国家自然科学基金(3077033)
- 作品数：2 被引量：3H指数：1
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- 假单胞菌DLL-E4尿黑酸降解基因的克隆与功能的初步分析被引量：1
- 2008年
- 通过接合转移将质粒pSC123上的转座子Tn5随机插入到DLL-E4基因组DNA中,从大约8,000个突变子中筛选到1株在LB培养基上积累红褐色物质的突变株M18,该突变株不能以L-苯丙氨酸(L-Phenylalanine, Phe)为唯一碳源生长。SEFA-PCR扩增转座子侧翼序列发现其与已报道的尿黑酸1,2-双加氧酶基因hmgA的同源性为92%。将hmgA定向克隆至表达载体pET-29a中,转化至Escherichia coli BL21,经IPTG诱导后可表达分子量约为48kD的蛋白;诱导后转化子粗酶液对尿黑酸有很好的降解效果。将hmgA连入自杀性载体pEX19Gm,通过同源重组整合至M18染色体中,使其恢复了DLL-E4利用Phe的能力,证实了HmgA是尿黑酸苯环裂解酶。
- 沈文静邓海华曹慧李晓丹王世明崔中利李顺鹏
- 关键词：转座子标签法同源重组基因敲入
- 恶臭假单胞菌DLL-E4对硝基苯酚降解途径关键基因pnpC的突变分析被引量：2
- 2008年
- 通过同源重组成功地敲除了恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida)DLL-E4菌株的偏三苯酚1,2-双加氧酶基因(pnpC)。pnpC插入失活菌株DLL-ΔpnpC1失去了降解对硝基苯酚(PNP)和对苯二酚(HQ)的能力,而pnpC敲除菌株DLL-ΔpnpC恢复了利用PNP和HQ的能力,但是降解速率降低。在不同硫酸铵分级梯度下PNP和邻苯二酚分别诱导的DLL-E4和DLL-ΔpnpC粗酶液对邻苯二酚的降解活性存在明显差异,表明恶臭假单胞菌DLL-E4中除pnpC参与PNP降解代谢过程外,还存在另一个双加氧酶替代了敲除的pnpC的功能,使得DLL-ΔpnpC代谢PNP的过程得以继续。
- 沈文静张静曹慧崔中利
- 关键词：对硝基苯酚基因敲除降解
