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人肝再生磷酸酯酶2(PRL-2)的原核表达及其鸡卵黄抗体的制备被引量：1: 2004年; 目的 :原核表达人肝再生磷酸酯酶 2 (PRL 2 )与谷胱甘肽S转移酶 (GST)和 6个串联组氨酸 (6×His)的融合蛋白 ,并制备GST PRL 2特异性鸡卵黄抗体。方法 :将人PRL 2cDNA的全长蛋白编码序列 ,克隆入两种原核表达载体pGEX 4T 2和pET2 1a中 ,在大肠杆菌BL2 1中诱导表达融合蛋白。用Glu tathioneSepharose 4B和Ni NTAagarose亲和柱分别纯化目的蛋白。以纯化的GST PRL 2融合蛋白免疫产蛋母鸡制备多克隆抗体 ,应用 6×His PRL 2对抗体进行亲和层析纯化 ,纯化产物用Westernblot进行分析。结果 :得到高表达量的融合蛋白 ,经亲和层析柱纯化后获得较高纯度的GST PRL 2和 6×HisPRL 2融合蛋白。以GST PRL 2融合蛋白免疫鸡得到抗PRL 2的多克隆抗体 ,Westernblot证实 ,经 6×HisPRL 2亲和层析纯化的抗体 ,能够识别 6×His PRL 2和GST PRL 2融合蛋白 ,但不同GST蛋白起反应 ,表明具有较高的特异性。结论 :利用原核表达的人PRL 2融合蛋白制备的抗PRL 2多克隆抗体具有较好的特异性 ,为研究PRL; 郭爱林曹云新王文丁波黄郁强文剑明; 关键词：融合蛋白鸡卵黄抗体

人黑色素瘤特异性抗原基因的克隆及其在原核系统中的表达被引量：2: 2005年; 目的:克隆及表达特异性抗原(PRAME)基因的cDNA片段。方法:从人急性髓细胞白血病细胞系HL60提取总RNA,用逆转录聚合酶链反应(RT PCR)从中扩增出PRAME基因cDNA片段。将PRAME基因cDNA片段插入载体pGEM T easy中,经全自动序列分析仪测序正确后,再克隆至表达载体pGEX4T2中,构建高效表达克隆,并转化大肠杆菌进行表达。结果:1mmol/L异丙基βD硫代半乳糖苷(IPTG)诱导5h,PRAME蛋白表达即达高峰。结论:PRAME基因在极少数正常组织中低表达,而在白血病患者高表达,并编码被自体细胞毒T淋巴细胞识别的抗原,所以该基因有望成为肿瘤免疫治疗的新成员。; 王莉郭爱林秦叔逵李青王琳; 关键词：白血病微小残留病灶基因克隆

人睾丸肿瘤抗原MAGE-E1基因的克隆测序及在原核系统中的表达: 2003年; 目的　扩增及克隆人的MAGE E1基因并利用大肠杆菌进行表达。方法　从人胶质瘤细胞系BT 32 5中提取总RNA ,用RT PCR从中扩增出MAGE E1基因片段。将MAGE E1基因片段插入载体pGEM Teasy中 ,经全自动序列分析仪测序正确后 ,再克隆至表达载体pGEX 4T 2中 ,构建重组表达载体 pGEX 4T 2 MAGE E1,并转化大肠杆菌进行表达。结果　 1mmol/L异丙基 β D 硫代半乳糖苷 (IPTG)诱导 5h ,MAGE E1蛋白表达即达高峰 ,SDS PAGE及凝胶密度扫描分析表明 ,表达出Mr约 4 10 0 0大小的蛋白 ,占菌体总蛋白的 35 %。结论　成功扩增、克隆MAGE E1基因 ,并在大肠杆菌中得到稳定高效表达。; 王莉李青郭爱林郭斌张丰樊代明; 关键词：克隆测序原核系统

RNA干扰MAGEA3对人肝癌细胞凋亡的影响被引量：1: 2006年; 目的:探讨小发夹RNA(shRNA)载体介导抑制人肝癌细胞中黑色素瘤相关抗原A3(MAGEA3)的表达和对肝癌细胞凋亡的影响。方法:构建pS ilencer-MAGEA3短发夹状siRNA真核基因表达载体,采用脂质体介导的方法将其转染到人肝癌细胞(m el-ed1)中,用W estern印迹法、RT-PCR检测MAGEA3基因在肝癌细胞中的表达;通过原位末端标记TUNEL法、DNA片段化及Annexin V/PI双标记法检测,观察其对肝癌细胞凋亡的影响。结果:成功构建pS ilencer-MAGEA3短发夹状siRNA真核基因表达载体,转染特异性小发夹RNA质粒表达载体的MEL-ED1细胞中MAGEA3基因表达显著抑制(90%)。与对照组比较,pS ilencer-MAGEA3转染组肝癌细胞培养48 h后,DNA片段化检测出“DNA ladder”、TUNEL法显示细胞典型凋亡特征,Annexin V/PI双标检测转染组细胞凋亡率为21.41%±1.98%,明显高于pS ilencer-neo空载体转染组和未转染组(P<0.01)。结论:MAGEA3小发夹RNA质粒载体可显著抑制MEL-ED1细胞中的MAGEA3基因的表达,促进肝癌细胞的凋亡,MAGEA3基因具有抑制凋亡的作用。该研究为应用RNA i进行肿瘤的基因治疗提供了实验依据。; 李文瑜郭爱林杨素清胡少为文剑明; 关键词：RNA干扰肝肿瘤细胞凋亡

PRL-2基因转染对肝细胞增殖及细胞周期的影响: 2007年; 目的:研究PRL-2基因对肝细胞增殖和细胞周期的影响。方法:采用脂质体转染的方法将重组质粒稳定转染至正常永生化肝细胞系CL1中,G418筛选阳性克隆。应用实时荧光定量聚合酶链反应、Western印迹和免疫组化分析PRL-2在阳性细胞的表达及蛋白定位,MTT法检测细胞的群体倍增时间,流式细胞仪检测细胞周期变化,Western印迹分析细胞周期素A、D1、E以及周期蛋白依赖激酶抑制因子p16、p21WAF1及p27Kip1的变化,实时荧光定量聚合酶链反应检测p21WAF1 mRNA的变化。结果:成功构建PRL-2真核表达载体pcDNA3-PRL-2。脂质体转染细胞经过G418筛选后,获得稳定表达PRL-2的细胞亚系PRL-2-CL1。经实时荧光定量PCR、Western印迹和免疫组化证实,PRL-2-CL1细胞系PRL-2基因及蛋白表达水平高于对照组,流式细胞仪检测细胞周期S期细胞比例明显增高,MTT法检测细胞群体倍增时间缩短。Western印迹及实时荧光定量聚合酶链反应显示p21WAF1在转染后较对照组明显降低,细胞周期素A、D1、E及p16、p27Kip1无明显变化。结论:重组PRL-2真核表达载体构建正确,并在永生化肝细胞中获得稳定、高效表达。PRL-2基因具有促进细胞增殖的作用,这种作用与其降低p21WAF1蛋白含量相关。; 程超郭爱林巫国勇吴伟康罗红鹤钟佛添马俊何伟玲; 关键词：肝细胞蛋白质酪氨酸磷酸酶真核表达载体细胞周期

睾丸肿瘤抗原MAGE-E1基因片段的克隆及其在大肠杆菌中的表达被引量：1: 2003年; 目的 :克隆及表达人胶质瘤特异性抗原MAGE E1基因片段。方法 :从人胶质瘤细胞系BT 32 5提取总RNA ,用RT PCR从中扩增出MAGE E1基因片段。将MAGE E1基因片段插入载体pGEM Teasy中 ,经全自动序列分析仪测序正确后 ,再克隆至表达载体 pGEX 4T 2中 ,构建重组表达载体pGEX 4T 2 MAGE E1,并转化大肠杆菌进行表达。结果 :用 1mmol/L异丙基 β D 硫代半乳糖苷 (IPTG)诱导 5h ,MAGE E1蛋白的表达即达高峰。SDS PAGE及凝胶密度扫描分析表明 ,表达出Mr 约 4 10 0 0大小的蛋白 ,占菌体总蛋白的 35 %。结论 :该基因片段的高效表达为进一步制备其抗体 ,以及制备肿瘤疫苗奠定了基础。; 王莉李青郭爱林张丰郭斌樊代明; 关键词：睾丸肿瘤抗原基因克隆大肠杆菌

黑色素瘤相关性抗原E1基因的克隆与测序被引量：2: 2003年; 目的　克隆表达人黑色素瘤相关性抗原MAGE E1片段 ,以便研究其对神经系统恶性肿瘤的生物学作用。方法　从人胶质瘤细胞系BT 32 5中提取mRNA ,用RT PCR法从中扩增出MAGE E1片段 ,采用DNA重组技术将其克隆于 pGEM TEasy载体中并测序。结果　RNA体外扩增得到的片段为 4 0 0bp ,PGEM MAGE E1经酶切鉴定正确 ,测序结果与Genebank比较完全相同。; 王莉郭斌郭爱林李青孙博樊代明; 关键词：黑色素瘤克隆测序

肿瘤转移抑制基因KiSS-1在乳腺癌脑转移患者的表达及临床意义被引量：7: 2005年; 目的转移抑制基因KiSS-1在多种肿瘤的浸润转移中起着重要的作用。但该基因与乳腺癌脑转移的关系仍很不清楚。本研究检测了乳腺癌原发灶和脑转移灶中KiSS-1基因的表达并探讨其临床意义。方法选择2002年6月￣2004年6月行乳腺癌脑转移病灶切除的患者12例,应用实时荧光定量PCR检测乳腺癌原发灶和转移灶中KiSS-1基因mRNA的表达,应用Westernblot检测KiSS-1蛋白的表达,并进一步应用免疫组化进行验证。结果实时荧光定量PCR显示脑转移标本KiSS-1mRNA表达仅为原发灶的1/10,与原发灶比较有显著差异(P<0.01),Westernblot检测显示脑转移灶KiSS-1蛋白较原发灶明显减弱,免疫组化显示KiSS-1在原发灶中表达率明显低于原发灶。结论KiSS-1基因在乳腺癌脑转移中具有转移抑制作用,可能在乳腺癌脑转移治疗中发挥作用。; 邹志军郭爱林周清文剑明曾爱华; 关键词：脑转移瘤乳腺肿瘤肿瘤转移抑制基因定量RT-PCR

蛋白酪氨酸磷酸酯酶4A2基因的克隆、表达及活性鉴定: 2007年; 【目的】获取人蛋白酪氨酸磷酸酯酶4A2(PTP4A2)基因并高效表达纯化,对于产物的体外活性进行测定。【方法】用RT-PCR技术,从肝癌细胞系HepG2的总RNA中,获得编码PTP4A2基因功能片段的DNA。测序后,通过酶切亚克隆至表达载体pGEX-4T-2,构建重组表达载体,并导入大肠杆菌E.coliBL21中,IPTG诱导表达重组的GST融合蛋白。对重组融合蛋白过谷胱甘肽琼脂糖柱进行纯化,western印记进行鉴定,质谱检测蛋白分子量。通过其对底物磷酸多肽的去磷酸化反应,鉴定其活性。【结果】获得编码肝癌细胞PTP4A2(全长氨基酸)的基因序列,测序结果与已发表的基因序列相一致。重组GST融合蛋白经western分析,在相对分子质量Mr=45000处,有特异的蛋白条带。重组蛋白经谷胱甘肽琼脂糖柱进行纯化后,得到了高纯度的融合蛋白,质谱检测其分子量为45470.6。底物多肽去磷酸化反应表明纯化产物具有较强活性。【结论】成功克隆人PTP4A2基因,并在E.coliBL21中高效表达,亲和层析后获得高纯度GST融合蛋白,质谱检测分子量与预期结果一致,纯化产物具有蛋白磷酸酯酶活性。; 程超郭爱林巫国勇吴伟康罗红鹤钟佛添; 关键词：基因克隆纯化质谱

EGFR抑制剂ZD1839治疗肿瘤进展被引量：1: 2005年; 随着分子生物学技术发展以及对癌症发病机制的深入研究,分子靶向药物研究发展迅速。最近几年作用于EGF家族膜受体的药物越来越多,并进入临床研究阶段,且疗效显著。现综述EGFR抑制剂ZD1839(Iressa)的临床发展现状,并推断该药物对于靶组织的基本效应、作用机制及对未来临床药物研究的意义。; 王莉秦叔逵; 关键词：喹唑啉类蛋白酪氨酸激酶抗肿瘤药 ZD1839

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