋白病毒转染(MOI=50)或未转染的β41-42/β654杂合子型重型β-地中海贫血流产胎儿造血细胞,转染后第28天和第70天分别处死rAAV2转染小鼠(n=2)和未转染受体小鼠(n=1)。采用RT-PCR、等位基因特异性PCR(ASPCR)法检测rAAV2介导的人β-珠蛋白基因在小鼠骨髓中的表达,并以高压液相色谱法量化分析受体小鼠外周血中人β-珠蛋白肽链的水平。结果①RT-PCR于所有受体小鼠样本中均可检测到人β-actin和人β-珠蛋白基因的表达。②ASPCR检测中,β41-42突变基因稳定表达于所有受体小鼠,β654突变基因仅在移植后第70天受体小鼠样本中被检测到;移植后第28天,rAAV2转染及未转染小鼠体内均可检测到主要来自于β654突变基因的正常β-珠蛋白基因表达;但至移植后第70天,仅rAAV2转染小鼠骨髓样本中仍可检测到rAAV2-β-globin载体介导的正常β-珠蛋白基因表达。③移植后第70天处死的转染小鼠外周血中人β链/α链分别为0.328和0.325,相对未转染组0.135的比值,两者的增加百分比高达144.78%和142.54%。结论经rAAV2介导基因修饰后的重型β-地中海贫血患者造血细胞在体内可长期稳定表达正常人β-珠蛋白基因,而其分化产生的外周血人红系细胞内β-珠蛋白肽链的合成增加。; 田晶王峰薛金凤赵霏钟梅宋柳江谭孟群; 关键词：重组腺相关病毒 Β-地中海贫血基因治疗

脐带间充质干细胞治疗脊髓小脑性共济失调及多系统萎缩小脑型临床分析被引量：8: 2010年; 目的观察脐带间充质干细胞(UC-MSC)鞘内注射,治疗脊髓小脑性共济失调(SCA)及多系统萎缩小脑型(MSA-C)的临床效果。方法 2009年10月至2010年9月,对14例SCA及10例MSA-C患者,给予UC-MSC鞘内注射治疗,每次1×106 cells/kg,1次/周,4次为1个疗程。其中3例SCA患者接受2个疗程,余均接受1个疗程。采用世界神经病联合会国际合作共济失调评分量表(ICARS)及日常生活量表(ADL)对患者治疗前后神经功能进行评定,分值越高表示神经功能缺损越严重。结果本组患者治疗后1个月与治疗前比较,ICARS及ADL明显降低(P<0.01)。除1例SCA患者治疗无效外,其余患者均有效,表现为行走和站立不稳、运动迟缓、上肢精细动作障碍、书写困难、构音障碍等临床症状得到改善。治疗后常见不良反应有头晕(4例)、腰痛(2例)、头痛(1例),但均在1～3 d内自行消失。结论 UC-MSC鞘内注射治疗是安全的,可以一定程度地改善SCA及MSA-C患者的临床症状,提高患者生活质量。; 刘静薛梅朱玲丁丽阎洪敏王志东韩冬梅郭子宽王恒湘; 关键词：脐带间充质干细胞脊髓小脑性共济失调多系统萎缩

重组腺病毒介导的前列腺癌基因治疗研究进展被引量：1: 2009年; 前列腺癌的基因治疗已逐渐成为研究热点。载体系统是基因治疗的基础。目前,腺病毒载体在前列腺癌基因治疗中应用最为广泛。溶瘤腺病毒的研究进展为前列腺癌基因治疗开辟了新的途径。近年研究表明,溶瘤腺病毒单独使用或与治疗基因联合应用,能够有效发挥抗肿瘤效应。治疗基因是发挥功能的关键因素。自杀基因能将药物转化为毒性代谢产物,细胞因子能增强抗肿瘤免疫效应,血管生成抑制因子能抑制血管生成,凋亡相关分子能诱导细胞凋亡,这些基因在前列腺癌的基础和临床研究中均表现出一定的肿瘤生长抑制作用。本文对重组腺病毒介导的前列腺癌基因治疗基础及临床研究进展进行综述。; 杨月峰吴祖泽王立生; 关键词：前列腺癌基因治疗腺病毒科 DNA

前列腺癌特异性启动子P(A)PTp的构建及评价被引量：1: 2011年; 目的构建前列腺癌特异性启动子PSAe(AREc)-PSMAe-TARPp[P(A)PTp],并在腺病毒水平评价其启动目的基因表达的效率和特异性。方法巢式PCR扩增基因组DNA获得PSAe的AREc区基因、PSMAe基因和TARPp基因,并依次连接获得嵌合启动子P(A)PTp。采用Adeasy系统构建并制备P(A)PTp启动增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)表达的重组腺病毒Ad-pSh-P(A)PTp-EGFP。不同感染复数(multi-plicity of infection,MOI)的Ad-pSh-CMV-EGFP感染各细胞系后48 h,流式细胞术确定最佳MOI;并以最佳MOI的Ad-pSh-P(A)PTp-EGFP感染各细胞系,检测EGFP的表达效率。结果 PCR成功扩增并连接获得嵌合启动子基因P(A)PTp。采用Adeasy系统,构建并制备了重组腺病毒Ad-pSh-P(A)PTp-EGFP。Ad-pSh-CMV-EGFP感染后,流式检测结果显示,前列腺癌细胞PC3和PC3M细胞的最佳MOI为100 MOI;而前列腺癌细胞DU145以及肝癌细胞SMMC-7721和HepG2为250 MOI。最佳MOI的Ad-pSh-P(A)PTp-EGFP感染后,EGFP在各细胞系中的表达效率[P(A)PTvsCMV]为:PC3(25.56%vs77.76%)、DU145(50.50%vs65.26%)、PC3M(30.81%vs89.70%)、HepG2(6.26%vs63.76%)、7721(2.27%vs67.84%)。结论成功构建前列腺癌特异性嵌合启动子P(A)PTp,并证实能在前列腺癌细胞中特异并有效地启动EGFP的表达。; 杨月峰王华肖凤君王荣亮李庆芳严俊吴祖泽王立生; 关键词：前列腺肿瘤基因表达腺病毒科绿色荧光蛋白质类流式细胞术

重组腺病毒介导的前列腺癌基因治疗研究进展: 前列腺癌的基因治疗已逐渐成为研究热点。载体系统是基因治疗的基础。目前,腺病毒载体在前列腺癌基因治疗中应用最为广泛。溶瘤腺病毒的研究进展为前列腺癌基因治疗开辟了新的途径。近年研究表明,溶瘤腺病毒单独使用或与治疗基因联合应用...; 杨月峰吴祖泽王立生; 关键词：前列腺癌基因治疗腺病毒科; 文献传递

重组腺病毒Ad5-KAI1对骨髓瘤细胞的功能调节作用: 2011年; 目的研究抗癌一号KAI1(又称CD82)基因对骨髓瘤细胞生物学特性的影响及机制。方法将携带KAI1基因克隆至重组腺病毒,制备Ad5-KAI1重组腺病毒,并感染骨髓瘤细胞SKO-007。Ad5-GFP作为阴性对照,未感染细胞为空白对照,利用CCK-8和AnnexinⅤ-PI等方法分别检测不同时间点(24 h,48 h)的细胞活率和凋亡水平。另外,利用W estern印迹方法检测不同组别细胞表达ERK及其磷酸化水平。结果 Ad5-KAI1组细胞活率抑制水平和凋亡水平明显高于对照组,且剪切型胱天蛋白酶(caspase)3、ERK磷酸化水平在实验组高表达,而抑制ERK磷酸化则导致凋亡进一步增加。结论 KAI1显著抑制骨髓瘤细胞增殖,并诱导其caspase依赖的凋亡;KAI1在促进凋亡的同时,其应激性诱导了ERK磷酸化,后者又对细胞具有保护作用。; 肖凤君王宗芹严俊杨月峰李庆芳王华王立生; 关键词：腺病毒科 KAI1 胞外信号调节激酶

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国家科技重大专项(2009ZX09503-019)

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