国家自然科学基金(30470070)
- 作品数：11 被引量：36H指数：3
- 相关作者：孟红李鹏岳盈盈李志会马瑜更多>>
- 相关机构：山东省医学科学院中国医学科学院北京协和医学院中国医科大学航空总医院更多>>
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- 人巨细胞病毒吸附、融合相关糖蛋白的研究进展被引量：1
- 2006年
- 人巨细胞病毒感染可导致孕妇、新生儿及免疫力低下人群严重疾病。其包膜糖蛋白在病毒感染过程中发挥着重要作用。病毒侵入细胞的过程是由几种糖蛋白协作完成的,其中gB能够与多种细胞表面受体结合,gH、gL和gO能够形成三聚体介导病毒穿入并融合细胞,gB、gH中的卷曲螺旋在病毒与细胞融合过程中发挥重要作用。本文就与吸附、融合相关的巨细胞病毒糖蛋白在结构功能方面的特点作简要综述。
- 薛开莲孟红
- 关键词：人巨细胞病毒糖蛋白
- Jn219抗轮状病毒的实验研究
- 2008年
- 目的探讨真菌提取物Jn219在体内、外抗轮状病毒的作用。方法利用含有Jn219的提取物，通过轮状病毒（RV）-MA104体外细胞感染模型，研究Jn219体外抗RV的作用；采用RV-乳鼠感染模型和疗效模型，以病理学、免疫组化技术探讨Jn219体内抑制病毒增殖、保护肠黏膜的作用。结果Jn219在体外表现抑制RV SA11在MA104细胞增殖的作用，其半数抑毒浓度为1：384．92，抑毒指数为76．92；Jn219在体内抑制了病毒的复制，缓解了RVSA11感染引起的乳鼠腹泻，降低了乳鼠病死率，减轻了RV感染引起的肠道病理性变化。结论Jn219在体外、体内均有抑制RV复制的作用。
- 高华英司书毅李妍李鹏孟红
- 关键词：轮状病毒动物实验
- 轮状病毒VP4蛋白酶切片段VP5*、VP8*在原核系统中的表达被引量：1
- 2008年
- 目的克隆表达轮状病毒结构蛋白VP4酶切片段VP5*、VP8*。方法以猴轮状病毒SA11株细胞培养物提取总RNA为模板,经RT-PCR方法获得VP5*、VP8*全长基因片段cDNA,将其重组于pET-30 a表达载体,转化大肠杆菌BL21(plyss),异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,表达产物做SDS-PAGE和Western-blotting检测,目的产物用镍柱纯化。结果①重组载体在IPTG诱导下,工程菌表达的两个目的蛋白主要以包涵体形式存在;②SDS-PAGE检测表达产物与目的蛋白大小一致,VP5*为60 kD,VP8*为28 kD,Western-blotting检测发现两目的蛋白所带标签可与抗体反应;③镍柱纯化获得RV SA11 VP5*、VP8*蛋白,纯度达90%。结论①构建表达载体pET-30a-VP5*、pET-30a-VP8*;②表达、纯化VP4蛋白的VP5*、VP8*片段。
- 金琳琳李鹏万言珍岳盈盈李志会孟红
- 关键词：RV原核表达
- 抗人巨细胞病毒药物作用机制研究策略被引量：1
- 2006年
- 人巨细胞病毒是宫内感染导致胎儿畸形、死胎的病原体,也是免疫缺陷患者感染致死及器官移植术失败的重要原因。目前治疗巨细胞病毒感染仍缺乏有效药物,虽已见从植物或微生物代谢产物中提取抗人巨细胞病毒药物的资料报道,但其抗病毒机制及其研究方法尚待完善。本文就抗人巨细胞病毒药物作用机制的研究策略作简略综述。
- 刘岚铮马瑜孟红
- 关键词：抗病毒药物人巨细胞病毒
- VP7、VP4与轮状病毒装配及分子流行病学被引量：18
- 2006年
- A组轮状病毒是全球婴幼儿腹泻的主要病原,其外壳蛋白VP7和VP4在病毒黏附、穿入细胞、血凝及诱导产生中和抗体中具有重要的作用,它们还分别决定血清型G型和P型,VP4又以基因序列不同而分型,称为P[]基因型,而且由其决定的分子病学流行特点不断发生变化。文中对A组轮状病毒VP7和VP4以上几方面的研究加以综述。
- 高华英孟红
- 关键词：轮状病毒流行病学VP7VP4
- 真菌提取物JN219抗人巨细胞病毒机制的初步研究被引量：2
- 2007年
- 目的探讨真菌提取物JN219的抗病毒机制。方法(1)样品对病毒入侵宿主细胞的抑制作用:将样品(JN219 50μg/ml、柱洗脱组分5 g/L)分别与人巨细胞病毒(HCMV半数组织感染量TCID50为105/ml)等容量混合,不同时间(混合后立刻、混合后37℃作用1 h)以不同稀释度、100μl/孔接种至多孔板人胚肺细胞(HEL)上;(2)样品对病毒复制的抑制作用:将HCMV(100个TCID50)100μl/孔接种于HEL上1 h后,加不同稀释度的样品;(3)灭活病毒对样品抗病毒作用的抑制作用:将紫外线灭活的HCMV与JN219、柱洗脱组分等容量混合,37℃作用1 h,加等容量HCMV(TCID50为105/ml)混合37℃作用1 h,以不同稀释度、100μl/孔接种于96孔板内的HEL上。以上各实验组同时设细胞对照组、病毒对照组、空白对照组、相应稀释度的样品对照组,37℃、5%CO2培养,每日观察细胞CPE,当病毒对照病变90%以上,终止培养,中性红染色,在540 nm读取吸光度A值,用Reed-Muench法计算细胞半数有效浓度(IC50)和病毒TCID50。通过比较组间差异,探讨在哪一复制周期样品对病毒产生抑制作用。结果(1)样品对病毒入侵宿主细胞的抑制作用:JN219、柱洗脱组分与HCMV等容量混合后立刻接种细胞,测得病毒TICD50为104.8/ml,与病毒对照组比较(TCID50为105/ml)差异无显著性;与病毒作用1 h后接种细胞,JN219、柱洗脱组分IC50分别为0.168μg/ml、0.185μg/ml,第一孔JN219 TCID50为101.6/ml,柱洗脱组分标本未测得病毒,可使HCMV得到抑制;(2)样品对病毒复制的抑制作用:先将病毒接种细胞1 h,然后加JN219、柱洗脱组分,IC50分别为3.29μg/ml、13.1 g/L,样品不能完全抑制人巨细胞病毒病变的发生;(3)灭活病毒对样品抗病毒作用的抑制作用:紫外线灭活的病毒与样品作用1 h,再加等容量病毒后接种细胞,样品JN219、柱洗脱组分与病毒混合物TCID50分别为103.5、103.75,样品抗病毒位点已被紫外线灭活病毒外膜蛋白占据,抗病毒效果降�
- 薛开莲司书毅李妍岳盈盈万言珍李鹏李志会马瑜孟红
- 真菌提取物JN219抗轮状病毒机制的研究
- 2009年
- 目的探讨真菌提取物JN219抑制轮状病毒(RV)入侵宿主细胞的机制。方法构建原核表达载体pET-30a-VP4,异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达并用His抗体镍柱亲和层析纯化病毒外壳蛋白VP4,利用体外竞争抑制RV-MA104细胞感染模型,观察与VP4共孵育后含JN219提取物抑制RV活性的变化。结果构建的pET-30a-VP4载体可表达VP4重组蛋白(约88 kD),镍柱纯化的VP4蛋白含量为0.75 mg/ml,与VP4作用后JN219提取物抗病毒指数由36.7降低为9.1,半数有效浓度由(0.163±0.02)mg/ml升为(0.702±0.13)mg/ml,半数中毒浓度由5.99 mg/ml升至6.38 mg/ml,P均<0.05。结论与病毒外壳蛋白VP4结合,进而阻断病毒穿入细胞可能是JN219抗RV的主要机制之一。
- 李鹏金琳琳李志会岳盈盈宋楠楠孟红
- 单纯疱疹病毒侵入相关糖蛋白的研究进展被引量：9
- 2006年
- 单纯疱疹病毒感染细胞的过程与多种包膜糖蛋白有关。HSV基因组能编码gB、gC、gD、gE、gG、gH等11种包膜糖蛋白。其中gB、gC、gD和gE等主要与病毒对细胞吸附/穿入有关;gH主要控制病毒出芽释放;gB、gC、gD和gH等主要与诱导细胞融合有关。gD除细胞毒作用(已知的HSV糖蛋白均可)外,还有很强的诱生中和抗体的作用。本文就与HSV侵入细胞有关的糖蛋白的特点和功能进行综述。
- 马瑜孟红
- 关键词：单纯疱疹病毒糖蛋白
- 真菌提取物JN219抗病毒谱的初步研究被引量：4
- 2007年
- 目的:探讨真菌提取物JN219的体外抗病毒谱。方法:采用体外细胞病变法,研究JN219对疱疹病毒科病毒(HCMV、HSV-1、HSV-2)、腺病毒科病毒(Ad3)、副粘病毒科病毒(RSV)、呼肠病毒科病毒(RVSA11)、正粘病毒科病毒(流感甲地方株、流感乙地方株)、小RNA病毒科病毒(COX B1-6)、弹状病毒科病毒(VSV)共15株病毒的抗病毒活性。将JN219与以上病毒作用1 h后接种于相应宿主细胞(同时设有病毒对照和细胞对照),当病毒对照病变达到90%以上时终止培养,宿主细胞用1%中性红染色,在450 nm处读取吸光度A值,计算细胞存活率、半数中毒浓度(TD50)、半数有效浓度(IC50)和抑毒指数(TI)。并根据TI判断JN219的抗病毒活性,确定其抗病毒谱。结果:JN219对HCMV、RV(SA11)、VSV有抑制作用,其IC50分别为1.42、0.96和1.22μg/ml,TI分别为35.26、52.30、40.82;对HSV-1、HSV-2、RSV、流感病毒甲、流感病毒乙有部分抑制作用;对COX B1-6、腺病毒(Ad3)无作用。结论:JN219抗病毒谱比较广泛。
- 薛开莲岳盈盈万言珍李鹏李志会马瑜孟红
- 关键词：真菌
- 轮状病毒外壳蛋白VP4在大肠埃希菌中的表达
- 2008年
- 目的克隆表达轮状病毒融合素蛋白VP4。方法以轮状病毒SA11株细胞培养物提取总RNA为模板,经RT-PCR获得VP4全长基因片段cDNA,将其重组于pET-30a(+)表达载体,转化大肠埃希菌BL21(plysS),异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,表达产物经SDS-PAGE和Western blot鉴定,并用镍柱纯化。结果重组载体所含目的基因片段的序列与文献公布序列相符,IPTG诱导表达的目的蛋白主要以包涵体形式存在;SDS-PAGE检测表达产物与目的蛋白大小一致,为88kD,Western blot检测发现目的蛋白所带组氨酸标签可与标签抗体反应;镍柱纯化获得RV SA11 VP4融合素蛋白,纯度达90%。结论构建了表达载体pET-30a(+)-VP4,经诱导表达、纯化,获得了RV融合素蛋白VP4。
- 金琳琳李鹏万言珍岳盈盈李志会孟红
- 关键词：VP4轮状病毒原核表达
