国家教育部博士点基金(200804861045)
- 作品数：8 被引量：20H指数：3
- 相关作者：赵月强牛萍黄星原朱占永李爱林更多>>
- 相关机构：武汉大学中国医科大学附属第一医院中国医科大学更多>>
- 发文基金：国家教育部博士点基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 体外培养成人脂肪干细胞的老化机制被引量：1
- 2016年
- 目的探讨体外培养成人脂肪干细胞的相关老化机制。方法成人脂肪干细胞来源于临床脂肪抽吸者，在干细胞培养液和恒温恒湿培养箱中连续传代培养建立老化模型。定期观察细胞形态变化，并分别进行细胞衰老相关的伊半乳糖苷酶染色、γH2AX染色和实时定量聚合酶链式反应（PCR）检测。结果脂肪干细胞体外连续培养数目倍增（PD）大于35时细胞周期停滞，进入老化期。细胞衰老相关的β-半乳糖苷酶染色和γH2AX染色呈阳性；实时定量PCR结果显示，Nanog基因和Oct4基因的表达在自我更新干细胞（PD〈20）和老化脂肪干细胞（PD〉35）差异有统计学意义（P〈0．05）。结论成人脂肪干细胞体外传代培养，可产生类似其在体内的老化过程，建立脂肪干细胞的老化模型，为抗衰老药物提供新的模型，为抗衰老治疗提供新的靶点，对组织工程及再生医学研究有着重要意义。
- 赵月强牛萍朱占永余墨声李爱林
- 关键词：脂肪干细胞衰老细胞培养
- 成人脂肪干细胞老化模型的建立及其老化机制研究被引量：3
- 2016年
- 目的探讨成人脂肪干细胞体外培养老化模型的建立及相关机制。方法成人脂肪干细胞来源于临床脂肪抽吸的患者，采用低速离心、Ⅱ型胶原酶消化、滤网过滤等方法分离出干细胞，在干细胞培养液和恒温恒湿培养箱中连续传代培养。定期观察细胞形态变化，并分别进行细胞衰老相关的β-半乳糖苷酶染色。结果脂肪干细胞数目累积倍增值（PD）〉35时细胞周期停滞，进入老化期。老化脂肪干细胞出现细胞体积膨大、核增大扁平、胞质内容物增多等现象；衰老相关的β-半乳糖苷酶染色显示表达在自我更新和老化脂肪干细胞之间差异有统计学意义（P〈0．01）。实时定量聚合酶链反应结果显示基因Nanog和基因Oct4的表达在自我更新和老化脂肪干细胞之间有显著差异。结论从多层次，多水平证实了成人脂肪干细胞体外传代培养，可复制其在体内的自然老化过程，建立脂肪干细胞的老化模型，为抗衰老药物提供新的模型。
- 赵月强牛萍朱占永李爱林余墨声
- 关键词：脂肪干细胞衰老体外培养
- 起搏基因体外调控骨髓间充质干细胞分化为类起搏细胞的研究
- 2010年
- 目的本研究旨在通过体外构建起搏基因质粒pIRES2-EGFP-HCN2,电穿孔转染骨髓间充质干细胞,检测其在体外的表达情况。方法对含mHCN2 cDNA的PTR载体进行转化和扩增,将所得mHCN2基因定向克隆到含有增强型绿色荧光蛋白的真核表达载体pIRES2-EGFP中,进行双酶切来鉴定克隆的正确性。将重组质粒及空白质粒用电穿孔法转染骨髓间充质干细胞,并在体外与心肌细胞共培养,观察搏动频率变化及mHCN2的表达,并检测其电生理和组织学特征。结果构建了重组质粒pIRES2-EGFP-HCN2。荧光显微镜下可见转染后的骨髓间充质干细胞呈绿色荧光,细胞中mHCN2的阳性表达率为98.2%。免疫荧光显示转染起搏基因的骨髓间充质干细胞mHCN2的表达,而对照组无表达。实验组共培养的心肌细胞搏动频率较对照组干细胞共培养的明显增快(140±11次/分VS 100±13次/分,P<0.05),动作电位显示实验组最大舒张期电位值小于对照组(-62±2mv VS-71±2mv,P>0.05)。免疫荧光显示干细胞与心肌细胞间形成间隙连接。结论成功构建了重组质粒pIRES2-EGFP-HCN2,转染后的骨髓间充质干细胞可在体外成功表达功能性mH-CN2通道,提供起搏电流,具有类起搏细胞的功能,为进一步构建生物起搏器提供依据。
- 牛萍张端莲赵月强黄星原
- 关键词：起搏基因转染间充质干细胞
- 痰液肺癌细胞Ras基因和P63基因的表达与分子生物学意义被引量：3
- 2011年
- 目的研究骨髓间充质干细胞分化为心肌细胞过程中Notch表达的研究。方法别用免疫细胞化学方法和Western-blot方法检测167例患者痰液中Ras基因和P63基因的表达情况,分析其对早期肺癌诊断的意义。结果肺癌患者痰液中的Ras基因在痰脱落细胞中有明显高表达,阳性率为75%。P63基因在肺癌痰细胞中阳性表达率为34.78%。结论利用Ras基因标记物可以标记出痰液中的肺非典型增生细胞和肺癌细胞,有利于肺癌的早期发现和诊断,并且可以作为肺癌的普查指标或手段。
- 许立莉李淼杜明伟陈江帆李建华
- 关键词：肺癌RAS基因P63基因
- 骨髓间充质干细胞分化为心肌细胞过程中Notch表达的研究被引量：1
- 2011年
- 目的研究骨髓间充质干细胞分化为心肌细胞过程中Notch表达的研究。方法用密度梯度离心法分离培养犬骨髓间充质干细胞,按照酶法及差速贴壁法分离培养心肌细胞。观察干细胞增殖及传代情况。单独培养的干细胞为对照组,实验组将骨髓间充质干细胞与心肌细胞共培养,用RT-PCR、免疫细胞化学、MTT等方法检测干细胞分化为心肌细胞的情况,及干细胞在增殖与分化为心肌细胞过程中Notch信号系统的表达情况。结果骨髓间充质干细胞呈梭形、旋涡样生长,增殖及传代能力强,并可诱导分化为心肌样细胞,免疫荧光示心肌细胞标志物的表达。RT-PCR及免疫细胞化学显示实验组有Notch信号通路受体及配体的表达,而对照组表达微弱。结论骨髓间充质干细胞在增殖及分化过程中存在Notch信号通路,在干细胞分化为心肌细胞过程中Notch信号系统的表达上调。
- 牛萍赵月强张端莲
- 关键词：干细胞分化心肌细胞
- 起搏基因质粒的构建及体外转染心肌细胞的研究
- 2011年
- 目的:构建重组起搏基因质粒pIRES2-EGFP-HCN2,并检测其在体外心房肌细胞中的表达,探讨其构建生物起搏器的可行性。方法:对含mHCN2 cDNA的PTR载体进行转化和扩增,将所得mHCN2基因定向克隆到真核表达载体pIRES2-EGFP中,进行双酶切来鉴定克隆的正确性。将重组质粒用电穿孔法转染心房肌细胞,通过免疫荧光及RT-PCR检测重组质粒pIRES2-EGFP-HCN2在体外心房肌细胞中的表达情况。而对照组仅转染pIRES2-EGFP。结果:构建了重组质粒pIRES2-EGFP-HCN2。荧光显微镜下可见转染起搏基因后的心房肌细胞呈绿色荧光,其搏动频率较未转染的细胞及对照组明显增快(180±11次/分vs140±14次/分vs143±12次/分,P<0.05)。实验组RT-PCR及免疫荧光显示了mHCN2 mRNA基因及蛋白的表达,而对照组未见到该基因片段及其荧光表达。结论:成功地构建了重组质粒pIRES2-EGFP-HCN2,并在体外心房肌细胞中成功表达,为生物起搏的研究奠定基础。
- 牛萍赵月强黄星原
- 关键词：起搏增强型绿色荧光蛋白心肌细胞转染
- 骨髓间充质干细胞体外增殖及分化过程中Notch信号的表达变化被引量：9
- 2011年
- 目的研究Notch信号系统对骨髓间充质干细胞的增殖与分化的调控作用。方法用密度梯度离心法分离培养犬骨髓间充质干细胞,观察其增殖及传代情况,并进行成骨、成软骨及成心肌细胞诱导,Western blot检测细胞增殖及分化过程中Notch信号蛋白的表达。结果骨髓间充质干细胞呈梭形、旋涡样生长,增殖及传代能力强,可在体外形成钙结节,分化为软骨细胞,免疫组化示心肌细胞标志物的表达。Western blot显示在增殖过程中可见Notch信号蛋白的表达,为1.00±0.13,当分化为骨细胞及心肌细胞时,其表达上调,分别为1.20±0.14及1.70±0.17,与增殖的干细胞相比有明显差异(P<0.05)。结论 Notch信号系统对骨髓间充质干细胞的增殖及分化起重要的调控作用。
- 牛萍赵月强黄星原
- 关键词：信号系统干细胞增殖分化
- Notch信号系统调控骨髓间充质干细胞向心肌样细胞的分化被引量：3
- 2011年
- 背景:Notch信号系统在调控骨髓间充质干细胞的定向分化中起关键作用,但尚无涉及干细胞分化为心肌细胞及其分化机制的报道。目的:分析Notch信号系统在骨髓间充质干细胞分化为心肌细胞过程中的调控作用。方法:将分离培养的骨髓间充质干细胞与心肌细胞共培养,Jagged1组加入Notch激活剂Jagged1,DAPT组加入Notch激活剂Jagged1和抑制剂DAPT,对照组加入PBS缓冲液。用反转录-聚合酶链反应、免疫组化等方法检测干细胞分化为心肌细胞的情况及Notch信号系统的表达。结果与结论:骨髓间充质干细胞在体外可分化为心肌细胞,与DAPT组及对照组相比,Jagged1组的干细胞分化为心肌细胞的比率提高,心肌标志物表达增多,并且Notch1和Jagged1表达增强。证实Notch信号系统对骨髓间充质干细胞分化为心肌细胞起正向调控作用。
- 牛萍赵月强黄星原
- 关键词：心肌细胞骨髓间充质干细胞分化
