深圳市科技计划项目(200902030)
- 作品数：7 被引量：22H指数：3
- 相关作者：彭全洲王晓玫成志强许静胡锦涛更多>>
- 相关机构：深圳市人民医院暨南大学第二临床医学院更多>>
- 发文基金：深圳市科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 微小RNA-21反义寡核苷酸对宫颈鳞癌SiHa细胞株细胞生物学特性影响的体内外实验研究被引量：7
- 2012年
- 目的探讨体内外微小RNA．21（miR-21）反义寡核苷酸对宫颈鳞癌SiHa细胞株细胞生物学特性的影响。方法miR-21反义寡核苷酸（miR-21-ASO）通过脂质体转染宫颈鳞癌SiHa细胞，即时定量逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）检测miR-21表达情况，采用四甲基偶氮唑盐（MTr）比色法、集落形成实验、流式细胞术等方法探讨抑制miR．21表达对SiHa细胞形态及生物学特性改变的影响。应用免疫组织化学MaxVision法、TUNEL（TdT—mediateddUTPnickendlabeling）细胞凋亡检测试剂盒检测移植瘤细胞增殖活性和凋亡情况。结果miR-21在SiHa细胞株中呈显著高表达，miR-21-ASO可使SiHa细胞中miR-21表达量显著降低（P〈0．05）。MTT法检测结果显示，转染miR-21-ASO后SiHa细胞的生长受到明显抑制（P〈0．05）。阴性对照组的细胞集落形成率为98．3％±2．0％，miR-21抑制组则为55．6％±1．4％，miR-21抑制组的细胞集落形成率受到明显抑制（P〈0．05）。流式细胞术检测显示，阴性对照组和miR-21抑制组的SiHa细胞凋亡率分别为6．7％±1．3％和29．4％±1．7％，miR-21抑制组的细胞凋亡率明显增加（P〈0．05）。裸鼠皮下移植瘤成瘤率，miR-21抑制组与阴性对照组的成瘤比例分别为3／8和6／8（P〈0．05）。裸鼠瘤体的Ki-67阳性指数，miR-21抑制组（42％）比阴性对照组（90％）显著下降。荧光TUNEL凋亡检测显示，miR．21抑制组裸鼠肿瘤细胞凋亡明显增多（P〈0．05）。结论miR-21-ASO可有效抑制宫颈鳞癌SiHa细胞中miR-21表达，影响癌细胞增殖活性，促进癌细胞凋亡，体内抑制SiHa细胞裸鼠移植瘤生长促进其凋亡。
- 王晓玫许静成志强彭全洲胡锦涛高利昆张石芬金红涛
- 关键词：微RNAS寡核苷酸类反义
- 反义miR-21抑制宫颈鳞状细胞癌CaSki细胞系生长体外研究被引量：1
- 2012年
- 目的探讨敲低miR-21表达对宫颈鳞状细胞癌细胞系CaSki增殖活性与凋亡的影响。方法实时荧光定量RT-PCR法检测正常宫颈组织、CaSki细胞转染前后miR-21的表达水平,采用MTT法、流式细胞术等技术检测转染后CaSki细胞增殖活性与凋亡的变化。结果 miR-21在CaSki细胞中表达水平为正常宫颈组织的3.25倍。CaSki细胞中转染反义miR-21(AS-miR-21)可显著抑制其表达。转染后24h、48h、72h、96h,MTT检测提示10nmol与20nmolAS-miR-21转染组中细胞增殖率较对照组明显降低(P<0.05),自48h抑制作用显现,且随着转染浓度增加,抑制作用增强,呈现剂量依赖性。细胞周期检测结果显示AS-miR-21转染组的G0/G1期细胞明显增多,S期细胞减少(P<0.05)。AnnexinⅤ联合PI技术检测细胞凋亡,结果显示AS-miR-21转染组早期凋亡细胞率[(23.40±2.16)%]明显高于空白对照组[(5.1±2.16)%]、阴性对照组[(6.87±0.55)%](P=0.000)。结论 AS-miR-21转染可敲低CaSki细胞中miR-21表达,并有效抑制细胞增殖活性,促进细胞凋亡。
- 王晓玫张石芬高利昆成志强彭全洲胡锦涛许静金洪涛
- 关键词：微RNASCASKI细胞
- 反义miR-21对荷人宫颈鳞癌裸鼠移植瘤生长和凋亡的影响被引量：1
- 2012年
- 目的构建荷人宫颈鳞癌裸鼠移植瘤模型,探讨干扰miR-21表达对移植瘤生长、凋亡的影响。方法将人工合成的反义寡核苷酸ASODN(AS-miR-21)转染SiHa细胞(抑制组),同时设阴性对照组和空白对照组,对数生长期的SiHa细胞分别接种于裸鼠皮下,绘制肿瘤生长曲线并计算肿瘤生长率。当肿瘤体积达0.2 cm3时采用AS-miR-21多点瘤周注射,观察其对移植瘤的影响。应用免疫组化技术、荧光TUNEL检测移植瘤细胞增殖活性和凋亡情况。结果 (1)成功构建人宫颈鳞癌裸鼠皮下移植瘤模型,抑制组、阴性对照组及空白对照组成瘤率分别为37.5%、75.0%、100.0%,瘤体平均体积为(732.80±56.32)mm3、(1228.46±78.53)mm3、(1301.26±80.63)mm3,平均生长率为18.32%、30.71%和32.53%,瘤重为(0.73±0.05)g、(1.26±0.12)g和(1.35±0.25)g,抑制组与阴性、空白对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05);(2)免疫组化显示抑制组裸鼠瘤体Ki67表达显著下降;荧光TUNEL凋亡检测显示抑制组裸鼠肿瘤细胞凋亡率明显增多;(3)注射治疗剂量AS-miR-21两周后观察肿瘤组织局部坏死严重,胞核裂解、消失,凋亡明显增加。结论 AS-miR-21可下调裸鼠人宫颈鳞癌移植瘤中miR-21的表达,抑制移植瘤生长和促进其凋亡。
- 王晓玫许静成志强彭全洲胡锦涛高利昆张石芬
- 关键词：微RNASSIHA细胞裸鼠
- Dual-FISH技术检测原发性肺癌p53基因缺失及其临床意义被引量：1
- 2010年
- 目的 探讨原发性肺癌p53基因缺失情况及其临床意义.方法 应用Dual-FISH技术检测我院2005-2008年收治的41例原发性肺癌组织间期核中p53缺失情况.结果 p53基因缺失与肿瘤分化程度、发病年龄有相关性（OR 值为18.775,95%CI为2.437～144.636;OR值为0.077,95%CI为0.007～0.874;P均〈0.05）,即肿瘤分化程度是危险因子,分化程度越低,发生p53基因缺失的危险性越高.而发病年龄是保护性因子,即年龄越大,发生p53基因缺失的危险性越低.p53基因缺失率为34.2%（14/41）,分化程度好的缺失率17.4%（4/23）低于分化程度差的71.4%（10/14）（P〈0.05）,而与性别、组织类型、肿瘤转移之间无相关性（P均〉0.05）.结论 p53基因缺失与肺癌分化程度、发病年龄密切相关,检测该基因在肺癌中的缺失情况可作为判断肺癌预后的重要生物学指标.
- 成志强王晓玫单军高利昆许静胡锦涛彭全洲李剑王玲
- 关键词：肺癌P53基因遗传学
- 原位杂交检测宫颈活检组织HPV感染的临床意义被引量：3
- 2010年
- 目的探讨原位杂交(ISH)检测宫颈活检组织中人类乳头瘤病毒(HPV)感染对宫颈癌早期诊断的临床意义。方法对128例宫颈活检的石蜡标本,分别行常规检测和ISH-HPV检测。结果①二种方法检测慢性宫颈炎、宫颈上皮内瘤变(CIN)、宫颈鳞状细胞癌(SCC)HPV感染检出率分别为2.5%与8.9%、37.5%与55.0%和66.6%与90.0%,检出率SCC>CIN>慢性宫颈炎,ISH法明显优于常规检测法(χ2=7.5625,P<0.01)。②在所检测的128例宫颈活检组织标本中,21～30岁患者的HPV感染率明显高于其它年龄组。结论慢性宫颈炎、CIN、宫颈鳞状细胞癌与HPV6/11/16/18/31/33密切相关,随着病变程度的加重,HPV感染的检出率明显升高。ISH方法对早期宫颈HPV感染患者在分子病理学水平作出准确、特异、快速的诊断,同时具有细胞阳性定位功能。通过HPV感染的检测,可以积极预警年轻人群中宫颈癌的发生。
- 成志强王晓玫蔡进中单军高利昆许静彭全洲胡锦涛
- 关键词：人类乳头状瘤病毒原位杂交宫颈上皮内瘤变
- microRNA-21调节宫颈鳞癌SiHa细胞中PDCD4的表达研究被引量：7
- 2011年
- 目的探讨microRNA(miR)-21-反义寡核苷酸(ASODN)对宫颈鳞癌SiHa细胞中PDCD4基因表达、细胞增殖与凋亡的影响。方法宫颈鳞癌SiHa细胞分3组,采用LipofectamineTM2000转染试剂,miR-21调控组转染miR-21抑制剂的ASODN,miR-21抑制剂阴性对照的ASODN,空白对照组不转染。Cell Titer和荧光TUNEL分别检测转染前后SiHa细胞增殖和凋亡的变化,流式细胞仪分析细胞周期,实时RT-PCR检测miR-21和PDCD4mRNA水平表达,Western blot检测靶蛋白PDCD4表达。结果 AS-miR-21组与阴性、空白对照组相比,SiHa细胞生长明显抑制,而阴性和空白对照组比较无明显差异;细胞凋亡率分别为(9.7±0.52)%、(3.6±0.17)%和(3.4±0.36)%;细胞周期结果显示AS-miR-21组G0/G1期细胞明显增多,S期细胞减少,与对照组间差异显著(P<0.05);实时RT-PCR结果显示,miR-21表达下降而PDCD4表达升高。Western blot检测结果显示,PDCD4表达AS-miR-21组明显高于空白对照组和阴性对照组(P<0.05)。结论 AS-miR-21可有效抑制miR-21在宫颈鳞癌SiHa细胞中的表达并上调PDCD4基因表达,发挥抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡的作用。
- 王晓玫许静成志强彭全洲胡锦涛高利昆张石芬蔡进中
- 关键词：SIHA细胞MICRORNA-21宫颈鳞癌PDCD4
- 上调miR-143表达对CasKi人宫颈鳞癌细胞系增殖与凋亡的影响被引量：6
- 2010年
- 目的探讨miR-143对CasKi宫颈鳞癌细胞增殖与凋亡活性影响。方法应用荧光定量RT-PCR法检测miR-143在人宫颈鳞癌组织中表达水平,以及miR-143在CasKi细胞株中表达水平与变化;人工合成miR-143模拟体转染CasKi宫颈鳞癌细胞系,采用流式细胞技术、MTT等实验方法探讨上调miR-143表达对CasKi癌细胞增殖活性与凋亡影响。结果宫颈鳞癌组织与宫颈鳞癌细胞株CasKi中miR-143表达水平较正常宫颈组织明显下调,其中2例鳞癌组织未能检测出miR-143表达。miR-143 mimics转染组miR-143表达显著高于空白对照组;MTT检测结果表明miR-143 mimics转染组中细胞增殖抑制明显,且抑制效应自转染48 h开始显现。细胞周期检测结果显示miR-143 mimics转染组G0/G1期细胞明显增多,S期细胞减少,组间差异有统计学意义(P<0.05)。荧光TUNEL检测结果亦显示miR-143 mimics转染组细胞凋亡率增加(9.45±2.31)%,高于阴性对照组(4.03±1.35)%与空白对照组(3.85±1.61)%,组间差异具有统计学意义(P<0.05)。结论上调miR-143表达可抑制宫颈鳞癌细胞增殖活性,影响宫颈鳞癌细胞周期和诱导宫颈鳞癌细胞凋亡。
- 王晓玫高利昆成志强彭全洲胡锦涛许静徐洲稳
- 关键词：宫颈肿瘤鳞状细胞癌MIR-143CASKI细胞
