新疆维吾尔自治区自然科学基金(2011211B38)
- 作品数：2 被引量：4H指数：2
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- 泰勒焦虫表面抗原Tams1、SPAG1和TaSP基因的克隆与表达被引量：3
- 2013年
- 【目的】以真核表达系统串联表达环形泰勒焦虫表面抗原Tams1、SPAG1和TaSP的高免疫原性区片段,为研究焦虫重组串联蛋白免疫原性奠定基础。【方法】以悬浮培养泰勒焦虫细胞为材料,利用SOEingPCR方法将Tams1、SPAG1和TaSP蛋白高免疫原性区基因通过柔性氨基酸串联嵌合在乙型肝炎病毒核心抗原(HBc)的主要免疫优势区,构建模拟表位-HBc嵌合蛋白真核表达质粒,转染BHK-21细胞,通过Western-Blot检测目的基因表达产物。【结果】Western-Blot分析显示,阳性质粒转染BHK-21细胞裂解产物在硝酸纤维素膜上呈现特异性条带,大小与预期分子量相当;正常BHK-21细胞裂解产物未呈现相应的条带。【结论】重组嵌合蛋白在真核表达系统中成功表达。
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- 关键词：泰勒焦虫表面抗原真核表达
- 泰勒焦虫重组蛋白TaSP-Tams1-SPAG1间接ELISA检测方法的建立被引量：4
- 2013年
- 以真核表达的焦虫表面抗原重组蛋白TaSP-Tams1-SPAG1作为ELISA板包被抗原,通过方阵实验确定抗原包被浓度,探索抗原包被时间、温度、一抗及二抗血清稀释度及作用时间,建立牛环形泰勒焦虫表面抗原重组蛋白ELISA方法。结果得出TaSP-Tams1-SPAG1的最佳包被浓度为10μg/mL,血清最佳稀释度为1∶100,ELISA阳性反应的临界值为OD492nm≥0.348,重复试验变异系数小于12%,所建立的ELISA方法不与牛巴贝斯虫及牛瑟氏泰勒虫血清发生反应。TaSP-Tams1-SPAG1为抗原建立的ELISA方法特异性强,敏感度高,重复性好,为牛环形泰勒焦虫病的准确检测及防治提供技术支持。
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- 关键词：泰勒焦虫重组蛋白ELISA
