河北省自然科学基金(c2008001030)
- 作品数：3 被引量：6H指数：1
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- 骨形态发生蛋白2诱导P19细胞体外向心肌样细胞分化
- 2011年
- 目的探讨骨形态发生蛋白2(BMP-2)诱导P19细胞形成细胞聚集体并向心肌细胞分化的作用。方法将P19细胞接种于铺有0.5%软琼脂的培养皿中,BMP-2诱导悬浮培养4d形成细胞聚集体,将细胞聚集体用生长培养基黏附培养至19d。相差显微镜观察细胞形态学变化,应用免疫细胞化学、激光扫描共焦显微镜技术检测α-横纹肌肌动蛋白(α-sarcomeric actin)和心肌特异性肌钙蛋白T(C-TnT)的表达,透射电镜观察分化细胞的超微结构。结果经BMP-2诱导悬浮培养24h后即可见多个悬浮的细胞团形成,至第4天形成细胞聚集体/类胚体(EBs)。将EBs再用生长培养基黏附培养后,可见位于EBs中央的细胞密集、颜色较深,为EBs的内核。EBs贴壁生长后8h,细胞由EBs边缘逐渐爬出,在周边形成单层的生长晕,中央细胞多层排列,增殖速度较快,细胞体积较小,具有高核质比,为未分化细胞。培养至11d后,细胞生长晕中一些细胞变形,胞体伸长,体积增大,呈放射状排列。培养至第19天,EBs边缘生长晕中变形的细胞表达α-横放肌肌动蛋白和c-TnT蛋白。免疫荧光双标染色显示α-横纹肌肌动蛋白和C-TnT蛋白均定位于细胞质并且呈共表达。透射电镜下观察到,分化细胞呈杆状,细胞核呈卵圆形,位于细胞中央,细胞器丰富,并可见到平行排列的肌丝。结论 BMP-2暴露结合悬浮培养可以诱导P19细胞向心肌样细胞分化。
- 王海萍张雷陈炜吕洋尹青张金平
- 关键词：骨形态发生蛋白2P19细胞
- 二甲基亚砜体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化为心肌样细胞被引量：6
- 2009年
- 目的探索二甲基亚砜(DMSO)体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)向心肌样细胞分化的方法。方法取SD大鼠四肢骨骨髓,分离培养MSCs,应用终浓度为1.0%的DMSO定向诱导,相差显微镜观察细胞形态学变化,应用免疫细胞化学、激光扫描共聚焦显微镜技术检测结蛋白(desmin)、α-横纹肌肌动蛋白(α-sarcomeric actin)和心肌特异性肌钙蛋白(C-TnT)的表达,透射电镜观察超微结构。结果MSCs经体外诱导后分化的细胞均阳性表达desmin、α-sarcomeric actin和C-TnT。透射电镜下可见到平行排列的肌丝和丰富的粗面内质网。结论大鼠骨髓间充质干细胞体外在DMSO诱导下可以定向分化为心肌样细胞。
- 王海萍张雷邵素霞赵静
- 关键词：骨髓间充质干细胞心肌细胞
- 碱性成纤维细胞生长因子体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化为心肌样细胞
- 2011年
- 目的探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)体外诱导骨髓间充质干细胞(BMSCs)分化为心肌细胞的可行性。方法取SD大鼠四肢骨骨髓,分离培养BMSCs,应用bFGF对其定向诱导,倒置相差显微镜观察细胞形态学变化,应用免疫细胞化学、激光扫描共焦显微镜技术检测结蛋白(desmin)、α-横纹肌肌动蛋白(α-actin)、心肌特异性肌钙蛋白(C-TnT)的表达,透射电镜观察分化细胞的超微结构变化。在诱导后7d、21d和28d,3个时间点以半定量RT-PCR方法检测细胞心肌早期转录因子GATA4和心肌特异性α肌球蛋白重链(α-MHC)的表达。结果原代细胞培养48 h后,大部分细胞呈梭形成纤维细胞状,并带有2～3个长的突起,小部分细胞呈扁平形。给予bFGF诱导后,细胞形态发生明显变化,诱导1周的BMSCs体积增大呈肌细胞样短柱状或长梭形,平行排列生长,诱导4周的BMSCs细胞多呈短柱状,相邻细胞紧密接触形成类肌管样结构,排列具有明显的方向性。经bFGF诱导后分化的细胞胞质内desmin、α-actin和C-TnT染色均为阳性,其中α-actin、desmin阳性率较高分别为58.64%和33.82%,C-TnT阳性率较低为28.94%。激光扫描共焦显微镜观察可见,细胞质内desmin和α-actin的表达呈红色,C-TnT的表达呈绿色,当前两者分别与C-TnT同时被观察时均可见重叠的部位变成黄色。透射电镜观察到分化细胞呈杆状,胞核卵圆形,位于细胞中央,胞质中可见到平行排列的肌丝、大量的粗面内质网和线粒体,富含糖原和核糖体。RT-PCR结果显示,GATA-4于诱导后7d弱表达,21d表达增强,28d表达减弱。心肌特异性α肌球蛋白重链在诱导后7d不表达,21d弱表达,28d表达明显。结论 bFGF可以诱导BMSCs定向心肌分化,是有效的心肌细胞分化诱导剂。
- 王海萍张雷吕洋吴志刚王浩宇邵素霞
- 关键词：骨髓间充质干细胞碱性成纤维细胞生长因子心肌细胞
