国家林业局大熊猫国际合作项目(WH0632)
- 作品数：2 被引量：6H指数：2
- 相关作者：陈德坤朱辉乔琪朱小甫乔琦更多>>
- 相关机构：西北农林科技大学咸阳职业技术学院更多>>
- 发文基金：国家林业局大熊猫国际合作项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 大熊猫秦岭亚种IL-2基因的克隆表达及其生物活性研究被引量：3
- 2009年
- 目的:明确大熊猫四川种群和秦岭种群IL-2在基因水平是否存在差异;得到具有具有生物活性的秦岭大熊猫IL-2原核表达产物。方法:采用RT-PCR方法从ConA诱导培养的秦岭大熊猫外周血淋巴细胞总RNA中扩增得到IL-2的cDNA片段,利用DNA重组技术构建原核表达载体pET32a-IL-2,转入BL21(DE3)中,以IPTGBL21(DE3)表达IL-2融合蛋白。融合蛋白进行SDS-PAGE和Western blot进行鉴定及可溶性分析;用纯化的融合蛋白免疫家兔,制备多克隆抗体;采用淋巴细胞增殖试验测定融合蛋白生物活性。结果:通过重组表达获得IL-2抗原蛋白,相对分子质量(Mr)为34000;免疫家兔得到特异性的抗IL-2抗体,该抗体能够检测细胞内源性IL-2蛋白的表达;融合蛋白具有促进淋巴细胞转化增殖的生物学活性,并且它的这种作用可被本研究制备的多抗所抑制。结论:成功克隆了秦岭大熊猫IL-2基因,与四川大熊猫核苷酸同源性为99.4%表达了具有生物活性的融合蛋白。
- 乔琦马清义朱辉陈德坤
- 关键词：秦岭大熊猫IL-2克隆多克隆抗体生物活性
- 秦岭大熊猫IFN-γ基因的表达及其生物活性分析被引量：3
- 2009年
- 【目的】探讨大熊猫秦岭种群和四川种群IFN-γ基因的差异,获得具有生物活性的秦岭大熊猫重组γ干扰素蛋白。【方法】采集秦岭大熊猫血样,采用RT-nested PCR技术扩增秦岭大熊猫IFN-γ基因,将其克隆到表达载体pET32a中,转入DH-5α,进行菌液PCR和双酶切鉴定,经序列测定与分析,构建表达质粒pET32a-IFN-γ,将其转入BL21(DE3)受体菌后,用IPTG诱导表达秦岭大熊猫IFN-γ蛋白。对重组IFN-γ蛋白进行SDS-PAGE电泳、Western-blot分析后,用镍柱亲和层析纯化可溶性蛋白。采用淋巴细胞增殖试验检测重组IFN-γ的活性。【结果】大熊猫秦岭种群和四川种群的IFN-γ基因序列在434位核苷酸处存在差异,秦岭大熊猫的为G,而四川大熊猫的为C;氨基酸序列相同。重组IFN-γ主要以可溶性形式存在,其分子质量为35.3 ku,约占菌体总蛋白的20%;纯化的可溶性蛋白经SDS-PAGE分析,纯度可达90%以上;重组IFN-γ具有促进淋巴细胞转化增殖的生物学活性。【结论】获得的重组IFN-γ蛋白表达量高且具有生物学活性。
- 朱辉马清义乔琪朱小甫陈德坤
- 关键词：秦岭大熊猫IFN-Γ基因基因表达生物活性
