国家自然科学基金(81071907) 作品数:7 被引量:55 H指数:2 相关作者: 练雪梅 魏思宇 卢蕾 王双 徐彩 更多>> 相关机构: 重庆医科大学 浙江省台州医院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 教育部“新世纪优秀人才支持计划” 重庆市自然科学基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 更多>>
炎症对高脂状态下肺泡Ⅱ型上皮细胞脂质蓄积的影响 2012年 目的观察高脂状态下肺泡Ⅱ型上皮细胞(Alveolar typeⅡepithelial cells,ATⅡ)株A549细胞的脂质蓄积,并探讨炎症对高脂状态下A549细胞脂质蓄积的影响及可能的作用机制。方法将A549细胞分为4组:对照组(不加药物)、高脂组(100μg/ml LDL)、炎症组(300 ng/ml LPS)、联合处理组(100μg/ml LDL+300 ng/ml LPS),处理24 h后,油红O染色观察各组细胞内脂质蓄积情况;Real-time PCR检测固醇调节元件结蛋白2(Sterol regulatory elememnt binding proteins 2,SREBP2)、HMGCoA(3-Hydroxy-3-methlglutary 1 coezyme A)还原酶和低密度脂蛋白受体(Low-density lipoprotein receptor,LDLr)基因mRNA转录水平;Western blot法检测SREBP2、LDLr和三磷酸腺酐结合盒转运体A1(ATP-binding cassette sub-family A member 1,ABCA1)蛋白表达水平。结果联合处理组细胞内脂质蓄积较对照组、高脂组及炎症组严重;与对照组相比,高脂组的SREBP2、HMGCoA还原酶、LDLr基因mRNA转录水平反馈性下调(0.54±0.09)、(0.51±0.06)及(0.34±0.06)倍(P<0.05);联合处理组各基因mRNA转录水平下调程度低于高脂组;SREBP2及LDLr蛋白表达水平的变化趋势与基因转录水平基本一致;与对照组相比,高脂组ABCA1蛋白的表达反馈性上调(2.78±0.38)倍(P<0.01);联合处理组ABCA1蛋白表达上调无高脂组明显。结论炎症可加重高脂状态下肺泡Ⅱ型上皮细胞内的脂质蓄积,其机制可能与炎症干扰SREBP2-LDLr/HMGCoA还原酶通路介导的细胞内脂质稳态有关。 朱婷婷 王双 方严 练雪梅关键词:炎症 脂质蓄积 上皮细胞 27-羟基胆固醇激活LXR信号通路调节肺癌细胞的增殖 被引量:2 2019年 目的:探讨胆固醇代谢产物27-羟基胆固醇(27-OHC)对肺癌细胞增殖的影响。方法:采用不同浓度(0、0.3125、0.625、1.25、2.5、5和10μmol/L)的27-OHC处理人肺癌A549细胞24~48 h,随后使用细胞计数试剂盒(CCK-8法)评估细胞活力,采用流式细胞术检测细胞周期,Ed U实验检测细胞增殖状况,采用总胆固醇检测试剂盒检测细胞内胆固醇水平,real-time PCR及Western blot法分别检测胆固醇代谢相关分子的表达。结果:27-OHC以剂量和时间依赖性显著降低A549肺癌细胞的活力(P <0.01),抑制细胞增殖(P <0.05)。27-OHC通过上调肝X受体(LXR)信号通路下游靶蛋白ATP结合盒转运蛋白A1(ABCA1)的表达,促进细胞内胆固醇的外排,同时下调低密度脂蛋白受体(LDLR)和3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶(HMG-CR)的表达,减少胆固醇的摄入和从头合成,导致细胞内胆固醇水平降低,细胞活力下降(P <0.01)。此外,LXR通路被5μmol/L GSK2033部分阻断后,27-OHC对A549细胞活力的抑制作用显著减弱(P <0.05)。结论:27-OHC通过激活LXR通路抑制A549细胞增殖。 傅由芸 陈婷 蔺晓菁 高静 练雪梅关键词:细胞增殖 肺癌 高脂高胆固醇饮食致C57BL/6J小鼠肺组织脂质蓄积的研究 被引量:1 2012年 目的:研究高脂高胆固醇饮食(Paigen饮食)是否可以导致C57BL/6J小鼠肺组织的脂质蓄积。方法:66只C57BL/6J雄性6~8周龄小鼠随机分为2组,分别喂饲普通饮食和Paigen饮食,于喂养12、16、20周3个时间点,取主动脉做冰冻切片,油红O染色观察粥样硬化斑块形成情况;肺组织冰冻切片油红O染色,观察肺组织脂质蓄积情况;体外培养A549细胞观察用不同浓度低密度脂蛋白(Low density lipoprotein,LDL)处理后,A549细胞内脂质蓄积情况。结果:Paigen饮食可导致C57BL/6J小鼠主动脉粥样硬化;同时,不同时间点C57BL/6J小鼠肺组织油红O染色结果提示该饮食还可以导致C57BL/6J小鼠肺组织出现脂质蓄积,并随着时间延长而加剧;不同浓度LDL刺激A549细胞的油红O染色结果提示:A549细胞的脂质蓄积与LDL处理的浓度间存在剂量效应关系。结论:Paigen饮食可以导致C57BL/6J小鼠肺脏出现时间依赖性的脂质蓄积,其机制可能与肺泡Ⅱ型上皮细胞的脂质代谢异常有关。 王双 朱婷婷 方严 陈婷 张恋 练雪梅关键词:脂代谢 代谢相关通路在人肺癌细胞系A549原位移植瘤模型中的表达 被引量:2 2017年 目的:近年来,代谢与肿瘤发病的病因学研究已经成为热点,同时肺癌仍居恶性肿瘤发病率和死亡率榜首,本研究拟构建一个稳定易操作的肺癌原位移植瘤模型,并初步探讨代谢相关通路在该原位移植瘤模型中的表达。方法:选取雄性6~8周龄BABL/c裸鼠10只,优化麻醉用药及手术操作步骤,经气管移植5×106个细胞的A549肺癌细胞成瘤,观察移植瘤形成率、形成部位、大体形态、增殖分化程度。另取4只相同条件裸鼠进行手术空白对照。同时检测代谢相关通路蛋白STAT3、AKT和m TOR的表达情况等。结果:手术最佳麻醉条件为75 mg/kg戊巴比妥钠腹腔注射;改进操作后经气管移植的小鼠肺癌形成率为80.0%;肿瘤形成以右肺上叶居多,呈明显腺癌结构,分化程度较低,移植瘤组织增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)的表达高于肺组织,呈高表达状态。肿瘤负荷肺组织代谢相关通路蛋白信号传导与转录激活因子3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)、蛋白激酶B(protein kinase B,PKB即AKT)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,m TOR)的磷酸化水平即p STAT3/STAT3、p AKT/AKT、p-m TOR/m TOR比值均高于正常肺组织,差异具有统计学意义(t=-4.381,-4.462,-4.951;P=0.041,0.011,0.038)。结论:通过改良经气管移植手术方式,可以构建一种操作简单、低成本、高效稳定的A549细胞肺癌移植瘤模型;代谢相关通路在肺癌的发生发展中也发挥了一定作用。 卢蕾 魏思宇 徐彩 蔺晓菁 何芸芸 练雪梅关键词:A549 原位移植 信号传导与转录激活因子3 蛋白激酶B 哺乳动物雷帕霉素靶蛋白 β-谷甾醇对人肺癌A549细胞增殖及凋亡的影响 被引量:44 2016年 目的研究β-谷甾醇对A549细胞是否具有潜在的抗增殖和诱导凋亡作用。方法不同浓度β-谷甾醇处理人肺癌A549细胞24h后,采用CCK-8法检测细胞的增殖抑制作用;流式细胞术检测A549细胞周期分布及凋亡率的变化。结果β-谷甾醇以剂量依赖性方式明显抑制A549细胞的生长;流式结果表明β-谷甾醇使A549细胞阻滞在G2/M期,同时促使A549细胞凋亡率的增加。结论β-谷甾醇可诱导人肺腺癌A549细胞G2/M期细胞周期阻滞,并引起细胞凋亡性死亡。 周玲玉 徐彩 王乐琴 魏思宇 卢蕾 练雪梅关键词:Β-谷甾醇 肺癌 A549 细胞周期 高效液相色谱法测定A549细胞中的胆固醇水平研究 2017年 目的建立检测A549细胞内胆固醇水平的高效液相色谱(HPLC)方法,为以胞内胆固醇相对水平变化作为指标鉴定组织细胞泡沫化程度及特定组织细胞泡沫化对组织损伤提供技术支持。方法用氢氧化钾乙醇溶液和三氯乙酸分别除去细胞裂解液中的三酰甘油和蛋白,用正己烷-异丙醇的混合溶剂提取细胞内的胆固醇。胆固醇水平采用HPLC法测定,色谱柱为ZORBAX SB-C18(4.6mm×150.0mm,5μm),流动相为乙腈-异丙醇(67∶33,V/V),流速为1mL/min,检测波长为206nm。结果细胞内胆固醇在5~100ng/μL内线性关系良好(r=0.999 9);相对标准偏差(RSD)均低于3.0%,平均加样回收率为94.89%,RSD为2.86%(n=6)。结论 HPLC法简便、准确、重复性好,可用于泡沫细胞程度鉴定,为探讨脂质代谢异常与器官损伤及进一步研究胆固醇代谢紊乱与肺损伤奠定基础。 魏思宇 卢蕾 蔺晓菁 何芸芸 丁世家 阮雄中 练雪梅关键词:高效液相色谱 A549细胞 胆固醇 多次注射乌拉坦诱导的BALB/C及C57BL/6J小鼠肺癌模型的比较 被引量:6 2014年 目的探讨一种稳定的多次乌拉坦注射诱导小鼠肺癌模型的构建方法,比较BALB/C及C57BL/6J小鼠对该肺癌模型的敏感性。方法 10只BALB/C小鼠及10只C57BL/6J小鼠适应性饲养3周,随后每只小鼠分别被给予每周1次腹腔注射1 g/kg体重乌拉坦,连续注射10周,继续喂养15周后处死小鼠取肺组织。由3名不同的检测者在解剖显微镜下观察计数肺组织表面肿瘤数目并以直径记录肿瘤大小;HE染色检测肺组织病理变化。结果多次乌拉坦注射诱导的BALB/C及C57BL/6J小鼠肺癌发生率均为10/10(100%);BALB/C小鼠荷瘤数明显多于C57BL/6J小鼠(P<0.01),同时,直径也大于C57BL/6J小鼠(P<0.05);HE染色显示多次乌拉坦注射诱导的肺癌有非典型性腺瘤增生及腺瘤两种病变类型。结论 BALB/C和C57BL/6J小鼠均可以作为多次注射乌拉坦诱导性肺癌模型的动物,BALB/C小鼠对该肺癌模型的敏感性高于C57BL/6J小鼠。 陈婷 王双 张恋 雷晓琴 吴诗诗 练雪梅关键词:BALB/C C57BL/6J