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实时荧光定量PCR检测人IL-9 mRNA方法的建立及应用被引量：1: 2010年; 目的：建立检测人白介素-9（interleukin-9，IL-9）mRNA的SYBR Green I实时荧光定量PCR（real—time fluorescence quantitative PCR，qRT—PCR）方法。方法：分离人外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear ceils，PB—MC），经PMA和离子霉素刺激活化后提取总RNA并逆转录成cDNA。扩增产物与pMD-18T载体连接构建质粒标准品。采用qRT—PCR方法检测IL-9mRNA的表达水平。评价该方法的线性及特异性，应用该方法检测Graves病患者PBMC中IL-9 mRNA表达水平。结果：建立了人IL-9的SYBR Green I实时荧光定量PCR检测方法。该法的标准曲线相关系数r^2为0．995～0．998，熔解随线分析产物为单峰。Graves病患者PBMC中IL-9 mRNA的相对表达水平明显高于健康对照组（P〈0．01）。结论：建立的检测人IL-9 mRNA的SYBR Green I实时荧光定量PCR方法灵敏、特异性好，为进一步临床应用提供了实验基础。; 杨先知史烨柳迎昭陈建国田洁刘艳刘青玲苏兆亮仝佳马斌马洁邵启祥许化溪王胜军; 关键词：白细胞介素-9 实时荧光定量PCR SYBR

胶原诱导性关节炎小鼠Th17细胞的检测及意义被引量：3: 2010年; 目的:研究Th17细胞及其相关细胞因子白细胞介素-17(IL-17)在胶原诱导性关节炎(collagen-induced ar-thritis,CIA)小鼠体内的变化。方法:利用Ⅱ型胶原蛋白建立小鼠CIA模型。应用流式细胞术(FCM)分析小鼠脾脏及引流淋巴结中Th17细胞的比例,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测小鼠血清中IL-17的含量。结果:CIA小鼠脾脏及引流淋巴结中Th17细胞的比例分别为(3.19±0.70)%、(3.54±0.97)%,显著高于正常对照组的(0.95±0.34)%、(1.31±0.47)%,P<0.01。CIA小鼠血清中IL-17的含量也明显高于正常对照组(P<0.05)。结论:Th17细胞及其分泌的细胞因子IL-17在CIA小鼠体内明显升高,并与疾病的发生密切相关。; 史烨马洁苏兆亮杨先知马斌田洁刘艳刘青玲邵启祥许化溪吕力为王胜军; 关键词：TH17细胞白细胞介素-17 胶原诱导性关节炎

小鼠GITR真核表达载体的构建及表达: 2011年; 目的:构建小鼠GITR(mGITR)的真核表达载体,转染COS-7细胞表达小鼠GITR蛋白。方法:用TRIzol试剂抽提小鼠脾细胞总RNA,经RT-PCR扩增出GITR全长基因,构建真核重组载体pIRES2-EGFP-mGITR,经鉴定后采用脂质体介导DNA法转染COS-7细胞。结果:从小鼠脾细胞中成功扩增得到GITR全长基因。重组载体pIRES2-EGFP-mGITR转染COS-7细胞后,经荧光显微镜观察可见绿色荧光,提取蛋白后经蛋白质印迹鉴定有目的蛋白mGITR。结论:成功构建了小鼠GITR基因的真核表达载体pIRES2-EGFP-mGITR,转染COS-7细胞后mGITR蛋白获得成功表达。; 沈培郑东刘艳田洁赵银霞刘青玲朱晨露马洁苏兆亮马斌许化溪王胜军; 关键词：真核表达转染 COS-7细胞

结直肠癌组织中GITRL mRNA表达水平的检测及其临床意义被引量：1: 2011年; 目的:建立检测人糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体配体(human glucocorticoid induced tumor necrosis factor receptor ligand,hGITRL)mRNA的实时荧光PCR方法,探讨hGITRL表达与结直肠癌发生发展的关系。方法:构建含hGITRL基因片段的标准质粒,通过实时荧光PCR检测20例结直肠癌组织与对应癌旁组织中GITRLmRNA的表达水平。结果:建立的hGITRLRT-PCR基因定量检测方法准确可靠(标准曲线相关系数为0.99983);在20例结直肠癌组织细胞中,GITRL表达水平较之对应的癌旁组织有所升高(P<0.05),且与肿瘤组织分型和临床分期存在相关性。结论:成功建立了检测hGITRLmRNA的实时荧光定量PCR方法,GITRL在结直肠癌组织细胞中表达量升高,且与癌症的严重程度呈现一定的相关性。; 邹晨陈锁成吉均祥蒋鹏程王胜陈建国杨先知王胜军; 关键词：结直肠癌实时荧光定量PCR

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江苏省自然科学基金(08KJB320002)