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荧光PCR技术在金黄色葡萄球菌肠毒素分型筛查中的应用被引量：3: 2011年; 目的:建立一种简便、特异的荧光定量PCR检测方法,用于金黄色葡萄球菌肠毒素的快速筛查检测。方法:按金黄色葡萄球菌肠毒素SEA～SEQ基因序列设计不同引物,在普通PCR检测体系中,加入SYBR Green I荧光染料,建立荧光PCR检测体系。对本课题组2006年-2009年分离的191株金葡菌进行SEA～SEQ基因检测。结果:荧光PCR法检测出金黄色葡萄球菌肠毒素阳性97株,阳性率为50.8%。肠毒素类型分布由高到低依次为A、C、B、D、E和G型。以ELISA方法作对照,荧光PCR检测法的灵敏度为100%,特异度为97.9%。结论:建立的荧光PCR检测金黄色葡萄球菌的肠毒素的方法可用于金黄色葡萄球菌肠毒素基因分型,具有快速、敏感、特异性高的特点。; 石晓路扈庆华林一曼邱亚群李迎慧王冰; 关键词：金黄色葡萄球菌肠毒素荧光PCR

葡萄球菌和蜡样芽胞杆菌肠毒素液相悬浮芯片方法的建立: 2012年; 目的采用Luminex液相悬浮芯片检测方法,建立一管同时检测19种葡萄球菌肠毒素和蜡样芽胞杆菌肠毒素的快速筛查方法。方法根据GenBank公布的葡萄球菌肠毒素entA-entR基因、蜡样芽胞杆菌cesB,nheB基因,设计特异性引物和探针,优化反应体系和条件,建立19种肠毒素的Luminex液相悬浮芯片检测法。结果 Luminex液相悬浮芯片体系检测19种肠毒素互不干扰,经验证80株金葡菌和蜡样芽胞杆菌菌株,均出现特异性荧光中值信号。Lu minex液相悬浮芯片技术从样品处理到检测结果需3.5h左右。结论 Luminex液相悬浮芯片筛查方法可应用于食物中毒等应急检测的快速和高通量筛查。; 石晓路吕冬月林一曼邱亚群李迎慧扈庆华; 关键词：葡萄球菌蜡样芽胞杆菌肠毒素

蜡样芽胞杆菌食物中毒分离株分子分型分析被引量：9: 2011年; 目的建立蜡样芽胞杆菌的分子分型方法,应用于蜡样芽胞杆菌食物中毒的溯源研究。方法从2000-2009年广东省深圳市食物中毒暴发和散发病例的临床分离株中挑选47株蜡样芽孢杆菌进行鉴定及生化分型,同时进行vrrA基因PCR扩增并对产物进行测序,用Bio-edit和MEGA软件对DNA序列进行同源性比较。结果传统生化分型:47株蜡样芽胞杆菌中有5株菌不能分型,其余42株菌可分为2型、10型和4型,其中2型16株,占34.04%,10型16株,占34.04%,4型10株,占21.28%;分子分型:47株菌可分为13个基因型MT1-MT13,其中MT13型19株,占40.43%,MT1型8株,占17.02%,MT10型4株,占8.51%。结论 vrrA基因作为蜡样芽胞杆菌分子分型的一个多态性遗传标记,可用于蜡样芽胞杆菌DNA分子分型研究,对食物中毒溯源有重要意义。; 林一曼石晓路邱亚群李迎慧扈庆华杨杰; 关键词：蜡样芽孢杆菌分子分型 DNA序列

一起蜡样芽孢杆菌10型引起食物中毒的快速诊断与分子分型研究被引量：2: 2010年; 目的对引起一起食物中毒的蜡样芽孢杆菌进行快速诊断和分子分型。方法对中毒人员的呕吐物、肛拭子、可疑食品等样品用国标方法进行实验室检测,同时采用自主建立的荧光PCR方法进行快速检测。所分离的菌株PCR扩增vrrA基因多态性位点,产物进行基因双向测序和比较分析。结果在10份呕吐物、肛拭子、可疑食品中用传统方法和荧光PCR方法同时检出8份蜡样芽孢杆菌阳性,生物分型为10型。PCR测序结果显示它们有99%的同源性。结论这是一起食用了由蜡样芽孢杆菌10型污染的食品引起的呕吐型食物中毒,用蜡样芽孢杆菌呕吐毒素基因cesB为检测靶标的荧光PCR方法可以快速灵敏地对此类食物中毒进行初步诊断。以vrrA基因为多态性位点的PCR基因测序方法可用于蜡样芽孢杆菌的分子分型和食品污染源的准确追踪。; 邱亚群石晓路扈庆华林一曼李迎慧; 关键词：蜡样芽孢杆菌食物中毒荧光PCR 测序分子分型

深圳市甲型副伤寒PulseNet数据库的建立与应用: 2010年; 目的建立深圳市甲型副伤寒PulseNet数据库,用于甲型副伤寒的实时监测和分子流行病学调查。方法采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)技术,对深圳市2002-2007年散发和爆发的243株甲型副伤寒沙门菌的染色体DNA进行酶切电泳,用BioNumerics软件对PFGE分型图谱电子化数据分析,建立分子分型数据库。结果深圳市甲型副伤寒菌株各年间差异较小,用Xba酶切仅呈现6种PFGE图谱。同一起甲副暴发的临床分离株具有相同的PFGE图谱。各区和各年代的分离株都存在有相同的PFGE带型。结论深圳市甲型副伤寒沙门菌变异较小,呈长期流行趋势,甲型副伤寒PulseNet数据库的初步建立,对直观地分析各起疫情之间的相互关系,对疫情的控制和传染来源的追踪具有重要意义。; 石晓路扈庆华王冰林一曼程锦泉马汉武阚飙徐建国; 关键词：甲型副伤寒脉冲场凝胶电泳 PULSENET

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深圳市科技计划项目(200902085)