国家自然科学基金(3027049)
- 作品数：10 被引量：57H指数：5
- 相关作者：徐如祥姜晓丹邹雨汐杜谋选蔡颖谦更多>>
- 相关机构：南方医科大学中国人民解放军第一军医大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省重大科技项目广东省科技计划工业攻关项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- dsRNA阻断大鼠骨髓源性神经干细胞Hes5表达的实验研究被引量：5
- 2004年
- 目的 观察外源性短双链RNA(dsRNA)在转录后水平即mRNA水平降低基因表达的效率，并对其影响因素进行初步探讨。方法 将体外分离培养的大鼠骨髓基质细胞，通过由本实验室配制的特殊培养基诱导成神经干细胞，应用人工合成的dsRNA于不同浓度转染神经干细胞，Western bloting检测dsRNA是否能阻断转录因子Hes5的表达，0．5％锥虫蓝法测定各浓度组中培养细胞活力。结果 200、300nmol／L浓度的dsRNA能特异有效地阻断Hes5的表达，而50～200nmol／L浓度的dsRNA有利于干细胞存活。结论 dsRNA能在神经干细胞内启动RNA干扰作用，适宜浓度的dsRNA能在特异有效地阻断内源性基因的表达的同时，最大限度地保持细胞活力。
- 王海燕徐如祥姜晓丹罗深秋
- 关键词：DSRNA骨髓源性神经干细胞基因表达
- 神经干细胞的迁移和网络化被引量：2
- 2004年
- 神经干细胞的迁移和网络化是近一个世纪以来神经科学领域研究的热点之一。目前已经有比较成熟的理论解释神经系统生长发育过程中神经干细胞的迁移和网络化复杂的机制。在近年来兴起的神经干细胞移植技术中也得到进一步的证实和应用。本文将分别从神经干细胞的迁移现象及其定向迁移的可能机制,神经网络的研究进展和神经干细胞迁移和网络化的意义等方面进行综述。
- 薛杉张旺明徐如祥
- 关键词：神经干细胞神经网络神经系统
- 绿荧光蛋白标记人骨髓源性神经干细胞的体外实验研究被引量：20
- 2003年
- 目的:探讨重组腺相关病毒包装绿荧光蛋白(rAAV-GFP)标记人骨髓源性神经干细胞(BM.NSCs)的可行性,为进一步行标记细胞移植实验研究奠定基础。方法:以成人自愿者的骨髓为研究对象,梯度密度离心法分离获取骨髓基质细胞并用“Cytokine·神经干细胞培养基”诱导分化为神经干细胞,分化的细胞以免疫细胞化学鉴定。对接种生长的BM.NSCs(1×105～6/mL)以无血清培养基冲洗并重悬细胞,依最佳病毒感染指数(MOI)为105的标准计算、加入包装了GFP的rAAV病毒颗粒,连续培养12h(37℃,50mL/LCO2)以感染细胞;补加100g/L胎牛血清后,于神经干细胞培养基中继续细胞培养24h(37℃,50mL/LCO2)以上,荧光显微镜(OlympusIX70,Japan)追踪观察rAAV-GFP标记的BM.NSCs。结果:BM.NSCs于标记后1周内见不到GFP阳性表达;在标记10d后才出现有GFP阳性表达情况(平均每个200倍镜下视野可见到5～10个GFP阳性细胞),所标记的细胞在荧光显微镜下呈亮绿色;随着培养时间延长,BM.NSCs表达GFP也逐渐增强、阳性细胞数量逐渐增多,并可于1个月时最明显(标有GFP阳性的细胞可达BM.NSCs总数的60%),追踪观察到到2.5个月时亦未见衰减。结论:rAAV-GFP在人骨髓源性神经干细胞中的表达较迟,但呈渐强趋势;rAAV-GFP标记人骨髓源性神经干细胞具有可行性。
- 姜晓丹徐如祥张旺明邹雨汐蔡颖谦杜谋选
- 关键词：骨髓源性神经干细胞体外实验
- pDsRed1-N1基因核转染兔原代骨髓基质细胞的实验研究被引量：2
- 2005年
- 目的探讨以最近发展起来的核转染技术直接将编码红色荧光蛋白DNA质粒转染到兔原代骨髓基质细胞细胞核内进行基因修饰的可行性。方法从兔股骨抽取骨髓,密度梯度离心法获取原代骨髓基质细胞。以NucleofectorTM技术转染pDsRed1-N1(DsRed组) ,以同期培养未转染的细胞作为对照组。测定细胞的活力、贴壁率、生长曲线以及转染的效率。结果在转染后48h成功发现DsRed的表达。两组细胞具有相似的形态学变化、贴壁率以及生长曲线。DsRed的表达逐渐增强,至第10天达到最高峰(54·2 %) ,观察1个月未发现表达减弱。结论pDsRed1-N1基因核转染对兔原代骨髓基质细胞的体外增殖无明显影响; DsRed可以作为兔骨髓基质细胞有效的基因表达标记; NucleofectorTM技术是一种简易而高效的转染兔原代骨髓基质细胞的方法。
- 陈镇洲徐如祥姜晓丹滕晓华周虎田
- 关键词：红色荧光蛋白骨髓基质细胞
- 不同浓度血清对大鼠骨髓基质细胞生长的影响被引量：11
- 2005年
- 目的:探讨不同浓度血清对大鼠原代培养骨髓基质细胞(BMSCs)功能的影响,寻求培养所需的适宜血清浓度。方法:利用MTT法绘制细胞生长曲线、流式细胞仪分析细胞生长周期及细胞凋亡的变化,PCR-ELISA法分析细胞端粒酶活性的改变。结果:①血清能明显促进BMSCs增殖,表现为G0/G1期细胞减少,S期细胞增加,群体细胞倍增时间缩短。②在组成BMSCs的Ⅰ型和Ⅱ型细胞发育生长过程中,血清对Ⅱ型细胞的增殖无明显促进作用;对Ⅰ型细胞,血清能明显促进细胞增殖。③短时间内血清对于BMSCs端粒酶活性无明显影响。结论:①对于BMSCs中不同类型的细胞采用的培养条件应因类而异。②血清对Ⅰ型细胞的增殖具有明显促进作用。③血清并不能促进Ⅱ型细胞增殖,但在短时间内对其分化亦无明显影响。
- 滕晓华徐如祥邹雨汐姜晓丹蔡颖谦杜谋选
- 关键词：骨髓基质细胞细胞增殖端粒酶
- 神经移植的种子细胞:大鼠骨髓基质细胞部分生物学特性被引量：7
- 2005年
- 目的:分离培养SD大鼠骨髓基质细胞(bonemarrowstromalcebls,BM-SCs),观察BMSCs部分生物学特性。方法:实验于2004-03/08在珠江医院广东省神经医学研究所实验室进行。采用密度梯度离心法分离BMSCs,MTT法绘制细胞生长曲线、流式细胞仪检测细胞生长周期、鉴定细胞表面标志,免疫荧光染色观察细胞的神经分化功能及端粒酶反转录酶(TERP)表达。PCR-ELISA法检测细胞端粒酶活性。结果:①采用密度梯度离心法可以得到高纯度的BMSCs,表达CD29,CD44等表面标志,而不表达CD31,CD34,CD45。②BMSCs主要由Ⅰ,Ⅱ型两种形态的细胞组成,其中Ⅱ型细胞表达端粒酶活性并可以诱导分化为Nestin阳性细胞。③骨髓基质细胞原代培养时增殖能力较低。结论:BMSCs主要有两种形态和功能不完全相同的细胞类型组成,其中Ⅱ型细胞具有端粒酶活性,并在一定的诱导条件下可以分化为Nestin阳性细胞,可以考虑作为神经移植的种子细胞来源。
- 滕晓华邹雨汐徐如祥黄涛姜晓丹
- 关键词：骨髓细胞细胞移植
- 源于成人骨髓神经干细胞诱导分化的实验研究(英文)被引量：21
- 2003年
- 目的研究成人骨髓分离培养神经干细胞的可行性,为进一步自体移植治疗脑退行病变的临床应用奠定基础。方法以20例成年男/女性(28～48岁)骨髓自愿捐献者为取材对象,骨穿术后经梯度密度离心分离获取的成人骨髓基质细胞用“Cytokine·神经干细胞培养液”培养,确定神经干细胞的最佳体外生存环境。以细胞克隆方法判断神经干细胞增殖;以巢蛋白(Nestin),神经元特异性烯醇化酶(NSE)和胶质原性纤维酸性蛋白(GFAP)免疫细胞化学方法分别鉴定神经干细胞、神经元和神经胶质细胞。所涉及的细胞因子主要有脑源性神经营养因子(BDNF)、白血病抑止因子(LIF)(10μg/L)和维A酸(RA)(0.5mg/L)等。结果成人骨髓基质细胞在相应培养条件下快速分裂增殖为神经干细胞,并由含粗大胞质颗粒的多个神经干细胞组成岛屿状细胞球(神经球),该细胞球表达特殊的神经干细胞Nestin抗原;进一步将这些细胞球分离成单细胞并重新以克隆密度培养,单个的细胞又很快变成岛屿状神经球。神经干细胞球进一步分化,则可见到有的细胞胞体增大并出芽、逐渐发育成为较成熟的长突起细胞,长突起相互连接、交织成网,分化的长突起细胞表达NSE或GFAP。结论成年人骨髓在一定条件诱导下可以生成神经干细胞;用人骨髓组织诱导神经干细胞作为种子细胞具有可行性。
- 姜晓丹徐如祥张世忠柯以铨
- 关键词：成人骨髓移植神经干细胞细胞分化
- pEGFP-C2基因核转染兔原代骨髓基质细胞的实验研究(英文)被引量：1
- 2006年
- 目的探讨以最近发展起来的核转染技术直接将编码绿色荧光蛋白DNA质粒转染到兔原代骨髓基质细胞的细胞核内进行基因修饰的可行性。方法从兔股骨抽取骨髓,密度梯度离心法获取原代骨髓基质细胞。以NucleofectorTM技术转染pEGFP-C2(EGFP组),以同期培养未转染的细胞作为对照组。测定细胞的活力、贴壁率、生长曲线以及转染的效率。结果在转染后24h成功发现EGFP的表达。两组细胞具有相似的形态学变化、贴壁率以及生长曲线。EGFP的表达逐渐增强,至第6天达到最高峰(47.8%),观察一个月未发现表达减弱。结论pEGFP-C2基因核转染对兔原代骨髓基质细胞的体外增殖无明显影响;EGFP可以作为兔骨髓基质细胞有效的基因表达标记;NucleofectorTM技术是一种简易而高效的转染兔原代骨髓基质细胞的方法。
- 陈镇洲徐如祥姜晓丹黄涛杜谋选
- 关键词：绿色荧光蛋白骨髓基质细胞
- 神经干细胞的迁移和网络化(英文)被引量：1
- 2005年
- 目的:从神经干细胞的迁移现象及其定向迁移的可能机制,神经网络的研究进展和神经干细胞迁移和网络化的意义等方面进行综述。资料来源押应用计算机检索Pubmed数据库1970/2004期间的相关文章,限定文章语言种类为English,检索词为“neuralstemcell,migration,nervenet”。资料选择押对资料进行初审,选取神经干细胞迁移和网络化的随机和非随机对照实验。排除综述类和重复的文章。资料提炼押共收集到相关文献39篇,共检出16篇文献涉及神经干细胞的迁移和网络化研究的进展,其余文献均被排除。资料综合:对于神经系统退行性病变及严重损伤,神经干细胞移植有可能替代衰老变性和死亡的神经细胞,重建神经网络,恢复失去的脑功能。神经细胞的迁移和网络化原理可以应用以解决神经干细胞移植后的存活、分化、迁移及神经网络建立的问题,实现脑功能修复重建。结论押神经干细胞在特定的情况下可以迁移到预计的地方并建立神经网络。
- 薛杉张旺明徐如祥
- 关键词：干细胞神经系统
- 不同年龄大鼠组织端粒酶活性变化的研究
- 2005年
- 目的了解不同组织端粒酶活性随年龄变化的规律,为治疗性克隆核供体细胞的选择提供依据。方法采用PCR-ELISA法检测不同年龄SD大鼠皮肤、肌肉、骨髓、脑和睾丸组织的端粒酶活性。结果(1)随着年龄的增长,各组织端粒酶活性均呈下降趋势;(2)新生皮肤、肌肉和脑组织表达端粒酶活性,一月后则不再表达端粒酶活性;(3)一月至二年骨髓和睾丸组织均保持较高端粒酶活性。结论端粒酶活性表达程度与不同组织有关,骨髓和睾丸组织能维持较高端粒酶活性;骨髓组织中持续表达端粒酶活性的细胞可能是一种较好的核供体细胞。
- 滕晓华徐如祥黄涛陈镇洲姜晓丹邹雨汐蔡颖谦杜谋选
- 关键词：不同年龄活性变化组织端粒酶活性鼠组织治疗性克隆再表达
