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细胞色素P450花生四烯酸表氧化酶对肿瘤细胞增殖的影响被引量：2: 2009年; 背景与目的:细胞色素P450(cytochrome P450,CYP)花生四烯酸表氧化酶对内皮细胞具有促进增殖、抑制凋亡的作用。本研究主要探讨CYP表氧化酶对肿瘤细胞增殖的影响,并初步探讨其影响细胞增殖的相关信号转导机制。方法:用重组腺相关病毒(recombinant adeno-associated virus,rAAV)介导CYP花生四烯酸表氧化酶基因CYP2J2(cytochrome P450 2J2)、CYPF87V(cytochrome P450 F87V)和反义CYP2J2基因分别转染A549、Tca-8113、HepG2、Ncl-H4464种肿瘤细胞,采用MTT法、细胞计数法和流式细胞术分析CYP表氧化酶对肿瘤细胞增殖的影响;并用Western blot法检测转染前后Tca-8113细胞中表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)、ERK1/2和Akt磷酸化水平;最后将转染rAAV-CYP2J2、rAAV-CYPF87V、rAAV-antiCYP2J2和rAAV-GFP的Tca-8113细胞分别接种至裸鼠皮下,观察皮下移植瘤的生长情况。结果:转染CYP2J2和CYPF87V后,A549、Tca-8113、HepG2和Ncl-H446细胞的细胞增殖数分别是相应未转染细胞的1.7倍和2.0倍、1.4倍和1.5倍、1.6倍和1.8倍、2.2倍和2.0倍;转染反义CYP2J2阻断细胞自身CYP2J2表达后,上述4种细胞增殖显著减低。流式细胞术结果显示转染CYP表氧化酶基因的肿瘤细胞中S/G2/M期细胞增加了210%。Western blot结果显示,转染CYP2J2基因后,EGFR、ERK1/2和Akt磷酸化水平分别为未转染细胞的2倍、2.3倍和2.4倍,同时PI3K表达水平也上调为未转染细胞的1.9倍;相反,转入反义CYP2J2基因明显抑制这些蛋白的磷酸化和表达。在体皮下移植瘤实验结果显示,转染rAAV-CYP2J2、rAAV-CYPF87V组裸鼠皮下移植瘤出现的时间(分别为5.8d和6.0d)明显较对照组和转染rAAV-GFP组(分别为8.4d和8.6d)短;而转染反义rAAV-CYP2J2组移植瘤生长缓慢,出现时间也明显较长(约10d)。结论:CYP花生四烯酸表氧化酶能促进肿瘤细胞的增殖,其机制可能与激活EGFR、ERK1/2和PI3K/Akt途径密切相关。; 蒋建刚沈桂芬陈琛付向宁汪道文; 关键词：细胞色素P450 花生四烯酸细胞增殖

环氧化二十碳三烯甘油酸对肿瘤细胞增殖的影响被引量：3: 2008年; 背景与目的:环氧化二十碳三烯甘油酸(EETs)由细胞色素P450(CYP)表氧化酶从花生四烯酸合成而来,研究发现,CYP表氧化酶在癌组织中明显高表达,而癌旁正常组织中几乎不表达,并且证实CYP表氧化酶及其代谢产物可能与肿瘤的发生、发展存在密切关系。本研究目的在于研究EETs对肿瘤细胞的促增殖作用及其相关的机制。方法:分别以不同浓度的EETs(8,9-EET、11,12-EET和14,15-EET)作用Tca-8113、A549、Ncl-H446和HepG2肿瘤细胞12、24、48h和72h后,MTT法检测细胞增殖情况。流式细胞仪检测外源性EETs对Tca-8113细胞周期的影响。用选择性抑制剂来阻断细胞增殖的MAPK、PI3K/Akt和PKC细胞信号转导通路,并用Westernblot法检测PI3K/Akt和ERK1/2总蛋白水平和磷酸化水平。结果:与对照组和溶媒组比较,EETs可明显促进肿瘤细胞的生长,并呈明显的浓度依赖性和时间依赖性(P<0.01)。流式细胞仪分析显示,EETs处理后的肿瘤细胞在S-G2/M期的细胞数增多。11,12-EET处理Tca-8113细胞后S期和G2/M期细胞[(49.7±7.5)%vs.(21.0±5.3)%]较对照组明显增多(17.2±9.7)%vs.(4.9±7.3)%],差异有统计学意义(P<0.01)。用EETs培养后肿瘤细胞的MAPK和Akt磷酸化水平显著增加,而且其抑制剂能够阻断EETs诱导的细胞增殖作用。结论:EETs具有促进肿瘤细胞增殖的作用,MAPK和PI3K/Akt细胞转导通路在此过程中起重要作用。; 沈桂芬蒋建刚付向宁汪道文; 关键词：药理学肿瘤细胞信号转导通路

辛伐他汀抑制肿瘤细胞增殖及其可能的机制被引量：2: 2008年; 目的研究辛伐他汀对肿瘤细胞增殖的抑制作用及其可能的机制。方法将U87、Hela、HCT-116（p53＋／＋）和HCT-116（p53-／-）4种肿瘤细胞在不同浓度的辛伐他汀溶液中培养48h，二苯基溴化四氮唑蓝（MTT）法检测肿瘤细胞的增殖情况；将4种肿瘤细胞在100μmol／L的辛伐他汀溶液中培养24、48、72和96h，观察肿瘤细胞的增殖情况；流式细胞仪检测辛伐他汀对4种肿瘤细胞细胞周期的影响；Westernblot法检测p21、ERK1／2、p38、JNK和Akt蛋白的表达以及ERK1／2、p38、JNK和Akt的磷酸化水平。结果与对照组和溶媒组比较，辛伐他汀可明显抑制4种肿瘤细胞的生长，并呈明显的剂量和时间依赖性（P〈0．05）；辛伐他汀使肿瘤细胞停滞于细胞周期的G1期，并且通过p53非依赖性途径上调p21的表达。Westernblot结果显示，辛伐他汀显著上调了p38和JNK的磷酸化水平，但是对信号转导通路中的蛋白激酶ERK1／2和Akt的表达和磷酸化水平并没有明显影响。结论辛伐他汀有显著的抗肿瘤作用，其作用机制可能与促进p21蛋白的表达有关，而p38和JNK也可能在辛伐他汀抑制肿瘤细胞的增殖过程中起着重要作用。; 沈桂芬蒋建刚胡绍先汪道文; 关键词：辛伐他汀信号转导通路肿瘤细胞增殖

转染细胞色素P450表氧化酶基因对TNF-α损伤大鼠内皮依赖性血管舒张反应的保护作用及机制研究被引量：5: 2006年; 目的研究过度表达表氧化酶基因,增加内源性EETs的产生是否对TNF-α损伤大鼠内皮依赖性血管舒张反应具有保护作用,并初步从对血管VCAM-1表达的影响探讨其机制。方法将携带细胞色素P450表氧化酶基因的真核表达载体pCB6质粒导入大鼠体内,2周后经静脉给予TNF-α,6 h后观察去甲肾上腺素预收缩的主动脉血管环对乙酰胆碱的舒张反应,并以western blot 检测血管中VCAM-1蛋白质的表达情况。结果 TNF-α降低了主动脉环对乙酰胆碱的舒张反应, CYP2C11、CYP2J2和CYPF87V基因转染使得这种被TNF-α降低的血管舒张反应增强。TNF-α增加了血管VCAM-1表达,CYP2C11、CYP2J2和CYPF87V基因转染使得这种被TNF-α诱导的VCAM-1表达减少。结论CYP2C11、CYP2J2和CYPF87V基因能提高了血管对舒血管物质的反应性。本研究提示,通过上调体内表氧化酶基因表达水平提高内源性EETs浓度可减轻炎症介导的血管损伤,这为研究动脉粥样硬化的防治提供了新的思路。; 王家宁萧斌汪培华杨仕林汪道文; 关键词：花生四烯酸细胞色素P450表氧化酶肿瘤坏死因子Α 血管细胞粘附分子-1

花生四烯酸细胞色素P450表氧化酶代谢产物EET抑制脂多糖诱导的内皮细胞凋亡被引量：2: 2006年; 目的研究花生四烯酸经细胞色素P450表氧化酶代谢产物一表氧化二十碳三烯酸 (epoxyeicosatrienoic acids,EETs)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的牛主动脉内皮细胞(bovine aortic endothelial cells,BAECs)凋亡的影响。方法原代分离培养BAECs。分别在细胞培养基中加入 8,9-,11,12-,和14,15-EET1 h后,用LPS(100 ng／ml)诱导内皮细胞凋亡。用MTT法检测LPS对 BAECs的毒性作用,再通过细胞形态学(吖啶橙／溴化乙锭染色)和流式细胞仪计数检测其凋亡变化。结果LPS对BAECs的毒性作用呈剂量依赖性和时间依赖性。LPS可明显诱导BAECs凋亡,但8, 9-,11,12-,和14,15-EET干预的BAECs凋亡细胞数分别为(37．03±3．014)％、(33．45±7．918)％和 (35．75±7．858)％明显少于溶媒对照组(47．33±3．154)％。结论这些结果证明了花生四烯酸细胞色素P450表氧化酶代谢产物EETs能明显的抑制LPS诱导的BAECs凋亡。这表明细胞色素P450 表氧化酶可能有保护心血管系统,防止其受到炎症损伤和粥样硬化的作用。; 王勇陈积雄杨仕林汪道文; 关键词：牛主动脉内皮细胞脂多糖凋亡

细胞色素P450表氧化酶对人舌鳞癌细胞Tca-8113裸鼠皮下移植瘤生长的影响: 2009年; 目的:研究细胞色素表氧化酶对在体肿瘤生长的影响。方法:将转染rAAV-CYP2J2、rAAV-CYPF87V、rAAV-antiCYP2J2和rAAV-GFP的Tca-8113细胞,分别接种至裸鼠皮下,观察皮下移植瘤的生长情况,并用免疫组织化学染色分析移植瘤细胞PCNA和CD31分子的表达情况。结果:转染rAAV-CYP2J2、rAAV-CYPF87V明显促进裸鼠皮下移植瘤的生长,并且使移植瘤出现时间(分别为5.8天和6.0天)明显较对照组和转染rAAV-GFP(分别为8.4天和8.6天)短;而转染反义rAAV-CYP2J2组移植瘤生长缓慢,出现时间也明显延长(约9.75天)。免疫组化结果显示,rAAV-CYP2J2、、rAAV-CYPF87V明显促进移植瘤细胞PCNA和CD31的表达,移植瘤微血管密度明显增加。结论:CYP表氧化酶能明显促进在体肿瘤的生长,其机制可能与促进肿瘤血管生成密切相关。; 蒋建刚沈桂芬宁耀贵汪道文; 关键词：细胞色素P450表氧化酶微血管密度

重组腺相关病毒介导的细胞色素P450表氧化酶基因对TNF-α诱导人脐静脉内皮细胞炎症的影响被引量：2: 2006年; 目的研究过度表达细胞色素P450表氧化酶基因引起内源性EETs产生增加是否能抑制由TNF—α诱导的内皮炎症。方法以携带三种不同表氧化酶基因的重组腺相关病毒rAAV- CYP2C11、rAAV—CYP2J2和rAAV—CYPF87V转染人脐静脉内皮细胞,然后再以TNF—α干预,来研究它们对内皮VCAM-1的表达及外周血单核细胞PBMC与内皮细胞粘附的影响。结果TNF-α诱导了 HUVEC中VCAM-1蛋白质的表达,rAAV—CYP2C11、rAAV—CYP2J2能明显抑制TNF-α的这一作用。 TNF-α诱导了PBMC与HUVEC的粘附(100±0．0％ vs 620．1±65．3％),rAAV-CYP2C11、rAAV- CYP2J2能明显抑制TNF-α的这一作用(分别为120．3±33．4％ vs 387．7±27．4％．131．0±28．7％ vs 535．0±69．7％)。结论CYP2C11和CYP2J2基因具有显著的保护内皮细胞、对抗炎症介质介导的内皮损伤的作用。; 王家宁汪璐云汪培华杨仕林汪道文; 关键词：重组腺相关病毒花生四烯酸细胞色素P450表氧化酶血管细胞粘附分子-1

细胞色素P450花生四烯酸表氧化酶在人肿瘤组织及肿瘤细胞系中的特异性表达被引量：2: 2009年; 背景与目的:细胞色素P450花生四烯酸表氧化酶(cytochrome P450 arachidonic acid epoxygenase 2J2,CYP2J2)作为花生四烯酸的新型代谢途径,在人体中的生物学及病理生理学意义还远未被认识和阐明。本研究主要探讨CYP2J2基因在人类肿瘤组织及肿瘤细胞系中的表达及其意义。方法:采用RT-PCR、Western blot和免疫组化法检测CYP2J2在130例不同类型的人癌组织及相应的癌旁正常组织,4例炎性假瘤组织以及8种常见人源肿瘤细胞系和两种非肿瘤细胞系中的表达情况。结果:CYP2J2在78%(101例)的癌组织中特异性高表达,而癌旁正常组织未能检测到CYP2J2表达,而且CYP2J2 mRNA和蛋白表达水平呈高度的相关性(r=0.613,P<0.01)。同样,免疫组化结果分析发现78%肿瘤组织中有CYP2J2表达,而癌旁正常组织及4例炎性假瘤均阴性。此外还发现CYP2J2主要在肿瘤细胞中表达,而周围的炎性细胞及间质组织均无CYP2J2表达。8种肿瘤细胞中均高表达CYP2J2,而非肿瘤细胞系则无CYP2J2表达。结论:CYP2J2在肿瘤细胞中选择性高表达,CYP2J2可能是肿瘤发生发展的一个标志物。; 蒋建刚付向宁陈春莲汪道文; 关键词：细胞色素基因表达肿瘤

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国际科技合作与交流专项项目(2005DFA30880)

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