国家自然科学基金(39994013)
- 作品数：2 被引量：5H指数：1
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- 相关机构：中南大学湘雅三医院中南大学中国预防医学科学院更多>>
- 发文基金：卫生部临床学科重点项目国家自然科学基金更多>>
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- 经hCTLA4-Ig基因转染的猪胰岛细胞在小鼠体内的存活与功能状况研究
- 2007年
- 目的研究将人细胞毒T淋巴细胞相关抗原4免疫球蛋白(hCTLA4-Ig)基因转染至猪胰岛细胞后,再将其移植至小鼠体内的存活及功能状况。方法采用腺相关病毒载体(AAV)介导hCTLA4-Ig基因体外转染新生猪胰岛细胞(NIPs),再将转基因的NIPs移植至构建了人免疫系统的SCID糖尿病小鼠左肾被膜下。逆转录聚合酶链(RT-PCR)反应和免疫荧光染色法检测转染后hCTLA4-Ig基因的表达状况;观察小鼠移植转基因NIPs后的生存时间;移植物免疫组织化学分析及酶联免疫(ELISA)法测定受者血清中细胞因子的水平。结果NIPs经转染后,可检测到hCTLA4-Ig基因及其蛋白表达,且葡萄糖刺激胰岛素释放试验与未转染的对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05);糖尿病小鼠经转基因的NIPs移植后,生存时间及血糖维持正常的平均时间分别为(72.5±30.6)d和(59.1±24.0)d,较未转染的对照组(26.9±6.9)d和(12.7±3.3)d显著延长(P<0.01);免疫组织化学染色检测移植后不同时间(15、30、90d)的移植物组织,可见转基因细胞移植部位有完整的胰岛细胞,而对照组胰岛细胞破坏、消失,周围可见较多的炎性细胞浸润;且转基因细胞移植的小鼠血清白细胞介素2(IL-2)、γ干扰素(IFN-γ)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的水平明显低于对照组(P<0.05)。结论AAV介导hCTLA4-Ig基因体外转染猪胰岛细胞后再移植至受者体内,可提高受者的免疫耐受水平,延长胰岛细胞在异种受者体内的存活时间,而胰岛细胞的内分泌功能不受明显影响。
- 莫朝晖王维刘涛曾秋华吴小兵邢晓为金萍卢光琇
- 关键词：基因转移技术胰岛免疫耐受
- AAV体外介导hCTLA4-Ig在新生猪胰岛细胞中的表达与生物学活性被引量：5
- 2007年
- 目的:探讨AAV-hCTLA4-Ig体外感染猪胰岛细胞后,hCTLA4-Ig基因的表达能力及生物学活性。方法:腺相关病毒载体(AAV)介导hCTLA4-Ig体外转染新生猪胰岛细胞(NIPs),用RT-PCR和免疫细胞化学法检测胰岛细胞内hCTLA4-Ig mRNA及蛋白质水平的表达。转染后的新生猪胰岛细胞与人淋巴细胞共孵育,通过ELISA法检测培养基中IL-2,IFN-γ,TNF-α细胞因子水平的变化。并观察转染组与对照组葡萄糖刺激后的胰岛素释放反应。结果:转染组NIPs可检测到hCTLA4-Ig基因及蛋白表达;与人淋巴细胞共孵育后IL-2,TNF-α,IFN-γ浓度明显低于对照组(P<0.01);且葡萄糖刺激胰岛素释放反应与对照组无明显差异(P>0.05)。结论:AAV-CTLA4-Ig体外转染的胰岛细胞能够表达具有生物学活性的hCTLA4-Ig,可抑制T细胞激活,而胰岛细胞生理功能不受影响。
- 莫朝晖王维刘涛曾秋华吴小兵谢艳红
- 关键词：CTLA4-IG基因转染
