军队“十五”医药卫生科研基金(02Z0010)
- 作品数：2 被引量：1H指数：1
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- 钙调神经磷酸酶Aβ小干扰RNA筛选及对心肌细胞肥大的抑制
- 2012年
- 目的在细胞水平上筛选钙调神经磷酸酶(CaN)Aβ基因(mRNA)的小干扰RNA(siRNA)的干扰序列,为研究抑制在体心肌肥大的方法提供理论基础。方法针对CaNAβmRNA,参照siRNA设计原则,应用软件设计候选干扰序列,构建相应的小发夹RNA表达载体(si1053,si1280,si1539)。培养乳鼠心肌细胞,分为6组:空白对照组,肥大模型组(醛固酮诱导),肥大+si1280组,肥大+si1539组,肥大+si1053组,肥大+siGFP阴性对照组(转染针对GFP特定序列的shRNA质粒)。48h后显微镜下测量心肌细胞直径、CaNAβ及心房利钠因子(ANF)、β-重链肌球蛋白(β-MHC)mRNA水平。结果肥大模型组心肌细胞直径以及心肌组织CaNAβ、ANF、β-MHCmRNA表达水平较空白对照组明显增加(P<0.05)。肥大+si1053、肥大+si1280、肥大+si1539组细胞直径以及CaNAβ、ANFmRNA水平均较肥大模型组及肥大+siGFP阴性对照组降低(P<0.05),3组之间的CaNAβmRNA水平无明显差异(P>0.05),其中肥大+si1280组的细胞直径、ANF及β-MHCmRNA水平较肥大+si1053组、肥大+si1539组有明显减低(P<0.05)。结论成功构建CaNAβmRNA的小发夹RNA表达质粒,siRNA抑制CaNAβmRNA的表达,可抑制细胞水平醛固酮诱导的心肌细胞肥大;其中1280(21bp)为RNA干扰的相对更有效片段。
- 齐迎春谢晓华陈雯李朝晖
- 关键词：RNA干扰转染心肌细胞
- 经心包腔途径转染提高大鼠体内心肌细胞转染的效率被引量：1
- 2012年
- 背景:如何获得安全、有效、广泛心肌组织的转染一直是国内外学者研究的热点。目的:探讨能够改善动物水平心肌组织非病毒载体的转染效率、增强基因导入靶向性的方法。方法:以β半乳糖苷酶质粒PLacZ作为报告基因,将Wistar大鼠随机分为5组:①空白组。②心包腔内组:心包腔注射质粒+微泡+酶混悬液,超声导入。③心包腔内阴性对照组:以生理盐水代替质粒干预。④舌下静脉组:舌下静脉注射质粒+微泡混悬液,超声导入。⑤舌下静脉阴性对照组:以生理盐水代替质粒干预。注射6d后处死,进行心、肺、肝、肾组织的X-gal染色。结果与结论:转染6d后,仅有心包腔内组大鼠的部分心肌细胞在心尖、心室及心房水平可见明显的蓝染,其他各组大鼠心肌X-gal染色为阴性;各组大鼠肺、肝、肾组织X-gal染色均为阴性。提示采用心包腔内途径转染、再辅以超声微泡导入以及酶类的使用,可明显改善质粒对在体心肌细胞的转染效率,且不伴有心外组织目的基因的表达,具有较好的靶向性。
- 齐迎春谢晓华陈雯李朝晖
- 关键词：心包心肌细胞SIRNARNAI转染
