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国家高技术研究发展计划(2001AA216081)

作品数：18 被引量：100H指数：6
相关作者：王铸钢杨晓程萱陆振虞吕娅歆更多>>
相关机构：军事医学科学院上海第二医科大学上海交通大学更多>>
发文基金：国家高技术研究发展计划国家杰出青年科学基金上海市科学技术发展基金更多>>
相关领域：生物学医药卫生更多>>

文献类型

  • 18篇中文期刊文章

领域

  • 12篇生物学
  • 6篇医药卫生

主题

  • 12篇基因
  • 9篇小鼠
  • 7篇转基因
  • 6篇转基因小鼠
  • 4篇特异
  • 4篇特异性
  • 4篇重组酶
  • 4篇细胞
  • 4篇CRE重组酶
  • 3篇鼠胚
  • 3篇鼠胚胎
  • 3篇特异性表达
  • 3篇胚胎
  • 3篇小鼠胚胎
  • 2篇蛋白
  • 2篇血清
  • 2篇胚胎干细胞
  • 2篇小鼠胚胎干细...
  • 2篇基因剔除
  • 2篇干细胞

机构

  • 7篇军事医学科学...
  • 6篇上海第二医科...
  • 2篇上海交通大学
  • 2篇上海交通大学...
  • 1篇大理学院
  • 1篇北京大学
  • 1篇中国人民解放...
  • 1篇南京大学
  • 1篇中国人民解放...

作者

  • 9篇王铸钢
  • 7篇杨晓
  • 5篇程萱
  • 4篇陆振虞
  • 3篇王龙
  • 3篇毛春明
  • 3篇陆顺元
  • 3篇顾鸣敏
  • 3篇谭晓红
  • 3篇吕娅歆
  • 3篇许勇
  • 2篇王阳
  • 2篇孙岳平
  • 2篇黄翠芬
  • 2篇程竞
  • 2篇谭轶
  • 2篇周江
  • 2篇项佑贵
  • 2篇李西华
  • 2篇王友亮

传媒

  • 3篇生物化学与生...
  • 2篇生物技术通讯
  • 2篇Journa...
  • 2篇中华血液学杂...
  • 2篇生物工程学报
  • 1篇军事医学科学...
  • 1篇细胞生物学杂...
  • 1篇上海第二医科...
  • 1篇中华内分泌代...
  • 1篇中华肝脏病杂...
  • 1篇Scienc...
  • 1篇上海交通大学...

年份

  • 1篇2008
  • 1篇2007
  • 1篇2006
  • 3篇2005
  • 8篇2004
  • 3篇2003
  • 1篇2002
共 18 条 记 录，以下是 1-10
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排序方式：
遗传修饰小鼠胚胎干细胞种系嵌合体小鼠的研制被引量：4
2003年
利用显微注射的方法,分别将三株不同类型的经过遗传修饰的中靶ES细胞注射到C57BL/6J小鼠的囊胚中,通过胚胎移植将注射后的囊胚引入受体小鼠子宫中,分别获得了不同整合度的嵌合体小鼠,将高嵌合度小鼠与C57BL/6J小鼠杂交,对这些仔鼠进行PCR及Southern鉴定的结果表明,三株修饰后的ES细胞均能整合入生殖系,得到了棕褐色子代鼠,表明获得了种系嵌合体小鼠。
程萱周江谭晓红程竞杨晓
关键词：遗传修饰胚胎干细胞显微注射
PCR-based approaches for identification of multi-copy transgene integration sites in mouse genome被引量：2
2006年
Generation of transgenic mice by DNA microinjection has become one of the most important technologies in studying gene function in vivo. Ran- dom integration of transgene often results in inser- tional mutation which may complicate phenotype analysis of transgenic mice and/or create a good opportunity to study the function of endogenous gene. However,the utilization of these potentially valuable resources is hampered due to lack of efficient ap- proaches for rapid identification of multi-copy trans- gene integration sites. Here we propose two PCR-based approaches to identifying trans- gene/genome junction sequences. The efficiency of these two strategies was tested in 9 independent transgenic mouse lines. Among them,the transgene in 8 mouse lines was clearly localized to certain chromosome regions. These rapid and efficient ap- proaches will greatly facilitate the study of insertional mutation due to transgene integration.
ZHAO XudongDANG SuyingLIANG BinLEI XiaCHEN ZhengWANG LongYAN LanzhenSUN HantangFU JiliangFEI JianWANG Zhugang
关键词：转基因插入突变PCR
利用基因诱捕技术进行小鼠基因剔除的初步研究被引量：7
2004年
对利用基因诱捕技术进行小鼠基因剔除做了初步的探索 ,为进一步应用该技术进行小鼠基因功能研究奠定了基础 .利用基因诱捕载体转染小鼠ES细胞 ,获得了 36株neo基因单拷贝整合的诱捕ES细胞 ,其中 14株细胞表达有活性的 β半乳糖苷酶 .将 3株诱捕ES细胞分别经显微注射引入到受体囊胚中 ,再植入假孕母鼠的子宫中使其发育成小鼠 .两株细胞得到了程度不同的嵌合体小鼠 ,其中一株诱捕ES细胞整合至生殖系 .利用质粒拯救实验获得了诱捕载体整合位点附近的基因组序列 ,通过序列比对发现被诱捕的基因可能是一个新基因 .X gal染色结果显示 ,该基因的表达局限于小鼠腹部及肢芽的部位 .
谭晓红程萱毛春明陈光慧杨晓
关键词：基因诱捕小鼠基因剔除
BPOZ基因剔除小鼠模型的建立被引量：1
2004年
BPOZ是在卵巢癌等肿瘤组织中表达下调的细胞生长抑制基因 ,建立BPOZ基因剔除小鼠模型 ,可以为在体研究BPOZ基因的生物学功能及其与肿瘤发生的关系创造条件 .运用生物信息学手段确定小鼠BPOZ基因组序列 ,设计基因剔除策略 ,构建完成了基因剔除载体XpPNT BPOZ .以电穿孔方法将基因剔除载体导入ES细胞 ,用G4 18和Ganciclovoir进行正负筛选 ,获得抵抗克隆 ,PCR和DNA印迹鉴定出正确同源重组的ES细胞克隆 .将同源重组的ES细胞注入小鼠囊胚 ,获得嵌合体小鼠 .嵌合体小鼠与C5 7BL/ 6J小鼠交配后获得Aguoti毛色的小鼠30只 ,其中 15只为BPOZ基因剔除杂合子小鼠 ,阳性率为 5 0 % .在雌雄杂合子交配的后代中获得纯合子小鼠 .初步的表型观察发现BPOZ基因剔除小鼠发育正常 ,有繁殖能力 ,进一步的表型分析工作正在进行之中 .
项佑贵孙霞王龙严兰珍杨桦刘伟许勇徐国江王一费俭傅继梁王铸钢
关键词：基因剔除
PC-1转基因小鼠的建立及其与2型糖尿病发病的关系被引量：4
2005年
目的探讨PC-1基因高表达与肥胖、胰岛素抵抗及2型糖尿病的关系。方法构建pcDNA3.1/PC-1转基因质粒,经显微注射的方法获得G0代转基因小鼠;用PCR、Southern印迹、RT-PCR和Western印迹方法检测PC-1转基因小鼠的基因组整合和组织表达;对转基因小鼠进行腹腔葡萄糖耐量试验(IPGTT)和胰岛素耐量试验(ITT)。结果测序证明克隆的PC-1cDNA序列与GenBank相应序列相比无误,转基因质粒中PC-1插入方向正确;鼠尾基因组DNA PCR和Southern印迹表明共获得8个PC-1转基因阳性的G0代小鼠,分别与野生型C57BL/6J小鼠交配后获得5个F1代PC-1转基因小鼠系;RT-PCR、Western印迹证实该基因在2个单系的骨骼肌和肝组织中有稳定表达;与野生型小鼠相比,转基因阳性小鼠的体重、空腹血糖、IPGTT和ITT结果无明显变化。结论成功构建稳定表达PC-1基因的转基因小鼠系,研究结果表明该基因在相关组织中的高表达不足以触发肥胖、胰岛素抵抗或2型糖尿病的发生。
王毅骆惠均王芳张丽君马志敏孔辉王龙陆振虞王铸钢
关键词：PC-1基因小鼠转基因糖尿病
NUP98-HOXA9融合基因转基因小鼠的建立及乙烷亚硝基脲诱变的研究被引量：4
2004年
目的从整体动物水平阐明NUP98 HOXA9融合蛋白在白血病发病机制中的作用。方法采用分子克隆技术构建含有NUP98 HOXA9的转基因质粒 ,经显微注射建立含有该融合基因的转基因小鼠 ,并对其细胞表型进行分析 ;采用PCR、RT PCR等技术进行转基因整合和表达检测 ;对表型正常的转基因小鼠用乙烷亚硝基脲 (ENU)诱变 ,观察转基因小鼠的表型变化。结果 5个单系的转基因小鼠在骨髓细胞中检出NUP98 HOXA9融合基因的稳定表达 ,但血常规、骨髓象及肝、脾等未见异常改变。ENU诱变后部分转基因阳性小鼠出现类似人类慢性髓系白血病的表现。结论NUP98 HOXA9融合基因产物能在转基因小鼠中表达 ,但不足以诱发白血病 ;
陆顺元顾鸣敏王阳谭轶孙岳平王龙孔辉陆振虞王铸钢
关键词：转基因小鼠染色体畸变白血病
NUP98-PMX1转基因小鼠发生髓系白血病样表型
2004年
目的　在整体动物水平研究NUP98 PMX1融合蛋白的致白血病作用。方法　采用分子克隆技术构建含有NUP98 PMX1的转基因质粒 ,显微注射法建立转NUP98 PMX1基因的小鼠 ,以PCR、RT PCR方法检测融合基因的表达 ;用流式细胞仪检测骨髓细胞表型。结果　转染NUP98 PMX1融合基因的NIH3T3细胞生长加快 ,软琼脂上可形成集落 ,并使裸鼠致瘤。出现病态的 8只NUP98 PMX1转基因小鼠中有 4只发生粒细胞白血病样表型 ,其中 3只表现为人类慢性髓系白血病样表型。结论　NUP98 PMX1融合基因具有致瘤性 ,其表达在髓系白血病的发生中起着极为重要的作用。
王阳顾鸣敏谭轶陆顺元王龙孔辉孙岳平陆振虞陈赛娟王振义王铸钢
关键词：髓系白血病CML骨髓细胞
肝细胞特异性表达Cre重组酶转基因小鼠的建立被引量：17
2004年
目的 构建在小鼠肝细胞中特异表达Cre重组酶的转基因小鼠。 方法 利用聚合酶链反应(PCR)获得小鼠肝细胞特异性启动子——白蛋白启动子,指导Cre重组酶在肝细胞中特异表达。通过受精卵显微注射的方法,将转基因载体导入小鼠受精卵中,获得转基因小鼠。利用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测转基因小鼠中Cre重组酶转录的组织特异性,并将转基因小鼠与Smad4条件基因打靶小鼠进行杂交,利用PCR和Southern Blot进一步检测Cre重组酶在小鼠体内表达的组织特异性及其介导lox P位点之间发生重组的活性。 结果 获得了白蛋白启动子,构建了转基因载体pAlb-Cre。将转基因载体进行显微注射,共注射了837枚小鼠受精卵。PCR检测显示53只子代小鼠中有7只整合了Cre重组酶基因,Southern杂交结果证实共获得6只基因组上整合Cre重组酶基因的首建者小鼠。RT-PCR结果表明其中3只阳性小鼠的子代鼠在肝脏和睾丸中正确转录了外源基因。将在肝脏和睾丸中正确转录了外源基因的两只阳性鼠与Smad4条件基因打靶的小鼠杂交,通过PCR检测发现Cre转基因与Smad4条件基因打靶双阳性的子代鼠在肝脏中特异表达Cre重组酶,并能介导基因组中loxP序列间的基因重组,此结果通过Southern杂交得到了进一步证实。 结论 成功构建了在小鼠肝细胞中特异表达Cre重组酶?
王友亮程萱崔芳程竞吕娅歆杨晓
关键词：肝细胞CRE重组酶转基因小鼠聚合酶链反应
骨保护素(Opg)基因敲除小鼠发生高转换型骨质疏松和动脉钙化(英文)被引量：27
2007年
骨质疏松以及动脉钙化均是危害极大的临床常见病变,骨保护素(OPG)可能是联系两者的分子之一.构建替换型载体pXpPNT-OPG,利用同源重组,将编码前3个蛋白质结构域的小鼠Opg基因组第二外显子序列剔除掉.通过胚胎干细胞(ES)基因打靶获得了正确重组的ES细胞克隆,ES细胞显微注射后获得嵌合体小鼠,交配传代获得杂合子和纯合子小鼠.RT-PCR和蛋白质印迹实验结果显示,纯合子小鼠没有Opg基因的表达.纯合子小鼠骨量丢失明显,骨生物力学指标明显下降,发生严重的骨质疏松,此外,还有50%以上的纯合子小鼠在早期出现动脉中层钙化.小鼠破骨功能亢进,与此同时,成熟成骨细胞数量增加,矿化功能强于野生型.Opg基因缺失小鼠骨中钙和磷大量流失,而血清中水平没有变化,这提示钙磷代谢异常不是OPG缺失导致动脉钙化的原因.对建立的Opg基因敲除小鼠模型进一步深入的研究,将有助于说明动脉钙化和骨质疏松症相互联系的分子机制,为防治骨质疏松症和动脉钙化的并发提供理论基础支持.
许勇杨桦乔建瓯李西华严兰珍王龙徐国江费俭傅继粱王铸钢
关键词：骨质疏松动脉钙化骨转换钙磷代谢
骨关节炎患者血清中基质金属蛋白酶-2、-9的明胶酶谱分析被引量：12
2003年
为探讨基质金属蛋白酶-2、-9在骨关节炎发病中的作用,应用明胶酶谱分析方法研究其在骨关节炎患者血清中的表达水平。实验对象为27例膝骨关节炎患者,对照组为7例外伤骨折患者。结果发现病例组血清中基质金属蛋白酶-2和-9的表达水平均明显高于对照组(P<0.05)。该结果显示基质金属蛋白酶-2和-9可能在骨关节炎的发病过程中均起着重要的作用。
姚俊岩安靓王岩吕娅歆侯宁万海峰毛春明黄敏杨晓
关键词：骨关节炎血清基质金属蛋白酶明胶酶
全选 清除 导出
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