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钩藤属植物分子鉴定的DNA条形码筛选被引量：8: 2022年; 目的应用分子生物学鉴定技术,筛选出应用于鉴定钩藤属物种的最佳DNA条形码,建立快速、准确、便捷的钩藤属植物鉴定方法。方法从广东、广西等地收集了8个钩藤属物种的叶片、茎枝作为材料,共计44份样品。提取样品总DNA,分别对条形码ITS、matK、psbA-trnH、rbcL、trnL-trnF序列进行扩增、测序、拼接、校对;利用MEGA 7.0分析比对序列特征;基于Taxon DNA计算种内、种间的遗传距离以分析barcoding gap及Best Match、Best Close Match评估DNA条形码的鉴别能力;使用MEGA7.0、Phylosuite等软件构建单条形码及组合条形码的最大似然法(maximum likelihood,ML)、最大简约法(maximum parsimony,MP)、贝叶斯推断法(bayesian inference,BI)系统发育树。结果条形码ITS、matK、psbA-trnH、rbcL、trnL-trn F序列均扩增成功且具有较高的测序成功率,其中psb A-trn H具有最多的变异位点,ITS次之,rbc L最少;Best Match、Best Close Match与Barcoding gap分析结果显示:5个单一条形码中,ITS鉴定钩藤属物种效果突出且具有明显的Barcoding gap,而组合条形码ITS+rbcL序列表现更为优异。基于所有单一条形码构建的系统发育树,ITS序列的物种鉴别成功率最高,能够准确鉴定8个钩藤属物种;基于组合条形码构建的系统发育树,ITS+rbcL序列具有最高的平均节点支持率,且该序列集包含的11个钩藤属物种均能单独聚为一支。结论应用ITS+rbc L的序列组合能够实现钩藤属不同物种的准确鉴定。; 蔡一鸣代江鹏郑雨欣任英毅陈浩明冯婷婷高晓霞朱爽; 关键词：DNA条形码物种鉴定 ITS RBCL 系统发育分析

镰刀菌诱导结香对白木香倍半萜合成酶基因表达与倍半萜含量的影响研究被引量：4: 2015年; 目的研究镰刀菌诱导结香对白木香倍半萜合成酶（sesqui-TPS）表达的影响与倍半萜类化合物含量的动态变化。方法小孔滴注法进行镰刀菌诱导造香实验并割取造香前后12月内7个时间点的结香部位（沉香树脂）,采用实时荧光定量PCR法（q PCR）测定sesqui-TPS基因表达水平,气相色谱-质谱联用（GC-MS）技术分析倍半萜类化合物含量的动态变化。结果镰刀菌诱导白木香形成沉香2~12个月内sesqui-TPS基因相对表达量分别为10.85,0.793 1,6.484,611.4,5 800,4 211;人工诱导2个月前未检出倍半萜类次生代谢产物,4~12个月内共检出14个倍半萜类化合物,其相对百分含量分别为21.40%,25.52%,36.44%,32.40%和55.70%。结论镰刀菌诱导白木香结香过程中sesqui-TPS基因主要在后期响应伤害胁迫,其表达水平对促进倍半萜类成分生物合成具有滞后性,为进一步研究白木香结香过程中功能基因对萜类成分的生物合成途径调控作用奠定基础。; 陈晓东谢明容刘少烽周伟平章卫民高晓霞; 关键词：白木香倍半萜类化合物

3种诱导子对白木香根悬浮培养细胞中2-(2-苯乙基)色酮化合物形成的影响被引量：8: 2013年; 目的研究了3种诱导子(水杨酸、茉莉酸甲酯和酵母汁)对白木香根悬浮培养细胞中色酮类化合物形成的影响。方法向白木香根悬浮培养细胞中添加不同剂量的水杨酸、茉莉酸甲酯和酵母浸出汁,并测定它们对细胞生长及其中2-(2-苯乙基)色酮类化合物形成的影响。结果较低浓度的水杨酸和茉莉酸甲酯均能诱导白木香根悬浮培养细胞中2-(2-苯乙基)色酮化合物的合成,但后者的效果更好;酵母浸出汁对色酮类化合物的产生影响甚微;三者均抑制细胞的生长。结论水杨酸、茉莉酸甲酯能诱导白木香中沉香特征化合物的产生。; 何梦玲何芳孟京兰张宏意高晓霞严寒静; 关键词：茉莉酸甲酯白木香

化学诱导后白木香转录组文库的构建与测序被引量：11: 2013年; 采用改良异硫氰酸胍-CTAB法对5年生白木香树干经化学诱导后1年的各部分组织进行总RNA提取,提取到的总RNA经富集mRNA、打断、构建测序用cDNA文库后用于转录组测序,测序质量较高,Q20高达97.45%,共获得54 685 634条Clean reads,总测序长度达4 921 707 060 nt,经初步组装,获得190 109条Contigs序列,进一步组装,获得83 467条Unigenes序列,总长度为58 569 625 nt,平均长度为702 nt,N50值高达1 120,大于等于3 000 nt的Unigenes有1 691条,占总Unigenes的2.03%,组装质量较高,使白木香的转录组信息得到较好的保存,为进行白木香结香相关的表达谱分析奠定基础。; 吴宏清王磊陶美华高晓霞白玲章卫民; 关键词：白木香化学诱导测序

沉香中苄基丙酮与浸出物含量相关性研究被引量：24: 2012年; 目的:研究白木香结香过程中苄基丙酮与浸出物含量(%)之间的相关性。方法:采用气相色谱法测定样品中苄基丙酮含量。按中国药典(2010年版)一部沉香鉴别项下相关要求测定样品醇溶性浸出物的含量,并进行理化鉴别;应用"小孔滴注法"进行人工造香试验。结果:苄基丙酮浓度在5.780～104.0μg/mL(r=0.9997)及0.07500～28.20μg/mL(r=0.9995)范围内有良好的线性关系;加样回收率为99.9%～101.6%(n=6),RSD=0.65%。沉香商品药材中苄基丙酮与浸出物含量之间不呈正比关系。随着人工造香时间的增加,有些白木香结香部位的醇溶性浸出物和苄基丙酮含量均呈增加趋势;有些白木香结香部位醇溶性浸出物含量增加,而苄基丙酮含量呈下降趋势。结论:气相色谱法测定沉香中苄基丙酮含量操作简便,测定结果准确、重复性好;"小孔滴注法"人工造香技术快速可行,为沉香形成机理研究提供基础。; 高晓霞周伟平钟兆健柳欣晶章卫民吴关庆; 关键词：浸出物

沉香DNA的提取及其ITS2-PCR体系的优化被引量：7: 2015年; 目的:建立沉香的总DNA提取方法及r DNA第二内转录间隔区序列(ITS2)聚合酶链式反应(PCR)扩增体系。方法:分别采用改良的CTAB法、改良的CTAB法联合DNA提取试剂盒法及DNA提取试剂盒法提取沉香总DNA,利用通用引物ITS2P1/ITS2P2扩增r DNA ITS2目的片段,通过正交试验优选沉香的PCR扩增条件并对目的片段进行测序。结果:改良的CTAB法联合DNA提取试剂盒法提取总DNA的A260 nm/A280 nm1.79,质量浓度350 mg·L-1,PCR扩增目的片段产率最高。不同因素水平对沉香ITS2-PCR反应的影响顺序为模板DNA>引物>Taq DNA聚合酶>d NTP。最佳反应体系为20μL体系,DNA模板40 ng,引物0.2 mmol·L-1,d NTP 0.5 mmol·L-1,Taq DNA聚合酶1.5 U。测序获得的目前片段长度230 bp,与Gen Bank中瑞香科沉香属白木香序列相似性100%。结论:CTAB法联合DNA试剂盒法可简单、快速获得高质量沉香总DNA,正交试验可快速获得ITS2目的片段,为沉香的分子鉴定和系统发育分析提供参考。; 刘少烽陈晓东朱爽陈晓颖钟兆健章卫民高晓霞; 关键词：DNA提取 ITS2 聚合酶链式反应

天然沉香中白木香酸含量的高效液相色谱法测定被引量：3: 2016年; 目的建立天然沉香中白木香酸含量的分析方法,研究白木香酸与浸出物含量(%)之间的相关性。方法按《中国药典》(2010年版)一部进行醇溶性浸出物的含量测定和理化鉴别。高效液相色谱法采用CNW Athena C_(18)-WP柱(250mm×4.6mm,5μm),以乙腈-0.1%(体积分数)磷酸水溶液(40∶60)为流动相,流速1.0ml·min^(-1),检测波长217nm,柱温35℃。结果白木香酸在2.000~80.00μg·ml^(-1)(r=0.9999)范围内线性关系良好,平均回收率为96.1%,RSD为3.0%(n=6)。在理化鉴别和浸出物含量合格的情况下,天然沉香中白木香酸与浸出物含量之间呈正比关系。结论高效液相色谱法可准确测定天然沉香中白木香酸的含量,结合白木香酸与浸出物含量之间的相关性,为天然沉香的质量评价提供依据。; 钟兆健樊云飞雷智东潘清灵周欣刘岱琳章卫民高晓霞; 关键词：浸出物

基于ITS2条形码序列鉴定商品沉香基源植物被引量：10: 2015年; 目的在沉香性状、显微和理化鉴别、浸出物含量测定的基础上,通过探讨不同品种间的r DNA TIS2序列差异及系统发育分析,为商品沉香的鉴定提供分子生物学依据。方法以白木香、商品沉香及人工诱导沉香为材料,对其进行醇溶性浸出物测定、性状及显微鉴别,提取总DNA、扩增r DNA ITS2片段并直接测定序列,MEGA5.0软件计算种内种间Kimura 2-parameter（K2P）遗传距离并进行系统发育分析,构建邻接树（NJ）和最大简约树（MP）。结果人工沉香、商品沉香醇溶性浸出物含量均高于10%,性状和显微鉴别均符合《中国药典》（2010年版）一部有关规定。沉香种内平均K2P遗传距离为0-0.003,种间平均K2P遗传距离为0.005-0.023。白木香、人工沉香和商品沉香在系统发育树上聚为一支。结论在沉香性状、显微和理化鉴别、浸出物含量分析的基础上,基于ITS2条形码序列可以准确鉴别沉香基源植物,为商品沉香的鉴定提供分子生物学依据。; 高晓霞刘少烽陈晓东严寒静钟兆健章卫民朱爽; 关键词：ITS2

白木香叶与沉香形成相关的信号分子研究被引量：6: 2013年; 目的应用气相色谱-质谱连用技术结合数据分析对未结香和已结香的白木香树的叶中挥发性成分进行比较。方法 15批白木香(树龄10个月至35年)用三氯甲烷冷浸后超声提取,GC-MS检测,主成分分析(PCA)和正交偏最小二乘判别分析(OPLS-DA)对结果进行判别分析。结果白木香叶中共鉴定出75种挥发性成分,PCA和OPLS-DA进行分类,再用变量重要性投影法挑选得9个对差异贡献最大的潜在标志物;结香的白木香叶中芳香族的量显著降低(P<0.05),萜类成分角鲨烯的量显著升高(P<0.05)。生育酚仅在已结香的白木香叶中检测到。结论未结香和已结香白木香叶挥发性成分存在显著差异,为快速的、非破坏性的沉香药材采收时间及质量评价提供参考依据。; 高晓霞周伟平谢明容陈晓颖郭晓玲章卫民吴关庆; 关键词：结香

甲酸结合不同真菌诱导形成的人工沉香质量评价研究被引量：6: 2016年; 目的：建立气相色谱-质谱（GC-MS）联用技术的沉香指纹图谱,结合多元统计分析评价甲酸结合不同真菌诱导白木香生产人工沉香品质。方法：采用GC-MS联用技术建立40批沉香指纹图谱,使用《中药指纹图谱相似度评价（2004 A版）》软件建立共有模式,计算图谱相似度,标定共有峰。峰面积归一化法计算170～270 min总峰面积与0～100 min总峰面积两区间的比值。正交偏最小二乘法（OPLS-DA）对样品进行分组,变量权重（VIP）结合相关系数（P（corr））筛选差异性组分。自动质谱退卷积定性系统（AMDIS）结合保留指数（RI）对共有组分和差异组分进行鉴定。结果：10批天然沉香指纹图谱相似度为0.821～0.888,30批人工沉香与天然沉香生成的对照图谱相比相似度在0.307～0.960之间。40批沉香按峰面积比值0.65分为3组：天然沉香、人工沉香1和人工沉香2,且全谱碎片信息、共有组分和差异组分相对峰面积的OPLS-DA分析结果一致。10个共有组分和14个差异组分中,白木香醛等对天然沉香的分组呈正相关;愈创木醇等对人工沉香1分组呈正相关;角鲨烯、5,8-二羟基-2-（2-苯乙基）色酮等对人工沉香2分组呈负相关。结论：指纹图谱相似度、两区间总峰面积比值结合多元统计分析结果,可以快速判断人工诱导沉香品质,为沉香药材的全面质量评价提供参考依据。; 樊云飞董雷周欣陈晓颖钟兆健李浩华章卫民高晓霞; 关键词：气相色谱-质谱联用指纹图谱

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国家自然科学基金(81102418)

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