广西壮族自治区自然科学基金(0832140)
- 作品数：13 被引量：31H指数：4
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- 不同浓度GDNF诱导神经干细胞向多巴胺能神经元分化研究被引量：7
- 2011年
- 目的观察不同浓度胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)对神经干细胞(NSCs)向多巴胺(DA)能神经元分化的影响。方法取新生鼠脑组织体外分离培养NSCs,第2代NSCs诱导培养基中分别加入0、5、10、20 ng/mL GDNF进行诱导。用逆转录-聚合酶链反应检测诱导后细胞酪氨酸羟化酶(TH)mRNA的表达,免疫细胞化学染色鉴定NSCs,检测NSCs向DA能神经元分化率。结果各诱导组均表达TH mRNA。神经球具有自我更新和表达巢蛋白的能力,诱导分化后的细胞能表达神经元、星形胶质细胞及少突胶质细胞特异性抗原。与空白对照组比较,GDNF诱导组TH阳性细胞率均明显升高(P<0.05);且10、20ng/mL GDNF诱导组升高幅度明显高于5 ng/mL GDNF诱导组(P<0.05),10、20 ng/mL GDNF诱导组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论从新生鼠脑组织分离出NSCs。不同浓度的GDNF均能促进NSCs向DA能神经元分化,GDNF浓度从10ng/mL提高到20 ng/mL时TH阳性细胞率无明显变化。
- 陈梅玲沈岳飞李清华刘开祥曾爱源林小慧
- 关键词：细胞分化胶质细胞源性神经营养因子神经干细胞多巴胺能神经元
- 抗坏血酸联合胶质细胞源性神经营养因子诱导神经干细胞向多巴胺能神经元分化的研究被引量：5
- 2009年
- 目的研究抗坏血酸(AA)和胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)对神经干细胞向多巴胺能神经元分化的影响。方法从新生24h内的SD大鼠脑组织分离和培养神经干细胞,进行神经干细胞鉴定。第二代神经干细胞诱导培养基中分别给予AA或(和)GDNF,10d后终止诱导,进行DA能神经元特异性标记物酪氨酸羟化酶(TH)和多巴胺转运蛋白的免疫细胞化学检测和TH基因的RT-PCR检测。结果各诱导组均检测到THmRNA的表达;与对照组比较,AA及GDNF均能增加NSC向TH阳性细胞分化的比率(P<0.05);与单独运用100μmol/LAA或10ng/mlGDNF组比较,联合诱导组可明显提高NSCs向TH阳性细胞分化的比率(P<0.05)。结论AA和GDNF均能促进NSCs向DA能神经元分化,两者联合诱导后分化作用得到进一步加强。
- 陈梅玲沈岳飞罗彦妮范瑞芳莫雪安
- 关键词：神经干细胞多巴胺能神经元抗坏血酸胶质细胞源性神经营养因子
- AngⅡ诱导神经干细胞向多巴胺能神经元分化的时间效应被引量：2
- 2010年
- 目的:体外分离培养神经干细胞(NSCs),探讨血管紧张素II(AngII)诱导NSCs向多巴胺(DA)能神经元分化的时间效应。方法:取第二代NSCs在含有AngII的诱导分化液中培养,根据诱导持续时间不同,分为A(10d),B(14d),C(17d)和D(21d)四组。终止诱导后,用免疫学法检测分化细胞中DA能神经元标志物酪氨酸羟化酶(TH)的表达,半定量-PCR测定THmRNA的相对表达量。结果:在AngII作用下,B,C组分化细胞数量均比A组增多,细胞胞体饱满,突起粗长,而D组细胞部分开始老化、脱壁悬浮。其中,C组TH阳性细胞率最高(15.64%),且THmRNA相对表达量(0.5047±0.0212)明显高于其他三组(P<0.05)。结论:AngII诱导NSCs分化成DA能神经元存在分化的时间效应,诱导持续达17d时分化细胞中DA能神经元的比例最高。
- 沈岳飞罗彦妮范瑞芳罗小丹张维雄陈梅玲
- 关键词：神经干细胞分化多巴胺能神经元
- 血管紧张素II体外诱导神经干细胞分化为多巴胺能神经元的机制研究被引量：3
- 2010年
- 目的探讨血管紧张素II(AngiotensinII,AII)诱导神经干细胞(Neural stem cells,NSCs)定向分化为多巴胺(Dopamine,DA)能神经元的过程中血管紧张素1型(AT1)受体和血管紧张素2型(AT2)受体所起的作用。方法在无血清培养基中分离培养NSCs,通过巢蛋白(nestin)免疫细胞化学对神经前体细胞进行鉴定;在此基础上,将第二代的NSCs在含10%胎牛血清的培养基中按照实验设计分为6组,分别是,A:对照组,B:AII组,C:AT1受体拮抗剂ZD7155组,D:AT1受体拮抗剂ZD7155+AII组,E:AT2受体拮抗剂PD123319组,F:AT2受体拮抗剂PD123319+AII组,观察NSCs向DA能神经元定向诱导分化情况。通过酪氨酸羟化酶(TH)免疫细胞化学进行DA能神经元鉴定,并观察各组DA能神经元突触的长度变化,通过实时荧光定量RT-PCR检测各实验组中TH基因表达水平。结果细胞团中可以看到nestin免疫阳性着色,实时荧光定量RT-PCR法检测B组、D组的TH基因表达水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),C、E、F组的TH基因表达水平与对照组比较无差异(P>0.05),各组DA能神经元的突触长度没有明显差别(P>0.05)。结论AII诱导产生DA能神经元的作用是由AT2受体介导,激活AT1、AT2受体均不能诱导DA能神经元突触延长或抑制突触延长。
- 沈岳飞罗小丹张维雄罗彦妮范瑞芳陈梅玲
- 关键词：神经干细胞分化多巴胺能神经元血管紧张素II
- 大鼠神经干细胞体外培养的研究被引量：7
- 2011年
- 目的比较两种不同的分离培养方法对大鼠神经干细胞(NSCs)增殖的影响。方法分离新生24h内的SD大鼠脑组织细胞,采用无血清培养技术进行体外扩增培养,分别以机械吹打法和胰酶消化法两种方法进行扩增培养、传代。免疫细胞化学法对NSCs及其分化后的细胞进行Nestin、NSE、GFAP、CNP的鉴定。结果分离培养的细胞具有自我更新和增殖能力及Nestin表达阳性,诱导后可分化为神经元、星形胶质细胞及少突胶质细胞。无论第1代或第2代比较,胰酶消化组NSCs的增殖明显高于机械吹打组。结论实验中分离培养的细胞为具有自我更新和增殖能力的NSCs,可诱导分化为终末神经细胞。在两种分离培养方法中,以胰酶消化法培养可获得更多的NSCs。
- 陈梅玲沈岳刘开祥李清华曾爱源廖小明
- 关键词：神经干细胞
- 体外神经干细胞培养特性观察
- 2011年
- 目的探讨神经干细胞（NSCs）体外分离培养和增殖的特性。方法从新生24h内的SD大鼠脑组织分离NSCs，采用无血清悬浮培养法进行NSCs体外扩增培养。倒置相差显微镜观察细胞形态，通过绘制细胞生长曲线观察NSCs的自我更新和增殖能力，采用免疫细胞化学法检测NSCs标志物神经上皮干细胞蛋白（Nestin）的表达及分化后细胞神经元特异性烯醇化酶（NSE）、胶质纤维酸性蛋白（GFAP）和2，3-环核甘酸磷酸二脂酶（CNP）的表达。结果从新生SD大鼠脑组织分离的细胞在无血清的培养基中形成悬浮的神经球。神经球具有自我更新和表达Nestin的能力，分化后的细胞能表达神经元、星型胶质细胞及少突胶质细胞的特异性抗原。结论从新生大鼠的脑组织中成功分离出NSCs，其具有在体外自我更新和增殖、多向分化潜能及表达Nestin的能力。
- 陈梅玲沈岳飞刘开祥李清华林小慧
- 关键词：细胞培养技术细胞分化神经干细胞
- 应用斜面汉密顿微量注射器针头脑内注射6-羟基多巴胺制作大鼠帕金森病模型
- 2010年
- 目的:探讨应用斜面汉密顿微量注射器针头代替平面汉密顿微量注射器针头,6-羟基多巴胺(6-hydroxydopamine,6-OHDA)中脑黑质单侧单点立体定向注射法制作单侧帕金森病(Parkinson's disease,PD)模型的可行性。方法:采用雌性SD大鼠,在脑立体定位技术下,应用斜面汉密顿微量注射器针头将6-OHDA注入大鼠右侧的中脑黑质部位,用动物旋转行为监测仪记录阿扑吗啡(Apomorphine,Apo)诱发的大鼠异常旋转行为,并测定脑组织液生化改变,并与平面汉密顿微量注射器针头注射组相比较。结果:实验组和对照组的PD动物模型成功率分别为73.33%(11/15)和80.00%(12/15),两者比较差异无统计学意义(P>0.05)。两种针头制作的PD鼠损毁侧脑组织液中多巴胺(Dopamine,DA)代谢产物3,4-二羟基乙酸(dihydroxyphenylacetic acid,DOPAC)和高香草酸(homovanillic acid,HVA)明显低于未损毁侧(P<0.05)。而空白对照组的旋转行为、两侧脑组织液中多巴胺代谢产物均没有明显改变。结论:应用斜面汉密顿微量注射器针头代替平面汉密顿微量注射器针头可以制作可靠而稳定的PD大鼠模型。
- 沈岳飞
- 关键词：帕金森病6-羟基多巴胺动物模型
- 神经干细胞定向诱导分化为多巴胺能神经元的研究进展被引量：3
- 2009年
- 罗小丹沈岳飞
- 关键词：多巴胺能神经元定向诱导分化神经干细胞氧化应激JAMES铁代谢
- 帕金森病相关基因模型的研究进展
- 2009年
- 帕金森病(PD)是一种遗传和环境因素共同作用的神经退行性疾病.针对这2大因素,有各种各样的动物模型.转基因动物模型足采用显微注射、电子穿孔、微粒子轰击、病毒载体转染等方法使外源目的 基因在其体内表达的一种动物,利用这种动物建立的模型可以模拟致病基因诱发疾病的过程,在研究疾病的发病机理、基因治疗及药物干预方面有积极作用.主要论述基因工程PD模型的研究进展及其对PD研究的贡献.
- 张维雄沈岳飞
- 关键词：帕金森病基因
- 多巴胺能神经元保护的研究进展被引量：1
- 2009年
- 一提到多巴胺（dopamine，DA）能神经元，我们就会想到帕金森病（Parkinson’SDisease，PD）。人们最初是先认识了PD，而后在对其发病机制的不断探索中，才开始慢慢解开DA能神经元的神秘面纱，并确立了DA能神经元在PD发病机制的中心地位。近年来，人们对PD的治疗逐渐倾向于神经保护治疗，除了保护DA受体、抑制DA降解及干细胞替代治疗等，保护DA能神经元是关键措施。本文先简单介绍DA能神经元的解剖生理基础，并就目前DA能神经元保护的热点研究做一综述。
- 罗彦妮沈岳飞
- 关键词：多巴胺多巴胺能神经元神经保护帕金森病
