国家自然科学基金(39970668)
- 作品数：9 被引量：42H指数：5
- 相关作者：陈观今郑焕钦郭虹陈海峰王又红更多>>
- 相关机构：中山大学中山医科大学广东省计划生育科学技术研究所更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- 弓形虫膜抗原SAG3基因打靶载体的构建及筛选被引量：6
- 2004年
- 目的 构建弓形虫膜抗原SAG3基因打靶载体 ,建立基因敲除突变株 ,为进一步探讨SAG3功能和弓形虫侵入宿主细胞机制提供可行的研究方法。方法 用基因克隆方法将SAG31.5 3kb和 2 .81kb两个同源序列分别插入TUB5 /CAT质粒中 ,构建置换型打靶载体 ,氯霉素乙酰转移酶 (CAT)抗性基因作为筛选标记 ,采用电转移转染细胞方法进行基因打靶 ,建立突变型的弓形虫株 ,采用PCR、酶切分析和SouthernBlot杂交方法筛选鉴定。结果 构建了弓形虫RH株 5’SAG3 TUB5 /CAT 3’SAG3置换型载体 ,获得了敲除SAG3基因的弓形虫突变株 ,建立基因敲除突变株 ,获得了阳性的筛选克隆 ,经鉴定证明基因打靶结果准确。结论 通过构建基因打靶载体 ,可有目的地敲除弓形虫膜抗原基因 ,为进一步研究弓形虫侵入机制 ,探讨弓形虫病防治提供可行的方法。
- 韦相才钟兴明郑焕钦陈观今王景圆
- 关键词：弓形虫膜抗原基因打靶
- SAG1和IL-2基因佐剂混合免疫诱导鼠抗弓形虫感染的研究被引量：14
- 2002年
- 目的 了解编码SAG1的重组质粒和IL 2基因佐剂在小鼠体内的免疫反应 ,评价该疫苗对弓形虫的保护作用。方法 编码SAG1的质粒和鼠源性IL 2表达载体以 10 0 μg的剂量免疫小鼠 ,3w后两次以相同的剂量加强免疫 ,分别以PBS和空质粒 pcDNA3 感染。采用ELISA法测定抗体水平、亚型、IFN γ和IL 4的含量 ,PCR及原位杂交检测感染鼠中DNA的整合及降解。所有鼠均由强毒力RH株弓形虫感染。结果 SAG1表达质粒 3次免疫后鼠体内特异IgG水平明显增高 ,IL 2表达质粒的联合使用导致IgG2a水平升高和IFN γ的产生。混合质粒注射的小鼠抗弓形虫感染的存活时间延长。结论 由SAG1DNA诱导的免疫应答因IL - 2表达质粒的共同注射而增强 。
- 陈观今陈海峰郭虹郑焕钦汪琦
- 关键词：DNA免疫弓形虫基因佐剂
- 弓形虫表面抗原蛋白基因SAG1在骨骼肌中的表达被引量：6
- 2001年
- 构建弓形虫速殖子表面抗原蛋白SAG1的真核表达载体 ,直接注入小鼠骨骼肌 ,观察该基因的表达程度和表达定位 ,研究利用骨骼肌异源表达SAG1,探讨发展一种简易、有效和安全的基因免疫途径的可能性。免疫组化结果显示 ,直接肌肉注射重组真核表达载体pcDAN3-SAG1可使SAG1在免疫小鼠骨骼肌中表达 。
- 陈海峰陈观今王又红郑焕钦郭虹
- 关键词：弓形虫免疫组织化学SAG1骨骼肌
- 弓形虫核酸(DNA)免疫系列研究被引量：2
- 2006年
- 本系列研究筛选了弓形虫(Toxoplasma)速殖子表膜主要抗原(SAG1或P30)及分泌排泄抗原棒状体蛋白基因(ROP1),并将二者拼接构建复合基因(SAG1/ROP1),对其进行扩增、克隆、表达,制备真核表达质粒,接种小鼠,研究其免疫保护效应,为弓形虫核酸疫苗的研制提供有积极意义的科学根据。
- 陈观今郑焕钦周永安郭虹陈海峰
- 关键词：疫苗
- 应用核酸原位分子杂交法检测弓形虫SAG1抗原基因在免疫小鼠体内的表达被引量：6
- 2001年
- PCR扩增RH株弓形虫抗原基因SAG1编码序列 ,构建pcDNA3 -SAG1重组表达质粒。DNA免疫接种小鼠 ,3周后处死动物 ,取注射部位肌肉作冰冻切片 ,用原位分子杂交方法检测弓形虫 pcDNA3 -SAG1重组质粒在免疫小鼠肌肉内的表达。结果PCR扩增出SAG1编码区目的基因 ,片段大小为 10 2 0bp。测序、酶切分析表明构建的 pcDNA3 -SAG1重组表达质粒含有扩增的基因。利用原位分子杂交在免疫接种 pcDNA3-SAG1的小鼠骨骼肌中检测到紫蓝色的阳性杂交信号 ,提示局部肌肉有目的基因mRNA转录的发生。
- 陈海峰陈观今王又红郑焕钦郭虹
- 关键词：弓形虫基因免疫原位分子杂交DNA免疫
- 弓形虫侵入相关分子ROP1在HepG-2细胞中的表达被引量：3
- 2000年
- 弓形虫棒状体蛋白 1(ROP1)是与虫体侵入相关的重要分子。将含编码 ROP1蛋白基因的真核表达重组质粒 pc DNA3转染 Hep G- 2细胞 ,为进一步研究做准备。用脂质体介导的真核细胞转染法 ,G418筛选阳性克隆 ,SDS-PAGE及 Western- blot分析鉴定表达产物。结果显示 ,在所筛选的克隆化生长的细胞裂解液样品电泳图谱中 ,有一大小约 35～ 40 k Da的特异电泳条带 ,该条带可被弓形虫免疫兔血清识别。本研究建立了体外稳定表达 ROP1的细胞系 。
- 郭虹陈观今吕芳丽郑焕钦
- 关键词：弓形体HEPG-2细胞
- 弓形虫SAG1 ROP1基因及其复合抗原基因的核酸免疫研究被引量：2
- 2002年
- 陈观今郑焕钦周永安郭虹陈海峰
- 关键词：弓形虫SAG1核酸免疫
- 弓形虫膜抗原SAG3基因打靶载体构建方法探讨被引量：2
- 2004年
- 目的探讨构建弓形虫膜抗原SAG3基因打靶载体的方法,为建立基因敲除弓形虫基因突变株打下基础。方法用PCR方法扩增弓形虫SAG3基因同源序列,将所获得的1.53kb和2.81kb序列连接克隆插入TUB5/CAT质粒中,构建置换型打靶载体,采用PCR扩增、酶切分析鉴定。结果将SAG3基因中1.53kb和2.81kb两个同源序列分别插入TUB5/CAT质粒中,构建了弓形虫RH株5'SAG3-TUB5/CAT-3'SAG3置换型载体,经鉴定所获得的打靶载体结构准确。结论建立了弓形虫膜抗原SAG3基因打靶载体,并获得了弓形虫RH株SAG3基因置换型打靶载体,为分析弓形虫基因功能提供了可行的方法。
- 韦相才钟兴明郑焕钦陈观今
- 关键词：弓形虫膜抗原基因打靶
- 弓形虫复合抗原基因SAG1/ROP1在大肠杆菌中表达的初步研究被引量：13
- 2001年
- 目的 构建含弓形虫主要表面抗原基因SAG1和棒状体蛋白ROP1复合基因重组质粒 ,并在大肠杆菌中表达 ,检测复合基因表达产物的免疫活性。方法 用亚克隆技术分别把SAG1与ROP1基因克隆至 pET2 8aRT7启动子下游 ,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞 ,经IPTG诱导表达 ,SDS -PAGE及Western -Blot分析。结果 获得pET2 8-SAG1/ROP1重组表达载体 ;SDS -PAGE及Western -Blot印迹显示SAG1/ROP1复合基因表达蛋白产物分子量约为 6 6kD ,具有一定的免疫活性。结论 弓形虫复合抗原基因SAG1/ROP1可在大肠杆菌中表达 ,表达产物具有免疫活性。
- 陈海峰陈观今郭虹郑焕钦王又红
- 关键词：弓形虫SAG1基因表达抗原基因大肠杆菌
