山东省科技发展计划项目(2011GSF11810)
- 作品数：8 被引量：9H指数：2
- 相关作者：孙晋浩李贵宝岳庆伟暴丽华吴金涛更多>>
- 相关机构：山东大学山东省精神卫生中心济南市第四人民医院更多>>
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- 帕潘立酮对地佐环平损伤脑皮层神经元的保护作用及其机制被引量：1
- 2012年
- 目的探讨帕潘立酮对地佐环平损伤大鼠脑皮层神经元的保护作用及机制。方法取孕15 d胎鼠脑皮层神经元体外培养,应用地佐环平损伤神经元,然后加入不同浓度的帕潘立酮。采用MTT技术检测脑皮层神经元的生长活性,采用酶标仪检测乳酸脱氢酶(LDH)的活性及激光共聚焦技术检测神经元细胞内Ca2+浓度观察神经元凋亡情况,通过神经元突起数目及长度检测神经元生长情况,应用实时定量PCR技术检测Akt1、GSK3β的表达变化。结果与正常对照组相比,地佐环平损伤组神经元活性明显下降,LDH释放增加,细胞内游离钙离子浓度升高(P均<0.01),神经元突起总长度下降,神经突起数目呈现不同程度的减少(P<0.01),RT-PCR结果显示,Akt1及GSK3β表达下降(P<0.01);加入不同浓度的帕潘立酮能明显对抗地佐环平对神经元的损伤,MTT结果显示神经元活性升高(P<0.01),LDH活性明显降低(P<0.001),细胞内游离Ca2+浓度显著下降(P<0.01),神经突起数目和长度增加(P<0.01),Akt1及GSK3β表达上升(P<0.01)。结论帕潘立酮对地佐环平损伤脑皮层神经元具有明显保护作用,可抑制细胞凋亡,并通过Akt1-GSK3β通路促进神经突起的生长。
- 彭雷董海曼张静暴丽华李贵宝宋涛刘增训孙晋浩高英茂
- 关键词：脑皮层神经元地佐环平
- 甲基苯丙胺对中脑边缘投射多巴胺神经元自发动作电位频率和I_h电流的影响被引量：2
- 2014年
- 目的检测高浓度甲基苯丙胺(MA)对中脑边缘多巴胺神经元自发动作电位频率和超极化激活阳离子电流(Ih)的影响。方法应用立体定位仪将逆行示踪剂注入伏隔核区(NAc),标记投射到该区域的中脑边缘多巴胺神经元,并进行酪氨酸羟化酶(TH)染色鉴定;制备中脑脑片,应用膜片钳技术在全细胞模式下检测MA(10μmol/L)对标记神经元自发动作电位频率及Ih的作用。结果中脑边缘投射多巴胺神经元可被准确示踪标记,呈TH阳性,位于腹侧被盖区(VTA);MA可明显降低其自发动作电位频率(P<0.05),并抑制Ih电流(P<0.05)。结论甲基苯丙胺可抑制中脑边缘多巴胺神经元的自发动作电位频率和Ih电流。
- 岳庆伟朱德晓吴金涛刘海莉张静李贵宝丁兆习孙晋浩
- 关键词：甲基苯丙胺多巴胺神经元
- 白藜芦醇对Aβ25-35诱导PC12细胞损伤的保护作用
- 2012年
- 目的探讨白藜芦醇对Aβ25-35诱导PC12细胞损伤的保护作用。方法用不同浓度的Aβ25-35处理PC12细胞,建立细胞毁损模型,然后加入不同浓度的白藜芦醇,在显微镜下观察PC12细胞形态的变化及突起生长情况。采用MTT检测技术观察PC12细胞的生长活性,采用酶标仪检测乳酸脱氢酶(LDH)的活性,采用瑞士-吉姆萨染色和流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果损伤组加入Aβ25-35,24 h后细胞形态不规整,突起出现不同程度的肿胀破裂,48 h后见不到完整的突起结构;保护组加入白藜芦醇预孵育后明显延缓突起损伤,24 h后仍能观察到比较完整的突起结构,48 h后远端发生轻微断裂。保护组细胞突起长度和D(λ)值明显大于损伤组(P<0.01),细胞凋亡数以及LDH活性明显低于损伤组(P<0.01)。结论白藜芦醇对Aβ25-35诱导的PC12细胞损伤具有明显的保护作用。
- 冯晓雯高青董海曼彭雷岳庆伟张静暴丽华李贵宝孙晋浩高英茂
- 关键词：细胞凋亡白藜芦醇淀粉样Β蛋白PC12细胞
- 中脑皮层投射多巴胺神经元的提取及帕潘立酮对其电生理学特性的影响被引量：1
- 2012年
- 目的精确示踪并分离中脑皮层多巴胺(DA)能神经元,检测帕潘立酮对其动作电位的影响。方法采用脑立体定位技术,将荧光逆行性示踪剂注射至鼠脑内嗅皮层区,灌注取脑,行冰冻切片;采用免疫组织化学技术进行酪氨酸羟化酶(TH)染色;依据荧光强度分选示踪标记的神经细胞并培养,采用细胞膜片钳技术对其进行电流注射,并加入抗精神病药物帕潘立酮,检测加药前后动作电位的产生及变化。结果准确标记向脑皮质投射的中脑DA能神经元,呈TH阳性,位于腹侧被盖区;筛选出标记的DA能神经元,电流刺激可诱发出DA神经元典型的动作电位,加入抗精神病药物帕潘立酮后,动作电位幅度降低(P<0.05)、宽度变小(P<0.01)。结论精确分离出向脑额叶投射的中脑皮层DA神经元,帕潘立酮可降低此类细胞动作电位幅度及宽度,从而降低细胞的兴奋性。
- 董海曼高青张静暴丽华李贵宝彭雷冯晓雯岳庆伟刘增训孙晋浩高英茂
- 关键词：多巴胺神经元立体定位技术动作电位
- 帕金森病肠功能分析及CXCR4在肠神经系统中的表达被引量：1
- 2014年
- 目的研究帕金森病(PD)大鼠肠功能的改变,探讨趋化因子CXCL12受体CXCR4在肠神经系统中的功能及作用机制。方法将20只SD大鼠随机分为6-OHDA组和对照组。6-OHDA组经6-OHDA脑内定点注射建立PD动物模型,建模4周后收集两组大鼠1 h粪便排出量,计算粪便含水量。利用免疫荧光染色法检测胃肠神经细胞CXCR4表达的变化。结果与对照组相比,6-OHDA组大鼠1 h粪便排出量及含水量明显降低(P<0.01),而且胃肠神经组织中CXCR4阳性细胞数量明显减少,但荧光强度显著增强(P<0.01)。结论 PD大鼠胃肠神经系统中CXCR4表达水平降低与其胃肠功能障碍密切相关。
- 张静暴丽华吴金涛李贵宝刘海莉岳庆伟朱德晓孙东宋守阳丁兆习孙晋浩
- 关键词：帕金森病肠神经系统6-OHDACXCR4
- 6-OHDA损伤神经细胞CXCR4/CXCL12表达变化的实验研究被引量：1
- 2014年
- 目的研究6-OHDA损伤PC12细胞CXCR4/12表达的变化。方法以梯度浓度的6-OHDA处理PC12细胞,光镜观察各组PC12细胞的形态学变化;MTT法检测6-OHDA对PC12细胞的损伤;间接免疫荧光染色法检测6-OHDA不同浓度下PC12细胞CXCR4/CXCL12表达的变化。结果随6-OHDA浓度的增加,PC12细胞的存活率呈梯度降低;光镜下观察发现PC12细胞数减少,轴突变短甚至消失;间接免疫荧光染色则显示CXCL12及其受体CXCR4在神经细胞的表达增加。结论 6-OHDA浓度的增加可导致PC12细胞凋亡,同时伴有CXCL12及其受体CXCR4表达增加。
- 王辉暴丽华李涛李贵宝吴琦朱德晓吴金涛刘海莉张静孙晋浩
- 关键词：6-OHDAPC12细胞形态学变化
- 轴突导向因子EphA5沉默后抑制中脑神经上皮细胞投射
- 2012年
- 目的：探讨轴突导向因子EphA5在中脑神经上皮细胞向纹状体投射中的作用。方法：从孕11d大鼠胚胎取材并培养中脑神经上皮细胞；设计EphA5基因干扰序列，构建RNA干扰载体，采用电转染技术将EphA5干扰载体转入中脑神经上皮细胞，电转后将中脑神经上皮细胞与纹状体共培养，观察转染后中脑神经上皮细胞向纹状体组织的靶向生长情况。结果：中脑神经上皮细胞与纹状体组织块联合培养，神经突起明显朝向组织块生长；EphA5基因干扰载体转染中脑神经上皮细胞可降低EphA5蛋白表达，EphA5基因沉默后神经上皮细胞突起朝向纹状体生长趋势不明显。结论：EphA5基因沉默后中脑神经上皮细胞向纹状体投射减弱，EphA5基因可调控中脑神经上皮细胞向纹状体的靶向投射。
- 房芃高青冯晓雯张静暴丽华董海曼彭雷李振华孙晋浩高英茂
- 关键词：神经上皮细胞中脑RNA干扰
- 细胞外信号调节激酶/miR-133b在甲基苯丙胺致PC12细胞神经毒性的作用及机制被引量：4
- 2014年
- 目的探讨甲基苯丙胺(MA)致神经细胞毒性过程中细胞外信号调节激酶(ERK)和miR-133b的表达变化及调控机制。方法用MA建立PC12神经细胞损伤模型,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)检测细胞活性及镜下形态观察确定MA最佳损伤浓度;应用流式细胞术检测细胞内活性氧(ROS)水平;通过Western blotting技术测定总ERK1/2和磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)的表达变化;并应用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)测定miR-133b的表达变化。为进一步分析ERK/miR133b分子通路的作用关系,经U0126特异阻断ERK通路,检测miR-133b的表达变化。结果给予不同浓度的MA,均可导致PC12细胞损伤,其中800μmol/L MA处理后,大部分胞体变圆,神经突起退缩,神经网络消失。MTT结果显示细胞活性明显下降。进一步的细胞毒性机制分析显示,MA处理后,细胞内ROS水平升高,p-ERK表达增高,miR-133b表达降低;并且给予ERK通路抑制剂U0126(10μmol/L)后,miR-133b表达升高,细胞活性增强,胞内ROS水平降低,镜下细胞损伤改善。结论 MA可通过上调ERK磷酸化抑制miR-133b表达,介导神经元毒性损伤。
- 刘海莉朱德晓吴金涛岳庆伟王辉李泽岩李贵宝刘增训张静孙晋浩
- 关键词：甲基苯丙胺细胞外信号调节激酶神经毒性PC12细胞免疫印迹法实时定量聚合酶链反应
