广东省自然科学基金(04003959)
- 作品数：6 被引量：6H指数：2
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- MHCⅡ类分子转录激活因子锤头状核酶的生物学活性被引量：1
- 2006年
- 目的探讨MHCⅡ类分子转录激活因子(CⅡTA)锤头状核酶抑制细胞表面MHCⅡ类分子的表达。方法设计并克隆针对CⅡTA第464位点的锤头状核酶(Rz464)及其相应的CⅡTA靶基因,分别插入pGEM-T载体,进行细胞外切割活性鉴定,进一步将Rz464亚克隆入真核表达载体pIRES2-EGFP(pIRES2-EGFP-Rz464,pRz464),并稳定转染Raji细胞株,流式细胞术检测经典的MHCⅡ(HLA-DR-、DP-、DQ)类抗原表达,RT-PCR分析CⅡTA mRNA水平。结果细胞外活性鉴定表明,Rz464具有明显的切割活性。细胞内切割实验显示:pRz464阳性Raji细胞表面HLA-DR、DP、DQ抗原表达分别降低了75.93%、64.14%、78.32%;同时CⅡTA的mRNA含量降低(P<0.05)。结论抗CⅡTA锤头状核酶Rz464可有效抑制MHCⅡ类抗原的表达。
- 郭荣蒋海玉张敏邹萍杜欣陆泽生林伟黄梓伦
- 关键词：核酶基因疗法
- 抗自身免疫的新途径-CⅡTA siRNA的体外筛选及活性
- 2008年
- 目的探讨主要组织相容性复合物Ⅱ类转录激活因子(CⅡTA)的siRNA对软骨细胞表面主要组织相容性复合物(MHC)Ⅱ类分子表达的抑制。方法设计并合成针对CⅡTA编码区第176、741及3061位点的siRNA(分别为siRNA1、siR-NA2、siRNA3)。通过纳米载体介导siRNA稳定转染原代软骨细胞,流式细胞术检测经典的MHC-Ⅱ(HLA-DR、-DP、-DQ)类抗原表达,RT-PCR检测CⅡTA及其调控的MHC-Ⅱ类分子的mRNA水平。结果在重组人干扰素(interferon,IFN)-γ诱导下,siRNA3阳性软骨细胞表面HLA-DR、-DP抗原表达分别降低了93.36%、94.16%,同时CⅡTA的mRNA含量明显减少。结论siRNA3抑制了CⅡTA的mRNA含量,并阻止其调控的MHC-Ⅱ类分子的表达。
- 郭荣何飞杜欣罗成伟陆泽生翁建宇吴穗晶林伟
- 关键词：小干扰RNA
- 间充质干细胞诱导小鼠CD8α^+ CD11b^+ jagged2^(high)调节性树突状细胞的方法被引量：3
- 2012年
- 目的:研究小鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)体外诱导CD8α+CD11b+jagged2high调节性树突状细胞(DCregs)的方法。方法:应用4种细胞因子体外刺激BALB/c(H-2d)小鼠骨髓有核细胞(BMCs)3 d,流式细胞术(FCM)分选树突状细胞(DCs),与BMSCs共培养10 d,诱导DCregs产生。FCM分析共培养前后DCs的表型、细胞周期及Notch信号通路中Jagged1、Jagged2配体的表达变化。结果:小鼠BMSCs在体外成功诱导新型DCs转变为DCregs,其CD86、CD80、CD40、MHC-II表达均明显下降(P<0.05),而CD205、Jagged1、Jag-ged2表达均明显上升(P<0.05);细胞周期中(G2+S)期细胞增加。结论:MSC可诱导DC细胞向DCregs转化,该MSC-DCregs具有致免疫耐受性表型,增殖能力提高;MSC诱导免疫耐受的机制可能与上调DC的Jagged1和Jagged2基因表达,激活T细胞Notch信号通路相关。
- 翁建宇黄欣赖沛龙李玥莹徐霖吴萍耿素霞杜欣
- 关键词：间充质干细胞调节性树突状细胞NOTCH信号通路
- 血管内皮细胞主要组织相容性复合物-Ⅱ类分子转录激活因子小干扰RNA的抑制作用
- 2007年
- 目的:探讨主要组织相容性复合物(MHC)-Ⅱ类转录激活因子(CⅡTA)的小干扰RNA(siRNA),对血管内皮细胞表面MHC-Ⅱ类分子表达的抑制作用。方法:设计并合成针对CⅡTA编码区第176、741及3061位点的siRNA(分别为siRNA1、siRNA2、siRNA3)。通过纳米载体介导siRNA稳定转染脐静脉血管内皮细胞系,流式细胞术检测经典的MHC-Ⅱ(HLA-DR、-DP、-DQ)类抗原表达,RT-PCR检测CⅡTA及其调控的MHC-Ⅱ类及Ii分子的mRNA水平。结果:siRNA3组内皮细胞系表面HLA-DR、-DP、-DQ抗原表达分别降低了91.97%、96.65%及89.67%,同时CⅡTA、MHC-Ⅱ类及Ii分子的mRNA含量明显减少。结论:siRNA3抑制了CⅡTA的mRNA含量,并阻止其调控的MHC-Ⅱ类分子的表达。
- 何飞郭荣杜欣翁建宇陆泽生
- 脐血CD34＋细胞中CⅡTA基因对MHC-Ⅱ类分子表达的调控
- 2008年
- MHC-Ⅱ类分子缺失可导致致命性的免疫缺陷。研究表明，多数急性早幼粒细胞白血病患者中白血病细胞不表达MHC-Ⅱ类分子，该白血病细胞不能够将抗原呈递给辅助性T细胞，从而影响细胞毒性T细胞的活化，最终导致肿瘤细胞逃避机体的免疫监视作用。MHC—Ⅱ类分子转录激活因子（MHC classⅡ transactivator，CⅡTA）可调控MHC-Ⅱ类分子表达。通过CⅡTA基因敲除小鼠证实，CⅡTA对MHC-Ⅱ类分子表达具有调控作用，故CⅡTA成为恢复MHC-Ⅱ类分子表达并发挥抗肿瘤作用的免疫治疗位点。我们通过CⅡTAsiRNA转染脐血CD34＋细胞，观察siRNA对CⅡTA的沉默效应，进一步证实CⅡTA对MHC-Ⅱ分子的调控作用。
- 郭荣杜欣翁建宇吴穗晶陆泽生林伟
- 关键词：CD34+细胞
- 定量监测Janus激酶3基因变化在移植物抗宿主病中的初步研究被引量：2
- 2007年
- 目的观察异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)后外周血单个核细胞 Janus 激酶3(JAK3)mRNA 表达水平的变化,探讨其与移植物抗宿主病(GVHD)之间的关系。方法采用荧光定量逆转录聚合酶链反应(FQ—RT-PCR)技术连续监测26例 allo-HSCT 后不同时间83份外周血单个核细胞 JAK3 mRNA 表达水平。结果 26例进行 allo-HSCT 的患者,14例患者移植后未发生GVHD,JAK3/ABL mRNA 表达水平中位数为8.71;1例发生急性 GVHD(aGVHD),JAK3/ABL 为31.94;11例发生慢性 GVHD(cGVHD),JAK3/ABL为19.23。连续观察4例患者,移植后1个月的 JAK3/ABL 表达水平与移植前比较无变化,但随着 GVHD 的出现,JAK3/ABL 表达水平又很快升高,并且随着GVHD 治疗好转,JAK3/ABL 表达水平又很快下降。结论 GVHD 患者 JAK3 mRNA 表达水平与GVHD 的病情演变相关。
- 李其辉杜欣耿素霞翁建宇郭荣陆泽生林伟黄梓伦
- 关键词：移植物抗宿主病逆转录聚合酶链反应
