国家高技术研究发展计划(2003AA208224)
- 作品数：3 被引量：6H指数：1
- 相关作者：王希良罗德炎张良艳赵忠鹏陈中伟更多>>
- 相关机构：军事医学科学院上海赛伦生物技术有限公司生物技术有限公司更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- SARS-CoV抗原的纯化与鉴定被引量：1
- 2005年
- 目的纯化灭活SARS-CoV为研制马抗SARS-CoV免疫球蛋白提供抗原.方法将灭活的SARS-CoV悬液超滤浓缩,用Sepharose 4 Fast Flow分子筛和阴离子交换柱层析纯化,用高效液相色谱、SDS-PAGE和电镜观察测定抗原的纯度.结果将01、02和03三批SARS-CoV悬液分别进行11.2倍、12.5倍和25.0倍超滤浓缩,抗原的回收率依次为48.6%、46.3%和55.6%,凝胶过滤层析后抗原的回收率依次为81.6%、79.3%和86.0%.再经阴离子交换梯度层析进一步提高了抗原的纯度和浓度,蛋白的比活性由纯化前的0.11U/μg增加到1.44U/μg.电镜下观察到SARS-CoV抗原颗粒完整,呈圆形或椭圆形状,直径在80～120 nm之间.SDS-PAGE显示主要条带位于Mr43 000～66000之间,经质谱扫描分析确定该成分为Mr46 000.高效液相层析法分析抗原纯度为97.0%.马抗SARS-CoV免疫球蛋白中和抗体效价在1:6 400～1:12 800之间.结论本研究为制备高效价的马抗SARS-CoV免疫球蛋白奠定了基础.
- 张松乐田光周华张良艳王东勇阳幼荣马丽娟王希良
- 关键词：SARS-COV超滤纯化
- 抗SARS-CoV免疫球蛋白F(ab′)_2治疗性抗体对SARS-CoVBJ-01株的中和作用
- 2006年
- 目的观察马抗SARS-CoV免疫球蛋白F(ab′)2治疗性抗体对SARS-CoVBJ-01毒株的中和作用。方法采用细胞病变法(cytopathiceffect,CPE)、四甲基偶氮唑盐(methylthiazolyltetrazoliumassay,MTT)测定马抗SARS-CoV免疫球蛋白F(ab′)2对SARS-CoVBJ-01株的中和作用。结果三批马抗SARS-CoV免疫球蛋白F(ab′)2对SARS-CoVBJ-01株有很好的中和作用,CPE和MTT法测得中和效价分别为1∶6400、1∶6400、1∶12800。结论研制的马抗SARS-CoV免疫球蛋白F(ab′)2对SARS-CoVBJ-01株有很好的中和作用,并且两种方法结果一致,为SARS的治疗提供了可靠的依据。
- 邢丽安玉军石辛甫刘士山赵光宇张良艳罗德炎王希良
- 关键词：SARSSARS-COV中和抗体
- 马抗破伤风毒素免疫球蛋白F(ab′)_2新制备工艺的建立被引量：5
- 2011年
- 目的建立马抗破伤风毒素免疫球蛋白F(ab′)2新的制备工艺。方法制备并纯化破伤风类毒素(Tetanustoxoid,TT)及重组破伤风毒素c片段(Recombinant tetanus toxin C fragment,rTT-C),将TT/rTT-C(2∶1)免疫马匹,待血清抗体效价达3 500 IU/ml时,采血,分离血清,灭活,去除外源蛋白,胃蛋白酶消化制备F(ab′)2,经DEAE柱层析纯化,并对其进行中和抗体效力、安全性和稳定性检测。结果纯化的TT和rTT-C的浓度分别为70 000 Lf/L和4～5 mg/L,纯度分别达95%以上和96%以上;纯化的TAT-F(ab′)2收率为1.4%,纯度达91%以上,中和抗体效价>15 000 IU/ml;其安全性及稳定性均符合《中国药典》三部(2005版)要求,有效期暂定为18个月。结论建立了马抗破伤风毒素免疫球蛋白F(ab′)2新的制备工艺,制备的制品达到甚至超过了国外的质量标准,为马抗血清同类制品的升级换代提供了技术支持。
- 刘永祥赵忠鹏罗德炎陈中伟杨涛王希良高俊杰
- 关键词：破伤风抗毒素
