贵州省科学技术基金(J[2009]2188)
- 作品数：6 被引量：26H指数：4
- 相关作者：张爱华潘雪莉黄晓欣张博更多>>
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- 亚砷酸钠对HaCaT细胞MGMT基因启动子区甲基化CpG结合蛋白-2、DNA甲基转移酶1、组蛋白去乙酰化酶-1结合的影响被引量：1
- 2013年
- 目的观察亚砷酸钠（NaAsO：）对人肤角质形成细胞株（HaCaT细胞）MGMT基因启动子区甲基化CpG结合蛋白-2（MeCP2）、DNA甲基转移酶1（DNMTl）及组蛋白去乙酰化酶1（HDACl）结合情况的影响，为深化阐释砷毒作用机制提供依据。方法分别以0．00（空白对照）、3．13、6，25、12．50、25．00μmol／LNaAs02重复间隔处理HaCaT细胞72h（NaAs02处理24h，隔天再次相同处理，重复3次），以人表皮鳞癌细胞株（A431）作为阳性对照。定量染色质免疫共沉淀技术（Q—CHIP）检测MGMT基因转录调控区CHIPl、CHIP2区域及MGMT基因编码区ChIP3区域MeCP2、DNMTl、HDACl结合情况。结果各组HaCaT细胞MGMT基因转录调控区CHIPl、CHIP2区域MeCP2、DNMTl、HDACl蛋白结合水平比较，差异有统计学意义（F值分别为7．387、84．634、78．442和19．263、69．649、26．546，P均〈0．05）；其中各N以s02处理组CHIPl、CHIP2区域MeCI〉2、DNMTl、HDACl蛋白结合水平[3．13μmol／LNaAs02处理组：（136．00±16．97）％、（145．00±2．83）％、（88．50±19．09）％和（106．50±37．48）％、（112．34±8．73）％、（59．71±8．49）％；6．25μmol／LNaAs02处理组：（130．00±42．43）％、（154．50士4．95）％、（101．00±1．27）％和（88．50±3．54）％、（134．32±2．82）％、（102．75±19．91）％；12．50~mol／LNaAs02处理组：（141．50±23．33）％、（161．50±7．78）％、（125．00±U．31）％和（119．50±24．75）％、（171．59±3．54）％、（167．61±10．61）％；25，00μmol／LNaAs02处理组：（134．50±43．13）％、（472．50±50．20）％、（383．50±30．41）％和（180．09±12．73）％、（348．50±27．58）％、（158．45±12．02）％]均高于空白对照组[（51．50±9．19）％、（82．00±12．73）％、（25．03±2．91）％和（37．02±4．24）％、（91．56±26．16）％、（19．09±2．90）％，P均〈0．05]�
- 张博潘雪莉张爱华
- 关键词：基因组蛋白脱乙酰基酶类
- HDAC1在燃煤污染型砷中毒患者血液及皮肤组织中的转录及表达被引量：12
- 2010年
- [目的]了解组蛋白去乙酰化酶1（HDAC1）在燃煤污染型砷中毒患者血液及皮肤组织中的转录及表达，探讨其在砷中毒发生、发展乃至癌变中的作用。[方法]在贵州省燃煤污染型地方性砷中毒病区，选择68例地方性砷中毒（以下简称“砷中毒”）确诊患者（轻度24例、中度28例、重度16例）为研究对象，其中40例经过皮肤病理学诊断，分为一般病变组（20例）、癌前病变组（14例）及癌变组（6例）。在距病区约12km的非砷暴露村，选择23例居民作为对照组。在知情同意的原则下，采集上述被调查者的外周血，采用实时荧光定量PCR（FQ．PCR）检测血中HDAC1 mRNA的表达。另收集自愿接受手术治疗的61例砷中毒患者皮肤组织标本（一般病变34例、癌前病变21例，癌变6例）和15例正常皮肤组织标本，采用免疫组织化学（IHC）法检测砷中毒患者皮肤及对照皮肤组织中HDAC1蛋白的表达。[结果]HDAC1 mRNA在对照组及轻、中、重度砷中毒患者外周血中表达的平均值分别为0．44457（0．37093—0．63904）、0．49286（0．08018～1．12747）、0．45185（0．24413～0．87641）和0．56676（0．30678～0．84471），差异无统计学意义（χ^2=1．099，P〉0．05）；HDAC1 mRNA在一般病变组、癌前病变组和癌变组患者外周血中表达的平均值分别为0．32081（0．16723～0．83972）、0．50552（0．28280～1．43397）和0．80479（0．92123～1．89946），差异无统计学意义（，=1．982，P〉0．05）。HDAC1蛋白在一般病变组、癌前病变组以及癌变组阳性表达率分别为100％、100％和83．33％，与对照组（46．67％）比较表达增强（P〈0．01）。[结论]HDAC1参与了砷中毒的发生发展，其蛋白表达增强可能是砷中毒发生的早期事件。
- 潘雪莉张爱华黄晓欣
- 关键词：砷中毒组蛋白去乙酰化酶1
- 亚砷酸钠对人皮肤角质形成细胞MGMT基因组蛋白乙酰化及转录与表达的影响被引量：4
- 2011年
- [目的]了解不同剂量亚砷酸钠(NaAsO_2)对人皮肤角质形成细胞(HaCaT细胞)中O^6-甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶(MGMT)基因组蛋白乙酰化调控、mRNA转录及蛋白表达的影响。[方法]以25.00、12.50、6.25、3.13μmol/LNaAsO_2重复间隔处理HaCaT细胞72h(NaAsO_2处理24h,隔天再次用NaAsO_2进行相同的处理,重复处理3次)。定量染色质免疫沉淀技术(Q-ChIP)检测MGMT基因转录调控区(ChIP1、ChIP2区域)及MGMT基因编码区(ChIP3区域,对照区域)组蛋白乙酰化修饰水平;实时荧光定量PCR(Q-PCR)和免疫印迹分析分别检测MGMT基因的mRNA转录和蛋白表达。设不染毒的HaCaT细胞为空白对照(0.00μmol/L),人表皮鳞癌细胞株A431为阳性对照。[结果]0.00、3.13、6.25、12.50、25.00μmol/L NaAsO_2处理细胞中,MGMT基因转录调控区ChIP1区域的组蛋白H3K9乙酰化水平分别为176.68±8.50、175.71±18.14、161.26±16.28、146.23±24.00和82.64±33.87,差异有统计学意义(F=28.809,P<0.05);组蛋白H4乙酰化水平分别为183.59±11.98、180.84±24.10、166.52±5.48、156.87±10.64和103.42±7.04,差异有统计学意义(F=36.493,P<0.05)。ChIP2区域的组蛋白H3K9乙酰化水平分别为171.11±16.54、167.55±8.97、156.51±8.59、135.88±16.55和82.01±3.96,差异有统计学意义(F=49.626,P<0.05);组蛋白H4乙酰化水平分别为117.23±16.21、143.29±10.59、135.87±7.44、105.48±7.56和78.79±6.92,差异有统计学意义(F=25.438,P<0.05)。编码区ChIP3区域的组蛋白H3K9乙酰化水平分别为37.53±6.23、35.57±5.85、40.81±4.45、42.18±1.23和41.87±5.71,差异无统计学意义(F=2.341,P>0.05);组蛋白H4乙酰化水平分别为40.78±2.42、38.56±4.66、39.47±2.88、33.13±3.48和31.48±4.99,差异无统计学意义(F=3.027,P>0.05)。MGMT基因mRNA转录相对表达量分别为1.19829±0.15997、1.51831±0.18054、1.42522±0.18039、1.01454±0.09679和0.88772±0.02000,差异有统计学意义(F=37.359,P<0.05);MGMT蛋白相对表达量分别为1.066 19±0.06124、1.17447±0.
- 潘雪莉张爱华
- 关键词：MGMT基因组蛋白乙酰化MRNA转录HACAT细胞
- 亚砷酸钠对HaCaT细胞中DNMT1、HDAC1基因mRNA转录及蛋白表达的影响被引量：6
- 2011年
- 目的了解不同剂量的亚砷酸钠(NaAsO2)对人皮肤角质形成细胞(HaCaT细胞)中DNA甲基转移酶1(DNMT1)、组蛋白去乙酰化酶1(HDAC1)基因mRNA转录和蛋白表达的影响。方法分别以0、3.13、6.25、12.5和25μmol/L NaAsO2溶液重复间隔处理HaCaT细胞72 h(NaAsO2处理24 h,隔天再次进行相同处理,共处理3次),以实时荧光定量PCR(Q-PCR)技术检测DNMT1及HDAC1基因的mRNA转录,以免疫印迹分析(western blotting)检测DNMT1及HDAC1蛋白表达。以人表皮鳞癌细胞株A431作为阳性对照。结果细胞经0、3.13、6.25、12.5和25μmol/L NaAsO2溶液处理后,DNMT1 mRNA转录相对表达量分别为0.650 90±0.174 05,0.930 53±0.145 56,0.752 93±0.244 62,0.558 11±0.051 02和0.370 17±0.088 4,差异有统计学意义(F=6.539,P<0.05);HDAC1 mRNA转录相对表达量分别为2.021 80±0.179 57,1.496 98±0.107 55,1.303 24±0.152 08,1.037 75±0.204 88和0.816 74±0.153 12,差异有统计学意义(F=17.914,P<0.05)。DNMT1蛋白相对表达量分别为0.000 87±0.000 10,0.026 04±0.002 63,0.283 19±0.072 62,0.842 61±0.082 39和1.579 87±0.200 83,差异有统计学意义(F=27.799,P<0.05);HDAC1蛋白相对表达量分别为0.034 65±0.012 03,0.273 65±0.012 02,0.634 90±0.239 76,0.775 03±0.126 51和1.126 16±0.167 52,差异有统计学意义(F=9.820,P<0.05)。结论 DNMT1和HDAC1蛋白的高表达是砷致皮肤损害的重要分子事件,这为进一步应用其抑制剂探索砷中毒的防治提供了可能。
- 潘雪莉张爱华
- 关键词：DNA甲基转移酶1组蛋白去乙酰化酶1MRNA转录蛋白表达HACAT细胞
- 燃煤污染型砷中毒人群MGMT基因甲基化、转录及表达的研究被引量：11
- 2010年
- 目的了解O6-甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶基因(MGMT基因)启动子区甲基化、转录及表达以及DNA甲基转移酶1(DNMT1)的转录及表达与砷中毒的关系。方法采集68例燃煤污染型砷中毒(以下简称砷中毒)患者(轻度24例、中度28例、重度16例)及23例非病区居民外周血。用甲基化特异性PCR法(MSP)检测MGMT基因启动子区甲基化,实时荧光定量PCR(FQ-PCR)法检测MGMT及DNMT1 mRNA的水平。利用自愿手术治疗的砷中毒患者皮肤组织标本(61例,其中34例为一般病变,21例为癌前病变,6例为癌变)和对照皮肤组织标本(15例),以免疫组织化学(IHC)法检测砷中毒患者及对照皮肤组织中MGMT及DNMT1蛋白的表达。结果 MGMT基因启动子区甲基化阳性率与砷中毒程度有关(χ2=13.739,P<0.01)。砷中毒组MGMT mRNA表达水平与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05);MGMT基因启动子区甲基化患者和非甲基化患者之间MGMT mRNA和DNMT1 mRNA表达差异无统计学意义(P>0.05)。但轻、中度患者DNMT1 mRNA表达明显低于对照组(P<0.01);癌前病变组和癌变组皮肤组织中MGMT蛋白表达明显低于对照组(P<0.01),与皮肤损害程度有关(rs=-0.446,P<0.01);MGMT基因启动子区甲基化患者MGMT蛋白表达明显低于非甲基化组(P<0.05)。砷中毒组皮肤组织中DNMT1蛋白表达强于对照组(P<0.01),并与皮肤损害程度有关(rs=0.740,P<0.01);且MGMT基因启动子区甲基化患者组织中DNMT1蛋白表达明显高于非甲基化组(P<0.05)。结论 MGMT基因启动子区高甲基化抑制了燃煤污染型砷中毒患者皮肤组织中MGMT蛋白的表达,且DNMT1蛋白的高表达参与了此抑制过程。
- 潘雪莉张爱华黄晓欣
- 关键词：砷中毒基因DNA甲基转移酶1DNA甲基化
- 5-氮杂-2'-脱氧胞苷和曲古抑酶素A对亚砷酸钠处理细胞中DNMT1和HDAC1基因转录及表达的影响被引量：3
- 2012年
- 目的探讨5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-AZA-dC)和曲古抑酶素A(TSA)对亚砷酸钠(NaAsO2)处理的人皮肤角质形成细胞(HaCaT细胞)中DNA甲基转移酶1(DNMT1)、组蛋白去乙酰化酶1(HDAC1)基因mRNA转录和蛋白表达的影响。方法以25μmol/L NaAsO2重复间隔染毒HaCaT细胞72 h(25μmol/L NaAsO2处理24 h,隔天再次进行相同处理,共处理3次),再分别以1.5、3.0、6.0μmol/L 5-AZA-dC作用于NaAsO2处理细胞72 h,125、250、500 nmol/L TSA作用于NaAsO2处理细胞48 h,以实时荧光定量PCR(Q-PCR)技术检测DNMT1及HDAC1基因的mRNA转录,以免疫印迹分析(western blotting)检测DNMT1及HDAC1蛋白表达。设不进行任何处理的细胞为空白对照,仅染砷的细胞为阳性对照。结果 1.5、3.0、6.0μmol/L 5-AZA-dC作用于NaAsO2处理细胞后,DNMT1及HDAC1 mRNA转录相对表达量与仅染砷的阳性对照比较,差异无统计学意义;DNMT1蛋白相对表达量降低,与仅染砷的阳性对照比较,差异有统计学意义(P<0.05);HDAC1蛋白相对表达量与仅染砷的阳性对照比较,差异无统计学意义。125、250、500 nmol/L TSA作用于NaAsO2处理细胞后,DNMT1及HDAC1 mRNA转录相对表达量与仅染砷的阳性对照比较,差异无统计学意义;DNMT1及HDAC1蛋白相对表达量降低,与仅染砷的阳性对照比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 5-AZA-dC能抑制砷所致的DNMT1蛋白高表达,TSA能抑制砷所致的DNMT1及HDAC1蛋白高表达,这为进一步探索砷中毒的表观遗传学治疗提供了科学依据。
- 潘雪莉张爱华
- 关键词：HACAT细胞
