国家自然科学基金(39970791)
- 作品数：4 被引量：4H指数：1
- 相关作者：周曾同杨雯君曹谊林周海文刘德莉更多>>
- 相关机构：上海第二医科大学附属第九人民医院上海第二医科大学上海交通大学医学院附属第九人民医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金上海市教委科研基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 体外培养口腔黏膜角化细胞生物学的特性
- 2003年
- 目的一个稳定的人类正常口腔黏膜角化细胞体外培养体系对于研究组织工程化口腔黏膜构建及口腔黏膜上皮癌变及阻断有重要意义。研究体外培养的人正常口腔黏膜角化细胞的细胞生物学特性。方法通过测定细胞生长曲线及克隆形成率了解细胞生长基本规律及其增殖能力,并通过流式细胞仪检测细胞染色体倍性。结果细胞接种后第1～3天为静止生长期,第5～10天处于对数生长期,第12天后进入平台期。倍增时间为24～48h;接种密度为200/cm2时,培养细胞克隆形成率为0.979%。经流式细胞仪检测细胞染色体倍性结果表明原代及传代细胞均为二倍体细胞。结论体外连续培养的口腔黏膜角化细胞为正常上皮细胞,增殖能力良好。
- 周海文周曾同商庆新曹谊林
- 关键词：生物学特性细胞体外培养角蛋白细胞细胞生长
- 脂质体介导端粒酶基因转染人口腔黏膜角化细胞的实验研究被引量：1
- 2009年
- 目的:将端粒酶基因转染入人正常口腔黏膜角化细胞,观察人端粒酶反转录酶(hTRT)的表达情况。方法:采用脂质体LipofectAMINE 2000与转铁蛋白共同将含有hTRT基因的pEGFP-hTRT质粒转染人正常口腔黏膜角化细胞,经荧光显微镜、激光共聚焦显微镜观察荧光,并进行流式细胞仪检测转染效率,采用RT-PCR检测转染细胞中外源性hTRT的表达,并经G418筛选观察其稳定表达情况。结果:LipofectAMINE 2000与转铁蛋白共同将pEGFP-hTRT转染入人正常口腔黏膜角化细胞,转染率为15.34%,转染细胞表达外源性hTRT。结论:脂质体LipofectAMINE 2000与转铁蛋白成功介导含有端粒酶基因的pEGFP-hTRT质粒转染人口腔黏膜角化细胞。
- 周海文杨雯君王克敏周曾同
- 关键词：端粒酶脂质体基因转染
- 重组端粒酶pEGFP-hTRT质粒的构建被引量：3
- 2003年
- 目的 构建具有绿色荧光蛋白报道 (GFP)基因的端粒酶真核质粒载体 ,为转染细胞、延长细胞寿命提供基础。 方法 酶切含人端粒酶逆转录酶 (h TRT)基因的 p GRN14 5质粒获取 h TRT片段 ,插入经酶切及磷酸化处理的 GFP载体 p EGFP- C1,形成 8.1kb质粒 ,经 Hind 、Not 酶切电泳筛选、鉴定并测序。 结果 经酶切电泳分析得到3.4 kb及 4 .7kb大小的两片段 ;测序结果显示接头两端序列正确。 结论 重组端粒酶 p EGFP- h TRT质粒的成功构建 ,可用于细胞转染 ,对进一步研究组织工程种子细胞的衰老问题具有重要意义。
- 周海文周曾同杨雯君刘德莉李卿胡洪亮刘伟崔磊曹谊林
- 关键词：端粒酶重组质粒绿色荧光蛋白
- hTRT基因荧光表达载体在真核细胞中的表达
- 2010年
- 目的研究具绿色荧光蛋白报道系统的端粒酶基因真核质粒载体在真核细胞中的表达情况。方法用Lipo-fectAMINE 2000介导重组端粒酶pEGFP-hTRT质粒转染293细胞及人正常口腔黏膜细胞,经荧光显微镜、激光共聚焦显微镜观察荧光表达并进行流式细胞仪检测转染效率,采用RT-PCR检测转染细胞中外源性hTRT的表达。结果质粒在293细胞及人正常口腔黏膜细胞中正确表达,外源性端粒酶在细胞中表达。293细胞及人正常口腔黏膜角化细胞转染效率分别为34.74%和6.88%。结论 hTRT基因荧光表达载体在真核细胞中表达,便于观察转染情况,对研究组织工程种子细胞的衰老问题具有重要的意义。
- 周海文杨雯君刘德莉刘伟周曾同
- 关键词：端粒酶绿色荧光蛋白基因转染质粒
