广东省社会发展攻关项目(2003C33808)
- 作品数：14 被引量：65H指数：6
- 相关作者：曾园山黄文林李海标郭家松王俊梅更多>>
- 相关机构：中山大学昆明医学院南方医科大学更多>>
- 发文基金：广东省社会发展攻关项目国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- NT-3基因修饰施万细胞促进神经干细胞体外分化为神经元样细胞被引量：11
- 2005年
- 目的观测神经营养素-3(NT-3)基因修饰施万细胞(SCs)对神经干细胞体外分化为神经元样细胞的影响。方法神经干细胞(NSCs)分别与NT-3基因修饰SCs(NT-3-SCs)、LacZ基因基因修饰SCs(LacZ-SCs)和SCs在体外共培养,7d后用免疫组化方法观测NSCs的分化并计算其中神经元样细胞的分化率。结果NSCs在体外可分化为神经元样细胞(NF阳性)和神经胶质样细胞(GFAP阳性),与未基因修饰的SCs相比,NT-3-SCs能更有效地提高神经元样细胞的分化率,而LacZ-SCs与SCs没有明显区别。结论NT-3-SCs能促进NSCs向神经元样细胞分化。
- 郭家松曾园山李海标黄文林刘然义
- 关键词：干细胞神经元样细胞
- NT-3基因修饰许旺细胞与神经干细胞联合移植促进大鼠全横断脊髓受损伤神经元的存活及其轴突再生被引量：9
- 2005年
- 目的探讨神经营养素-3基因修饰许旺细胞(NT-3-SCs)与神经干细胞(NSCs)联合移植对大鼠因脊髓全横断而受损伤的神经元存活及其轴突再生的作用。方法将NT-3-SCs及LacZ报告基因修饰SCs(LacZ-SCs)与NSCs联合移植到全横断性脊髓损伤处,60 d后在脊髓横断处尾侧注射荧光金(FG)进行逆行标记。第67天,取材进行组织学检测大脑皮质体感区、红核及脊髓横断处头侧FG标记神经元;大脑皮质体感区、红核和脊髓背核内存活的神经元以及脊髓损伤处再生的轴突。结果大脑皮质体感区、红核及脊髓L1背核内存活的神经元由多到少依次为NT-3-SCs与NSCs联合组、LacZ-SCs与NSCs联合组和实验对照组。NT-3-SCs与NSCs联合组和LacZ-SCs与NSCs联合组的大脑皮质体感区、红核和脊髓横断处头侧有FG标记神经元;脊髓横断处及其附近组织有5-HT、CGRP和SP阳性神经纤维。结论NT-3-SCs与NSCs联合移植能够促进脊髓全横断损伤后神经元的存活以及轴突再生。
- 郭家松曾园山李海标黄文林陈穗君
- 关键词：神经营养素-3许旺细胞神经干细胞神经元存活
- 施万细胞和L-NNA对脊髓半横断后脑干红核神经元存活的影响被引量：3
- 2004年
- 目的 探讨移植施万细胞 (SCs)和应用一氧化氮合酶抑制剂L 硝基精氨酸 (L NNA)能否促进脑干红核受损伤的神经元存活。 方法 2 0只成年SD雌性大鼠分为 :对照组、SCs组、L NNA组和SCs +L NNA组。在胸11脊髓段半横断后立即在损伤处植入SCs,术后腹腔注射L NNA。 结果 脊髓半横断后 30d ,对照组和L NNA组大鼠受损伤侧红核的神经元密度明显降低 ,但两组间无明显差异 ;两组受损伤侧红核神经元的NOS表达阴性。SCs组和SCs +L NNA组大鼠受损伤侧红核的神经元密度明显增加 ,两组间无显著差异 ;两组受损伤侧红核神经元NOS表达也呈阴性。 结论 移植的SCs能够促进受损伤的红核神经元存活。NOS可能不参与影响受损伤红核神经元的存活过程 ,因而L NNA对受损伤红核神经元的存活没有作用。
- 陈茜曾园山张伟陈穗君
- 关键词：脊髓半横断L-硝基精氨酸红核神经元存活
- 人神经营养素-3受体TrkC基因重组腺病毒载体的表达和生物学活性检测
- 2006年
- 目的探讨人神经营养素-3受体TrkC基因重组腺病毒载体(Adeno-TrkC)在神经干细胞内的表达及其对神经干细胞的生物活性作用。方法用RT-PCR检测Adeno_TrkC感染的293细胞的TrkCmRNA含量。用免疫细胞化学和Westernblotting检测Adeno-TrkC感染的神经干细胞表达TrkC受体蛋白。在体外培养条件下,观察人神经营养素-3(NT-3)对感染了Adeno-TrkC的神经干细胞分化为神经元样细胞和星形胶质样细胞的影响。结果在Adeno-TrkC感染的293细胞和神经干细胞中检测到TrkCmRNA和TrkC受体蛋白,且表达产物和其配体NT-3结合后能使体外培养的神经干细胞更多地分化为神经元样细胞,分化率达到55.2%,均高于其他对照组。结论Adeno_TrkC能在神经干细胞内表达TrkC受体蛋白,这种TrkC受体蛋白具有促进神经干细胞分化为神经元样细胞活性的作用,这为进一步应用NT-3和TrkC联合进行基因治疗中枢神经损伤研究奠定了基础。
- 王俊梅曾园山黄文林熊轶王延华
- 关键词：TRKC重组腺病毒WESTERNBLOTTING
- 人神经营养素-3受体基因的扩增及其重组腺病毒载体的构建
- 2005年
- 【目的】构建人神经营养素-3(neurotrophin-3,NT-3)受体(即酪氨酸蛋白激酶受体C,tyrosineproteinkinaseC,TrkC)基因重组的腺病毒表达载体。【方法】从人脑组织mRNA中扩增TrkC基因全长cDNA,定向克隆于穿梭质粒pShuttle中,获得一个带有CMV启动子的表达盒。再将表达盒与腺病毒骨架DNA(Adeno-XviralDNA)体外连接,形成重组腺病毒质粒(pAd-TrkC)。用pAd-TrkC转染人胚肾293细胞后包装成有感染能力的重组腺病毒颗粒(Adeno-TrkC)。【结果】TrkC基因RT-PCR扩增产物为2478bp。Adeno-TrkC经PCR鉴定为正确重组子。【结论】应用体外连接法已构建了人TrkC重组腺病毒表达载体,这为进一步应用NT-3进行基因治疗中枢神经损伤奠定了基础。
- 王俊梅曾园山刘然义吴立志薛刚黄嘉凌黄必军黄文林
- 关键词：基因克隆重组腺病毒
- 施万细胞移植促进大鼠脊髓全横断损伤后大脑皮质锥体神经元和红核神经元的存活被引量：6
- 2004年
- [目的]探讨施万细胞移植对大鼠脊髓全横断损伤后大脑皮质感觉运动区神经元和脑干红核神经元存活的影响。 [方法]大鼠脊髓全横断损伤后移植吸附施万细胞的胶原或明胶,术后3个月计数大脑皮质感觉运动区锥体神经元和脑干红核神经元密度以及红核体积。同时以单纯移植胶原或明胶或不移植物体的脊髓损伤大鼠为对照。[结果]脊髓全横断损伤后,大脑皮质感觉运动区锥体神经元密度和脑干红核神经元密度明显较正常大鼠相应区域内的神经元密度降低;移植施万细胞的两个组(胶原施万细胞组和明胶施万细胞组)上述两个区域的神经元密度较未移植施万细胞的3个组(对照组,胶原组和明胶组)高,差异有统计学意义;而移植施万细胞的两个组之间比较或未移植施万细胞的3个组之间比较,上述区域的神经元密度无显著性差异。 [结论]脊髓全横断损伤可导致大脑皮质感觉运动区锥体神经元和脑干红核神经元发生死亡,施万细胞移植能够促进脊髓损伤后大脑皮质感觉运动区锥体神经元和脑干红核神经元的存活。
- 吴立志曾园山丁英郭家松李海标
- 关键词：施万细胞红核神经元
- 神经干细胞与NT-3基因修饰雪旺细胞联合移植促进全横断脊髓损伤大鼠功能修复的实验研究被引量：21
- 2005年
- 目的:探讨神经干细胞(NSCs)与神经营养素-3(NT-3)基因修饰雪旺细胞(SCs)联合移植对全横断脊髓损伤大鼠的后肢运动及神经传导功能修复的作用。方法:将NSCs与NT-3基因修饰SCs或未基因修饰SCs联合移植,或NSCs单独移植到大鼠全横断性脊髓损伤处,60d后进行爬网格测验和BBB评分检测运动功能。第67d,进行皮质运动诱发电位(CMEP)和皮质感觉诱发电位(CSEP)检测脊髓的神经传导功能。结果:脊髓损伤大鼠后肢的运动功能及CMEP和CSEP的修复程度依次为NSCs与NT-3基因修饰SCs联合移植组,NSCs与未基因修饰SCs联合移植组,NSCs单独移植组和实验对照组。结论:NSCs与NT-3基因修饰SCs联合移植能够促进脊髓损伤后大鼠的后肢运动及神经传导功能的修复。
- 郭家松曾园山李海标黄文林李晓君刘甘泉李晓滨
- 关键词：全横断脊髓损伤神经干细胞雪旺细胞感觉诱发电位CSEP
- 一种快速、经济、省时的施万细胞体外培养和纯化方法被引量：6
- 2007年
- 目的探讨一种快速、简单、经济的施万细胞(SCs)培养和纯化方法,为SCs体内移植研究提供稳定及可靠的细胞来源。方法选用SD乳鼠,取坐骨神经和臂丛神经,用单细胞双酶消化法和半植块单酶消化法培养SCs。结果用同样多的组织材料,半植块单酶消化法所获得的SCs比单细胞双酶消化法所获细胞至少多两倍,省时40min。免疫组织化学染色显示,获得的施万细胞96%以上呈S-100阳性。结论用半植块单酶消化法培养SCs,可以在短时间内获得足够数量和足够纯度的SCs。
- 张雪宝曾园山陈穗君
- 关键词：施万细胞细胞培养
- 腺病毒介导神经营养素-3基因转染施万细胞被引量：6
- 2004年
- 【目的】构建神经营养素-3(NT-3)基因转染的施万细胞。【方法】NT-3基因重组腺病毒(AdvNT-3)扩增、纯化和测定后,转染体外培养的施万细胞(SCs)。用免疫细胞化学和ELISA方法分别检测NT-3基因转染SCs的NT-3表达及培养液中NT-3的含量。【结果】实验中获得的AdvNT-3中外源基因序列与大鼠NT-3的DNA序列完全一致,与未基因转染SCs相比,NT-3基因转染SCs的NT-3阳性增强,培养液中NT-3含量增高。【结论】通过腺病毒介导可以获得NT-3过量表达的基因转染SCs。
- 郭家松曾园山黄文林刘然义吴立志胡金家李海标
- 关键词：腺病毒神经营养素-3基因转染施万细胞NT-3SCS
- NT_3基因修饰施万细胞促进移植的神经干细胞在损伤脊髓内分化为神经元样细胞被引量：5
- 2005年
- 目的探讨神经营养素-3(NT-3)基因修饰施万细胞(SCs)对植入全横断性脊髓损伤处的神经干细胞(NSCs)分化为神经元样细胞的影响。方法将NSCs单独移植或与NT-3基因修饰SCs、LacZ基因修饰SCs和SCs联合移植到全横断性脊髓损伤处,67 d后用免疫组织化学方法观测NSCs的分化,并计算其中神经元样细胞的分化率。结果NSCs在损伤脊髓内可分化为神经元样细胞和神经胶质样细胞,与未基因修饰的SCs的作用相比,NT-3基因修饰的SCs能更有效地提高NSCs向神经元样细胞的分化率,而LacZ基因修饰的SCs与未修饰SCs没有明显区别。结论NT-3基因修饰SCs能促进NSCs在损伤脊髓内向神经元样细胞分化。
- 郭家松曾园山李海标黄文林
- 关键词：神经干细胞神经营养素-3神经元样细胞脊髓损伤
