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T-ALL及T细胞株相关TCR Vβ基因谱系和克隆性分析被引量：7: 2004年; 目的　了解T细胞急性淋巴细胞白血病 (T ALL)患者外周血中的T细胞及T细胞株的TCRVβ基因谱系及其克隆性增殖情况。方法　利用RT PCR方法扩增 6个不同的T细胞株和 6例初发未治T ALL病人外周血单个核细胞中 2 4个TCRVβ基因的互补决定区 3(CDR3) ,PCR产物进一步经荧光标记和基因扫描分析CDR3长度而确定T细胞的克隆性 ,部分T细胞株的单克隆PCR产物进一步进行序列分析。结果　与正常人外周血表达全部 2 4个Vβ亚家族不同 ,6例T ALL病人分别表达 5～ 12个Vβ亚家族。 6例病人均存在 1个或多个Vβ亚家族的寡克隆或双克隆增殖T细胞 ,另外 ,还有一些Vβ亚家族多克隆模式发生改变 ,呈现寡克隆性增殖的趋势。T细胞株多显示为表达一个Vβ亚家族的单克隆T细胞 ,不同T细胞株的CDR3长度和序列不尽相同。结论　T ALL患者外周血T细胞的TCRVβ谱系出现限制性改变 ,均可检测到克隆性增殖T细胞 ,尚需进一步鉴定其性质 (肿瘤性或抗原特异性增殖 ) 。; 黄梅娟李扬秋陈少华周羽竝杨力建韩素芳; 关键词：T细胞受体VΒ基因 T细胞克隆性

B-ALL病人TCR Vβ基因谱系和克隆性分析被引量：7: 2004年; 目的　了解B ALL病人外周血T细胞的TCRVβ基因谱系及其克隆性增殖情况。方法　利用RT PCR方法扩增 13例初发未治B ALL病人外周血单个核细胞中 2 4个TCRVβ基因的互补决定区 3(CDR3) ,PCR产物进一步经荧光标记和基因扫描分析CDR3长度而确定T细胞的克隆性。结果　 13例B ALL病人分别表达 2～ 18个Vβ亚家族。 13例病人均存在 1个或多个Vβ亚家族的克隆增殖T细胞 ,增殖形式包括寡克隆及寡克隆增殖趋势、双克隆和单克隆。Vβ2 1和Vβ2 3亚家族出现克隆增殖性T细胞的频率较高。结论　B ALL病人外周血T细胞的TCRVβ谱系呈现优势利用的特点 ,并存在克隆性增殖的T细胞 ,这可能是机体对白血病相关抗原产生的特异性免疫反应 ;Vβ2 1和Vβ2 3亚家族T细胞发生克隆增殖改变的趋向性比较明显 ,可能与B; 黄梅娟李扬秋陈少华杨力建周羽竝张涛; 关键词：T细胞受体VΒ基因 T细胞克隆性

独特型TCR Vβ2 DNA疫苗的构建和体外表达检测被引量：4: 2006年; 目的:构建抗淋巴细胞白血病的独特型TCRVβ2DNA疫苗,并检测其转染K562细胞和体外表达情况。方法:利用RT-PCR扩增表达TCRVβ2的Molt-4细胞株的独特型TCRVβ2基因片段,定向克隆于pIREs表达载体中,重组质粒转染至K562细胞中,利用间接免疫荧光法、SDS-PAGE和Westernblotting等检测其表达情况。结果:经PCR检测证实成功构建pIREs-TCRVβ2重组子,转染至K562细胞后,利用Vβ2单抗可检测到K562细胞表面表达TCRVβ2,SDS-PAGE分离检测为15kD的蛋白质,并经Vβ2特异抗体Westernblotting鉴定为TCRVβ2蛋白。结论:成功构建pIREs-TCRVβ2DNA疫苗,并可以在K562细胞株中表达特异蛋白。; 周羽竝黄梅娟杨力建陈少华李扬秋; 关键词：VΒ K562细胞

利用pIRES载体构建TCR独特型重组质粒被引量：1: 2008年; 目的利用可同时表达两个基因片段的pIRES作为载体,构建TCR独特型重组质粒,为制备诱导抗T细胞肿瘤免疫的TCR独特型DNA疫苗提供基础。方法设计引物,提取Jurkat及Molt4细胞株RNA为模板,RT-PCR法特异性扩增CDR3区,与pIRES经酶切连接后氯化钙法转化,重组质粒经酶切鉴定后测序。结果构建出3种重组质粒pIRES-Jurkat Vβ8、pIRES-Molt4 Vβ2①和pIRES-Molt4 Vβ2②,其中pIRES-Molt4 Vβ2②测序正确,可体外表达Vβ2蛋白。结论利用真核表达载体pIRES可成功构建TCR重组质粒,并有可能用于进一步克隆佐剂基因片段入pIRES的多克隆位点,提高DNA疫苗的免疫原性。; 黄梅娟李扬秋杨力建陈少华; 关键词：T细胞受体独特型重组质粒佐剂

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广东省科技计划工业攻关项目(2002C1040501)