国家自然科学基金(30500539)
- 作品数：3 被引量：5H指数：2
- 相关作者：王延洲梁志清徐惠成刘晓芳史常旭更多>>
- 相关机构：第三军医大学西南医院第三军医大学第三军医大学第一附属医院更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- 肌源性干细胞治疗压力性尿失禁的实验研究被引量：2
- 2007年
- 目的探讨肌源性干细胞(muscle-derivedstemcells,MDSCs)移植至压力性尿失禁(stressurinaryinconti-nence,SUI)大鼠近端尿道后体内形态、分布以及尿动力学变化,为压力性尿失禁的干细胞移植治疗提供理论基础。方法采用坐骨神经离断法建立压力性尿失禁模型,改良差速贴壁技术分离MDSCs,pEGFP-N1转染作标记,注射至SUI大鼠近端尿道。尿动力学仪检测MDSCs移植后1、2周的漏尿点压力(leakpointpressure,LPP)和最大膀胱容量。显微镜观察MDSCs移植后1、3、7、10、14d荧光细胞的形态和分布。结果MDSCs移植后第7、14天,SUI大鼠的LPP均显著提高,移植后2周LPP显著高于移植后1周。在MDSCs移植后第1、3天,细胞保持小圆形和短梭形,局限于注射部位;第7天,一部分移植的MDSCs开始分化,分布范围扩大;第10天,一部分MDSCs分化为平滑肌细胞,部分死亡;第14天,一部分细胞分化为肌纤维,而其余细胞发生变性、死亡。结论MDSCs移植后能存活并分化而整合至尿道括约肌,尿道括约肌功能得到改善,提示MDSCs移植可能是治疗压力性尿失禁的有效方法。
- 徐惠成王延洲王丹秦茂林常青梁志清史常旭
- 关键词：肌源性干细胞压力性尿失禁细胞移植
- Smad3基因RNAi慢病毒载体的构建与鉴定被引量：3
- 2009年
- 目的构建Smad3基因RNAi慢病毒载体。方法针对已经筛选确定的Smad3基因RNAi有效靶序列,合成靶序列的Oligo DNA,退火形成双链DNA,与经AgeⅠ和EcoRⅠ双酶切后的pGCSIL-GFP载体连接产生GC-shSmad3慢病毒载体,PCR筛选阳性克隆,测序鉴定。用GC-shSmad3、pHelper 1.0载体和pHelper 2.0载体共转染包装细胞293T细胞,包装产生慢病毒,以293T细胞GFP蛋白的表达水平测定病毒滴度。结果PCR和测序证实,构建出了Smad3 shRNA的慢病毒载体GC-shSmad3。包装慢病毒,浓缩病毒悬液的滴度为3×108TU/ml。结论成功构建Smad3基因RNAi慢病毒载体。
- 王延洲梁志清刘晓芳徐惠成
- 关键词：RNA干扰SMAD3慢病毒
- 肌损伤液对大鼠肌源性干细胞生物学性状的影响
- 2009年
- 目的研究肌损伤局部肌损伤液对大鼠肌源性干细胞（muscle derived stem cells，MDSCs）生物学性状的影响。方法采用差速贴壁法分离培养大鼠MDSCs。制造大鼠肌肉切割伤，用于肌损伤液的提取，比色法检测不同时相肌损伤液蛋白含量，筛选蛋白含量最高时相的肌损伤液作用于MDSCs。四甲基偶氮唑盐比色法（MTT法）和划痕实验检测肌损伤对大鼠MDSCs增殖和迁移的影响。免疫组化法及Western blot检测肌损伤液培养后旺平滑肌动蛋白（α-SMA）和波形蛋白（Vimentin）蛋白表达。结果体积分数为10％的伤口液在体外促进MDSCs的增殖和迁移的能力最强，肌损伤液能促进体外培养小鼠MDSCs生成α-SMA和Vimentin，且呈时间依赖关系。结论肌损伤局部微环境肌损伤液一方面可通过诱导MDSCs的增殖、运动而直接参与修复；另一方面肌损伤液有促进MDSCs向肌成纤维母细胞分化，促进肌纤维化的作用。
- 王延洲梁志清刘晓芳徐惠成
- 关键词：肌源性干细胞纤维化
