国家科技重大专项(2009ZX09503-011)
- 作品数：3 被引量：2H指数：1
- 相关作者：李世崇陈昭烈叶玲玲刘红刘兴茂更多>>
- 相关机构：军事医学科学院更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项“十一五”国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 诱导表达p27对HEK293细胞生长代谢的影响
- 2011年
- 目的:研究诱导表达p27对HEK293细胞生长和代谢的影响。方法:将pTet-on载体和响应于Dox的p27诱导表达载体共转染HEK293细胞,随机挑选单克隆细胞株。以细胞周期分布和活细胞密度为主要观察指标,考察稳定转染的细胞在Dox诱导下的细胞生长;以Qglc、Qlac和Qgln为主要观察指标,考察转染细胞在Dox诱导下的细胞代谢。结果:p27基因的表达使HEK293细胞的增殖速度显著降低,G1期细胞比例显著升高,葡萄糖消耗和乳酸生产减少。结论:诱导表达p27基因是对HEK293细胞进行G1期阻滞的一种有效策略。
- 叶玲玲刘红李世崇刘兴茂陈昭烈
- 关键词：HEK293细胞细胞周期代谢P27
- 一种基于三顺反子表达载体的生物素诱导表达系统的建立
- 2011年
- 目的:建立一种以无毒的生物素为诱导剂的哺乳动物细胞诱导表达系统。方法:通过基因组PCR或重叠延伸PCR获得该系统的三个基本构件:大肠杆菌生物素连接酶(BirA)、链亲和素-四环素依赖的抑制因子融合蛋白(SA-TetR)和生物素化信号-VP16转录激活结构域融合蛋白(Avitag-VP16)。将上述基因连入三顺反子表达载体,与响应载体一起共转染293f细胞,以EGFP为报告基因,检测EGFP荧光强度随培养体系中生物素浓度变化的情况。结果:随着生物素浓度的增加,目的基因表达出现OFF-ON-OFF的变化,诱导状态下的EGFP荧光强度约为抑制状态下的3倍。结论:可通过调节生物素浓度对目的基因的表达进行可逆的调节,该系统是一种有应用前景的诱导表达系统。
- 叶玲玲李世崇刘红刘兴茂何文俊陈昭烈
- 关键词：生物素哺乳动物细胞诱导表达系统EGFP
- hTERT基因组成型过量表达的Vero细胞系的建立被引量：2
- 2010年
- 目的:建立组成型过量表达hTERT的Vero细胞系。方法:从质粒pCI-neo-hTERT酶切、分离纯化hTERT cDNA,克隆入phEF/chMAR-hyg载体中,构建重组真核表达质粒phEF/chMAR-hyg-hTERT。采用脂质体转染法转染Vero细胞,经潮霉素筛选、克隆分离培养,用RT-PCR检测转染阳性细胞克隆的hTERT mRNA表达丰度,Western blotting验证高丰度表达hTERT mRNA克隆的hTERT表达。用Cedex AS20细胞密度和活力分析系统考察过量表达hTERT Vero细胞在组织培养板中批次培养的生长特性。结果:从phEF/chMAR-hyg-hTERT转染阳性细胞中筛选出hTERT mRNA和蛋白高丰度表达的Vero细胞系(Vero-T1),Vero-T细胞在批次培养中后期的细胞密度和活力均高于野生型Vero细胞。结论:成功建立了hTERT基因组成型过量表达的Vero细胞系,为探索以组成型过量表达hTERT的技术途径改善细胞培养特性、提高病毒疫苗生产工艺水平奠定了基础。
- 王海涛叶玲玲李世崇刘红谢靖吴本传陈昭烈
- 关键词：HTERTVERO细胞细胞系
