山东省优秀中青年科学家科研奖励基金(02BS088)
- 作品数：1 被引量：1H指数：1
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- 用噬菌体表面显示肽库技术筛选乙酰胆碱酯酶有效抗原表位的研究被引量：1
- 2006年
- 目的:筛选和鉴定乙酰胆碱酯酶的有效抗原表位。方法:收集乙酰胆碱受体抗体阴性而乙酰胆碱酯酶抗体阳性的重症肌无力病人血清,采用溴化氰活化的琼脂糖柱(CNBractivedsepharoseTM4B)纯化抗乙酰胆碱酯酶的多克隆抗体并定量;用纯化的抗乙酰胆碱酯酶的抗体对随机的12肽噬菌体表面显示肽库进行5轮免疫学筛选,随机挑取克隆;采用Westernblot免疫识别,识别为阳性的克隆进行核苷酸序列的测定,并与乙酰胆碱酯酶的氨基酸序列进行同源性比较。将获得的不同表位的阳性克隆分别免疫小鼠,采用Westernblot筛选能刺激小鼠产生抗乙酰胆碱酯酶抗体的阳性克隆,进行生物学活性的鉴定。结果:经5轮免疫学筛选后挑取的49个克隆中,经Westernblot识别15个克隆能被抗乙酰胆碱酯酶抗体识别。核苷酸序列分析发现共有7种不同的表位,其中1种表位与乙酰胆碱酯酶有较高的同源性,其余6种表位与其无一级结构的同源性。经动物免疫初步实验筛选,共有5个免疫原性较强的阳性克隆,其免疫的鼠血清均可识别人乙酰胆碱酯酶。结论:获得了5种乙酰胆碱酯酶的有效抗原表位,1种可能为结构表位,4种为模拟表位。
- 张群胡雪梅赵明东高美华傅凤华苏长海孙殿敬
- 关键词：乙酰胆碱酯酶噬菌体肽库表位
