国家自然科学基金(30500543)
- 作品数：10 被引量：32H指数：3
- 相关作者：桂耀庭蔡志明郭新唐爱发张键荣更多>>
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- 不同基质蛋白对小鼠胚胎干细胞生殖细胞分化相关基因表达的影响被引量：3
- 2009年
- 目的:探讨不同基质蛋白对小鼠胚胎干细胞(mouse embryonic stem cells,mESCs)分化形成拟胚体(embry-oid bodies,EBs)后生殖细胞分化相关基因表达的影响及机制。方法:mESCs分化形成EBs 3 d后接种于不同基质蛋白包被的培养皿中,包括人工基底膜(matrigel,M组)、纤维连接蛋白(fibronectin,F组)、层粘蛋白(laminin,L组)、胶原(collagen,C组)和非生物活性底物琼脂糖(agarose,A组),同时设不加任何基质蛋白的空白对照组(B组)。RT-PCR检测EBs在不同基质蛋白上d1～d4期间生殖细胞分化相关基因的表达,以及mESCs内源性基质蛋白FN(fibronectin)、LN(laminin)以及整合素受体β1基因的表达。结果:L组和F组EBs易贴壁分化,RT-PCR结果也证实原始生殖细胞(PGCs)分化基因Blimp-1、Stella、Mvh和减数分裂启动基因Stra8在L组和F组表达总体趋势为逐渐增强;M组和C组的表达趋势不明显;A组基因表达水平整体偏低;空白对照B组基因表达水平整体偏高但均呈下降趋势。L组和空白对照组细胞表达内源性基质蛋白FN、LN以及整合素受体β1。结论:层粘蛋白/β1信号途径可能对mESCs向PGCs分化具有指导作用,外源性层粘蛋白可能通过其受体β1亚单位传递诱导信号,调节mESCs来源的EBs向PGCs分化,FN可能通过其他整合素受体亚单位发挥作用。无任何外源性基质蛋白时,自身分泌的内源性基质蛋白也促进细胞分化。
- 郭新漆正宇秦洁崔光辉桂耀庭蔡志明
- 关键词：基质蛋白小鼠胚胎干细胞拟胚体原始生殖细胞
- PigM基因在小鼠中的表达及其在精子发生中的功能探讨被引量：4
- 2006年
- 目的筛选与精子发生相关的基因。方法将不同发育阶段的小鼠睾丸组织cDNA探针与Affymetrix全基因组芯片进行杂交,通过杂交信号的比较,筛选出差异表达的基因。利用网络信息资源对该基因进行生物学信息分析。RT-PCR分析该基因在小鼠不同发育阶段睾丸及小鼠不同组织中的表达。结果通过4、91、8、35、54、日龄和6月龄小鼠睾丸的芯片信号比较筛选出一个差异表达杂交点(GenBank登录号:NM-026234),生物信息学分析发现该基因全长3 979 bp,含有1 272 bp的完整ORF,编码一个有423个氨基酸、分子量为49.788的蛋白质。PigM蛋白与大鼠同源基因PigM蛋白有96%的同源性,与人PigM蛋白有89%的同源性,显示该基因在哺乳动物中高度保守。RT-PCR分析表明PigM基因特异性表达于睾丸组织及18日龄后的小鼠睾丸中。结论PigM基因的表达与小鼠精子发生的过程一致,显示其可能在精子发生中起着重要作用。解释该基因的生物学功能,可对揭示人类无精、弱精和少精引起的男性不育的病因,治疗和预防男不育及寻找新的男子避孕药的靶位点具有重要意义。
- 唐爱发余振东桂耀庭郭新张立兵张键荣刘春霖蔡志明
- 关键词：基因芯片精子发生
- 人胚胎干细胞H1培养条件的优化被引量：1
- 2008年
- 目的:采用不同培养基和饲养层培养人胚胎干细胞H1,建立适合H1细胞增殖的最佳条件并分析其基本生物学特性。方法:鼠源性饲养层采用ICR品系小鼠胚胎成纤维细胞(MEF),人源性饲养层采用人胚胎成纤维细胞系(HFF-1)。H1基本培养基配制分别采用传统DMEM/F12和改良培养基Knock-outTM DMEM。实验共分为MEF+DMEM/F12、MEF+K-DMEM、HFF+DMEM/F12、HFF+K-DMEM组。H1基本生物学特性检测采用免疫荧光、RT-PCR、碱性磷酸酶和核型分析。结果:MEF+DMEM/F12组中H1克隆形态规则,不发生分化,增殖速度快;而MEF+K-DMEM组细胞克隆传代后第4日发生分化;HFF+DMEM/F12组和HFF+K-DMEM组细胞传代后第3日就显示出分化趋势,克隆变扁。MEF+DMEM/F12组中H1细胞保持正常核型和基本生物学特性。结论:不同的人胚胎干细胞系最佳培养条件是不同的,建立的MEF+DMEM/F12组培养条件最适合H1细胞增殖。
- 郭新秦洁张键荣唐爱发余振东石敏桂耀庭蔡志明
- 关键词：人胚胎干细胞细胞培养
- 睾丸特异性基因TSF22在小鼠中的表达研究被引量：3
- 2007年
- 目的筛选与精子发生相关的基因。方法将4、9、18、35、54日龄和6月龄小鼠睾丸组织cDNA探针与Affymetrix全基因组芯片进行杂交,筛选出差异表达的基因。利用网络信息资源对该基因进行生物学信息分析。RT-PCR分析该基因在小鼠睾丸不同发育阶段及小鼠不同组织中的表达。结果芯片结果分析筛选出一个差异表达杂交点(GenBank登录号:NM_199034),生物信息学分析发现该基因全长1597bp,含有570bp的完整ORF,编码190个氨基酸、分子量为22.106kDa的蛋白质,我们将其命名为TSF22。RT-PCR分析表明TSF22基因特异性表达于睾丸组织及18日龄小鼠睾丸中。结论TSF22基因的表达与小鼠精子发生的过程一致,可能在精子发生中起重要作用。
- 唐爱发余振东桂耀庭郭新张立兵张键荣刘春霖蔡志明
- 关键词：精子发生基因芯片
- SPACA4基因在人和小鼠的表达及其生物信息学分析被引量：1
- 2007年
- 目的 分析SPACA4在小鼠和人的表达特性.方法 本研究通过对小鼠SPACA4基因（mSPACA4）在4、9、18、35、54d和6月龄小鼠睾丸中的Affymetrix芯片杂交,结合RT-PCR实验和生物信息学软件,分析mSPACA4及其同源基因hSPACA4的表达特性.结果 芯片杂交结果显示,mSPACA4基因在小鼠35d睾丸中开始表达,半定量RT-PCR结果与之完全一致.RT-PCR结果还显示,mSPACA4和hSPACA4分别在8种小鼠组织和10种人组织中呈现睾丸特异性表达.生物信息学分析显示,亚细胞定位预测该基因是跨膜蛋白（34.8%）或质膜上（34.8%）表达.mSPACA4蛋白的信号肽剪切位点在第19～20个氨基酸之间,跨膜区在第2～20及101～126个氨基酸之间.结论 mSPACA4和hSPACA4均为睾丸特异性表达基因,mSPACA4特异性地在35d龄后的小鼠睾丸中表达,SPACA4具有作为男子避孕药的靶点进行研究的潜在价值.
- 唐爱发余振东桂耀庭郭新龙云李贤新周锦堂朱辉高新蔡志明
- 关键词：基因芯片精子发生
- Differential expression of VASA gene in ejaculated spermatozoa from normozoospermic men and patients with oligozoospermia被引量：11
- 2007年
- 瞄准：在人的呼喊的精子检测 VASA 的表示，并且把在 normozoospermic 人和病人之间的 VASA 的表示与 oligozoospermia.Methods 作比较：呼喊的精子被手淫从 normozoospermic 人和病人 witholigozoospermia 收集，并且随后通过不连续的坡度 ofPercoll 分离了获得精子。反向的抄写聚合酶链反应(RT-PCR ) ，量的 RT-PCR (QRT-PCR ) ， immunoflurescence 并且西方的弄污被用来在 mRNA 和蛋白质层次检测 VASA 的表示。结果：VASA mRNA 在呼喊的精子被表示。QRT-PCR 分析证明那 VASA mRNA 水平更高是近似 5 褶层 innormozoospermic 人比那在 oligozoospermic 人。Immunofluorescence 和西方的弄污分析证明那 VASA 蛋白质位于头的细胞质的膜和精子的尾巴，并且它的表示显著地在 oligozoospermic 人被减少，它类似于 QRT-PCR 的结果。结论：VASA mRNA 和蛋白质的表示显著地在 oligozoospermic 人的精子被减少，它建议 VASA 基因的更低的表示可能在男不孕的一些子类型与致病被联系， VASA 能为男不孕的诊断被用作一个分子的标记。
- Xin GuoYao-Ting GuiAi-Fa TangLi-Hua LuXin GaoZhi-Ming Cai
- 关键词：少精症患者VASA基因
- 体外分化过程中小鼠拟胚体的细胞学特征及基因表达模式被引量：3
- 2008年
- 目的探讨小鼠胚胎干细胞来源的拟胚体(EBs)形成以及分化发育90d过程中的形态学特征及基因表达模式。方法将小鼠胚胎干细胞通过悬浮培养获得EBs,EBs在不添加其他诱导因子的体系中连续悬浮培养,采用形态学观察、免疫组织化学染色和RT-PCR检测EBs培养过程中的细胞发育分化特征和基因表达模式。结果将胚胎干细胞转移到去除白血病抑制因子(LIF)的悬浮培养液中培养24h左右即可形成EBs;培养3d左右,部分EBs出现简单胚体结构;在EBs分化7d左右,逐步向空腔化胚体发育;培养9d左右,EBs可发育为原始的囊性胚体结构;培养11d左右,EBs形成典型的、结构完整的三胚层结构。HE染色结果显示,发育早期的EBs包含大量尚未完全分化的ES细胞,随着培养时间的延长,EBs向空腔化、囊性胚体发育,逐渐形成类似于早期组织的形态。悬浮培养7周左右,EBs的发育分化基本停止。免疫组织化学染色结果表明,中胚层心肌细胞特异性标志蛋白cTnT,外胚层特异性标志蛋白Nestin在15d的EBs中表达呈阳性。RT-PCR检测也显示形成的EBs表达外胚层特征性基因Vimentin、Nestin,中胚层特征性基因Flk-1、Gata-1和内胚层特征性基因Transthyretin、-αfetoprotein。结论小鼠胚胎干细胞来源的EBs具有分化为3个胚层的能力,EBs形成的三维结构能够有效的启动细胞的分化;EBs来源的三胚层细胞的发育分化时序和特征,将为鉴定胚胎干细胞来源的分化细胞提供重要参照。
- 秦洁郭新张键荣桂耀庭蔡志明
- 关键词：胚胎干细胞拟胚体分化小鼠
- 睾丸细胞间隙连接通道的研究进展
- 2008年
- 睾丸里的生殖细胞从增殖、减数分裂到分化成熟是一个受到严格调控的过程，这个过程需要睾丸细胞间密切的联系。间隙连接是位于细胞膜上连接相邻细胞间的通路，在精子发生的启动和维持上有重要作用。本文着重介绍哺乳动物睾丸中细胞的间隙连接通道，连接蛋白的分布、其对精子发生的重要作用以及连接蛋白的调控因子等。并对病理状态下睾丸组织细胞间的间隙连接和连接蛋白的变化进行概要介绍。
- 周德荣桂耀庭蔡志明
- 关键词：睾丸细胞外隙
- 胚胎干细胞分化过程中的表观遗传调控被引量：3
- 2007年
- 作为一类既有自我更新能力,并具有多向分化潜能的细胞,胚胎干细胞具有非常重要的理论研究意义和临床应用前景。近期以胚胎干细胞为模型,研究有关干细胞分化的表观遗传调控已成为新的研究热点。本文就胚胎干细胞分化过程中DNA甲基化、组蛋白修饰、非编码RNA调控以及与胚胎干细胞分化密切相关的表观遗传学动态变化做一概述,对表观遗传学改变与胚胎干细胞分化关系的基础研究进行探讨。
- 秦洁郭新桂耀庭唐爱发蔡志明
- 关键词：胚胎干细胞分化表观遗传
- 精子发生相关基因VASA在正常和少精子症患者精子中的表达及意义被引量：6
- 2006年
- 目的探讨生殖细胞高度特异性基因VASA和信号分子BMP-4在精子发生中的作用和相关机制。方法正常和少精子症患者精液通过Percoll梯度分离获得精子和未成熟生精细胞,采用RT-PCR、real-time PCR、Western Blot和免疫荧光方法分析基因转录产物表达。结果少精子症精子VASA基因转录产物是正常精子的1/5；两种样本精子中均检测到荧光信号,正常组信号强,与Western blot结果相一致；两种样本精子RT-PCR均未检测到BMP-4及其Ⅰ型受体Alk-3表达,但在分离的未成熟生精细胞中均表达。人正常睾丸组织可检测到BMP- 4及其Alk-3表达。结论少精子症患者精子发生过程中VASA基因及其产物发生变化；BMP-4及其受体Alk- 3并不直接上调VASA表达；睾丸组织包括精子所存在的部分转录产物,而精子转录产物并不完全等同于睾丸组织；睾丸组织内表达BMP-4和Alk-3的可能主要是精原和精母细胞。
- 郭新桂耀庭唐爱发李泽廷张立兵蔡志明高新
- 关键词：精子发生基因表达少精子症
