国家自然科学基金(81071958)
- 作品数：6 被引量：21H指数：3
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- miR-210反义慢病毒对乏氧人肝癌细胞放射敏感性的影响被引量：1
- 2012年
- 为探讨miR-210表达下调对乏氧人肝癌SMMC-7721细胞放射敏感性的影响,利用分子生物学技术构建miR-210反义和随机寡核苷酸慢病毒载体,经慢病毒转染建立稳定转染miR-210反义和随机寡核苷酸的人肝癌SMMC-7721细胞株。以实时定量RT-PCR检测乏氧SMMC-7721细胞HIF-1αmRNA表达和miR-210表达,以四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡,克隆存活实验检测细胞放射敏感性变化。结果表明:SMMC-7721细胞乏氧培养后,HIF-1α和miR-210表达随时间逐渐增加,稳定转染miR-210反义寡核苷酸能明显下调miR-210在乏氧细胞的表达;下调miR-210表达明显抑制乏氧SMMC-7721细胞体外增殖活性(P<0.05;P<0.01),诱导G1期阻滞(P<0.05),促进细胞凋亡(P<0.01),提高乏氧SMMC-7721细胞放射敏感性,放射增敏比约为1.21。结果提示,下调miR-210表达可抑制乏氧SMMC-7721细胞体外增殖,诱导凋亡,增强其放射敏感性。
- 杨巍孙婷朱巍曹建平刘芬菊
- 关键词：MIR-210乏氧肝细胞癌
- 化学乏氧人肝癌细胞SMMC-7721中HIF-1α和miR-210的表达被引量：1
- 2011年
- 目的探讨不同浓度CoCl2对人肝癌细胞SMMC-7721乏氧诱导因子-1α(HIF-1α)和miR-210表达的影响以及RNA干扰HIF-1α基因对miR-210表达的影响。方法采用Western blot法检测不同浓度CoCl2培养24 h后SMMC-7721细胞HIF-1α蛋白表达变化,实时定量PCR检测miR-210相对表达量。脂质体介导靶向HIF-1α基因的RNA干扰质粒pGenesil-HIF转染SMMC-7721细胞后,乏氧培养24、48和72 h,分别采用Western blot法和实时定量PCR检测细胞HIF-1α蛋白表达变化和miR-210相对表达量。结果 50和100μmol/L CoCl2培养24 h后细胞HIF-1α蛋白表达和miR-210相对表达量与0μmol/L组相比,差异均无统计学意义(均P>0.05);150和200μmol/L CoCl2培养24 h后细胞HIF-1α蛋白表达和miR-210相对表达量均显著高于0μmol/L组(P<0.05或P<0.01)。转染质粒pGenesil-HIF后乏氧培养24、48和72 h,细胞HIF-1α蛋白表达和miR-210相对表达量显著低于阴性干扰组(均P<0.01)。结论化学乏氧人肝癌细胞SMMC-7721中HIF-1α和miR-210表达明显上调,RNA干扰HIF-1α基因可明显下调乏氧细胞miR-210表达。
- 杨巍朱巍曹建平刘芬菊
- 关键词：乏氧诱导因子-1ΑMIR-210肝癌RNA干扰
- 沉默乏氧诱导因子-1α基因对乏氧人肝癌细胞SMMC-7721放射敏感性的影响被引量：2
- 2011年
- 目的探讨RNA干扰乏氧诱导因子-1α(HIF-1α)基因对CoCl2诱导的乏氧人肝癌细胞SMMC-7721放射敏感性的影响及其机制。方法利用分子生物学技术构建靶向HIF-1α基因的RNA干扰质粒pGenesil-HIF,脂质体介导转染SMMC-7721细胞后进行乏氧培养,分别采用RT-PCR和Western blot法检测HIF-1α基因的mRNA和蛋白表达,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡,克隆存活实验检测细胞放射敏感性的变化。结果酶切鉴定和测序证实重组质粒pGenesil-HIF构建正确,转染质粒后乏氧培养24 h,SMMC-7721细胞HIF-1α基因的mRNA和蛋白表达水平明显低于对照组和阴性干扰组(P<0.05或P<0.01);乏氧培养24 h、48 h和72 h后,HIF-1α干扰组细胞增殖活性明显低于对照组(P<0.05或P<0.01),细胞阻滞于G0/G1期(P<0.01);乏氧培养48 h和72 h后HIF-1α干扰组细胞凋亡百分率明显高于对照组(P<0.01);乏氧培养72 h后HIF-1α干扰组SMMC-7721细胞放射增敏比为1.45。结论 RNA干扰HIF-1α基因可增强乏氧人肝癌细胞SMMC-7721的放射敏感性,其机制可能与RNA干扰HIF-1α基因抑制乏氧细胞增殖和诱导凋亡有关。
- 杨巍朱巍曹建平刘芬菊陈秋
- 关键词：乏氧诱导因子-1Α肝癌
- TRAIL和Smac双基因-放射治疗对人肝癌的体外抑瘤效应
- 为探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）和线粒体释放的caspase第2激活因子（Smac）双基因-放射治疗对离体培养人肝癌细胞HepGⅡ的抑瘤效应,利用基因重组技术构建含早期生长反应基因-1（Egr-1）启动子...
- 杨巍孙婷
- 关键词：TRAILSMACEGR-1基因-放射治疗肝癌
- 文献传递
- TRAIL和Smac双基因-放射治疗对人肝癌的体外抑瘤效应
- 为探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）和线粒体释放的caspase第2激活因子（Smac）双基因-放射治疗对离体培养人肝癌细胞Hep GⅡ的抑瘤效应,利用基因重组技术构建含早期生长反应基因-1（Egr-1）启动...
- 杨巍孙婷
- 关键词：TRAILSMACEGR-1基因-放射治疗肝癌
- 敲低长链基因间非编码RNA-p21对乏氧肿瘤细胞放射敏感性的影响被引量：3
- 2016年
- 目的探讨敲低长链基因间非编码RNA-p21（1incRNA-p21）对乏氧肿瘤细胞放射敏感性的影响及机制。方法实时荧光定量PCR（QRT-PCR）检测人肝癌细胞SMMC7721和脑胶质瘤细胞U251MG乏氧培养不同时间lincRNA—p21的表达。构建lincRNA—p21siRNA慢病毒载体．经慢病毒转染建立稳定敲低lincRNA—p21的SMMC7721和U251MG细胞系。流式细胞术检测乏氧肿瘤细胞周期和凋亡。克隆形成实验检测乏氧肿瘤细胞放射敏感性。Westernblot检测乏氧诱导因子1α（HIF-1α）和GLUT1蛋白含量。结果SMMC7721和U251MG细胞乏氧（1％O2）培养24和48h．1incRNA—p21的表达随培养时间的增加逐渐升高。24和48h与0h组相比，lincRNA—p21表达明显升高（t=5．13、7．49、8．90、10．11，P〈0．05）。稳定转染lincRNA—p21siRNA下调乏氧肿瘤细胞中lincRNA—p21的表达（t=144．81、334．32，P〈0．05）。乏氧（1％02）培养48h，敲低lincRNA-p21细胞SMMC7721和U251MG发生G2／M期阻滞（t=7．05、10．18，P〈0．05）；细胞凋亡明显增加（t=42．27、24．79，P〈0．05）；HIF—1α和GLUT1蛋白含量减少，放射敏感性增强，放射增敏比（SER）约为1．23、1．31。结论乏氧促进肿瘤细胞中lincRNA—p21表达。敲低lincRNA-p21增强乏氧肿瘤细胞放射敏感性，其机制可能与敲低lincRNA—p2l诱导细胞G2／M期阻滞和细胞凋亡，并导致HIF-1α蛋白水平下降有关。
- 沈月明杨巍
- 关键词：乏氧细胞周期细胞凋亡
- 乏氧调控因子miR-210的研究进展被引量：7
- 2011年
- 乏氧是实体肿瘤发展过程中的普遍现象,肿瘤乏氧细胞的存在使肿瘤对放化疗的抗性增加,更容易侵袭和转移。乏氧诱导因子(hypoxia-induciblefactors,HIF)调控能量代谢、细胞周期进程和凋亡等相关基因表达使细胞更加适应缺氧微环境,在相关酶或因子的变化过程中起中枢纽带作用。miR-210也参与调控乏氧细胞的生物学功能,在乏氧条件下的表达变化显著,无细胞特异性,已被证实在不同种类的乏氧肿瘤细胞和正常细胞中均以依赖HIF-1的方式表达上调。
- 杨巍
- 关键词：微小RNA乏氧乏氧诱导因子基因表达
- miR-210敲低联合放疗对裸鼠移植人肝癌的抑瘤效应被引量：7
- 2013年
- 为探索miR-210敲低联合放疗对裸鼠体内移植人肝癌细胞SMMC-7721的抑瘤效应,将稳定转染miR-210反义序列和随机序列的人肝癌细胞SMMC-7721接种于裸鼠。待各组裸鼠肿瘤直径达到6 mm–8 mm,检测各组裸鼠miR-210和相关蛋白表达;各组裸鼠肿瘤局部在正常氧或乏氧条件下接受8 Gy X射线照射,检测各组裸鼠放疗后不同时间的肿瘤体积;照射后24 h用免疫组化染色检测肿瘤细胞增殖活性和肿瘤间质微血管密度,用TUNEL法检测肝癌细胞凋亡率。结果表明:miR-210敲低组的miR-210和乏氧诱导因子-1α(Hypoxia induced factor 1α,HIF-1α)表达明显低于对照组;miR-210靶基因蛋白表达明显高于对照组;照射后9 d–30 d,miR-210敲低常氧或乏氧照射组的肿瘤体积分别明显小于随机序列常氧或乏氧照射组;照射后24 h,miR-210敲低常氧或乏氧照射组的肿瘤细胞增殖活跃度和肿瘤间质微血管密度明显低于随机序列常氧或乏氧照射组,细胞凋亡率则明显升高。结果提示,miR-210敲低可提高裸鼠移植人肝癌的放疗效果。
- 魏静杨巍孙婷刘芬菊
- 关键词：MIR-210乏氧放疗肝癌
